Что за мемы с любопытным псом, который подглядывает за соседями на видео

Забавное видео с золотистым ретривером, который шпионит за соседской собакой через щель в заборе, завирусилось в интернет-пространстве. На нём любопытный пёс так мило подсматривал за чужой территорией, что теперь в комментариях люди требуют расширить глазок, чтобы питомцу было удобнее занимать свой пункт наблюдения. Однако другим пользователям Сети внимательное животное напомнило ситуацию, когда томишься в ожидании доставки.

Хозяева золотистых ретриверов Феникса (Фифи) и Бостона ведут аккаунт в тиктоке и делятся буднями своих питомцев. В одном из последних роликов зрители увидели любопытного пса, подсматривающего за соседями, а точнее за собакой, которая проживает по ту сторону изгороди. Фифи внимательно вглядывалась в отверстие в заборе, будто бы действительно шпионила.

Люблю шпионить за лучшим другом по соседству, — сообщается в подписи к видео.

Поведение Феникса позабавило пользователей Сети почти так же, как необычное приветствие овчарки Клео, о которой ранее рассказывал Medialeaks. При встрече своего друга-пса собака медленно крадётся, словно притворяясь кошкой.

После того, как хозяин Фифи показал свою хитрую любимицу, он направил камеру на дырку на заборе, чтобы зрители могли увидеть, за кем наблюдает милый ретривер. За изгородью находился белый и пушистый пёс по кличке Бентли, который мирно отдыхал на ступеньках соседского дома.

После того, как ролик стал популярным, набрав почти 217 тысяч просмотров, люди в комментариях начали упрашивать собачников расширить отверстие в заборе, чтобы питомцам было удобнее наблюдать друг за другом. Некоторые пользователи соцсети решили, что шпионским навыкам Фифи может позавидовать даже известный агент 007 — Джеймс Бонд.

Любопытный ретривер и впрямь напоминает различные бытовые ситуации. Например, когда человек ждёт доставку еды, постоянно смотря в дверной глазок.

Когда заказал доставку, а прошло десять секунд, и курьер ещё не приехал.

Пёс выглядит словно работник, проверяющий остатки на зарплатной карте.

Когда проверяешь баланс карты спустя три дня после зарплаты.

Собака, всматривающаяся в отверстие в заборе, похожа на кадр из серии мультсериала «Гриффины», когда главный герой подглядывал за девушками в женской раздевалке.

Жалкая пародия, неповторимый оригинал.

Ретривер будто бы снова ждёт тепла и летнего солнца.

Когда лето только прошло, а ты уже ждёшь следующего.

Возможно, каждый интернет-пользователь хотя бы раз был на месте хитрого пса, когда заходил на недоступные в стране проживания сайты при помощи безопасного подключения к Сети.

Когда сайт недоступен в вашем регионе, но у тебя подключен VPN.

Ещё любопытный питомец напоминает свидетелей Иеговы, ожидающих на пороге дома.

Здравствуйте, вы хотите поговорить о боге?

Или ситуацию, когда человек ждёт, пока соседи уйдут с лестничной площадки.

Когда в подъезде стоят соседи, и ты ждёшь, пока они уйдут, чтобы выйти.

Ранее Medialeaks рассказывал, как другое животное стало мемом о бытовой беспомощности парней. Кот по кличке Бендер настолько по-человечески показывает эмоции, что пользовательницы Сети начали сравнивать питомца со своими бойфрендами, у которых возникают сложности, когда остаются одни дома.

Учёные нашли у щенков врождённую склонность к общению с людьми

Американские учёные обнаружили, что собаки с рождения обладают навыками, позволяющими им активно взаимодействовать с людьми. Об этом сообщает EurekaAlert.

Учёные из Университета Аризоны провели исследование с участием 375 двухмесячных щенков, которые с рождения мало общались с людьми. В основном в экспериментах участвовали лабрадоры и золотистые ретриверы. В одном из тестов исследователи прятали еду под одной из нескольких чашек и указывали на ту, под которой находится лакомство. В другом эксперименте учёные общались с щенками особым «собачьим» голосом, то есть на более высоких тонах. Реакция собак на жесты и команды тщательно анализировалась, также измерялось время, на протяжении которого щенки смотрели на человека.

Результаты показали, что щенки прекрасно воспринимали информацию от человека и пользовались ею, несмотря на отсутствие соответствующего опыта. В контрольной группе, где собаки должны были найти еду самостоятельно, они не скулили и не подходили к людям. Это говорит о том, что щенки с рождения способны реагировать на сигналы, инициированные человеком, но способность самостоятельно начать коммуникацию развивается позже.

Ранее мы уже получали доказательства того, что такого рода социальные навыки присутствуют во взрослом возрасте, но здесь мы видим, что щенки биологически готовы [с рождения] взаимодействовать с человеком, — заключила ведущий автор исследования Эмили Брэй.

Ранее учёные установили, что просмотр видеороликов с животными способен снижать уровень стресса.

Смотрите нас на Youtube

Минздрав ФРГ предложил сделать ″правило 2G″ единым для массовых мероприятий | Новости из Германии о Германии | DW

Министр здравоохранения ФРГ Йенс Шпан (Jens Spahn) выступил за единые для всей Германии коронавирусные правила проведения массовых мероприятий в сфере культуры и услуг. «Было бы идеально, если бы все федеральные земли договорились ввести «правило 2G», — приводят слова Шпана издания медиагруппы Funke в понедельник, 20 сентября. Глава Миздрава напомнил, что сейчас в стране действуют 16 разных правил проведения концертов и иных мероприятий, так как каждая земля «идет собственным путем».

Тем временем, как указывает агентство AFP, во все большем числе федеральных земель прибегают именно к модели 2G, при которой заведения общественного питания и культурно-массовых мероприятия разрешено посещать только перенесшим ковид («genesen») или вакцинированным («geimpft»). Для тех же, кто может предъявить лишь отрицательный результат теста на коронавирус, вход закрыт. В заведениях, где применяется «правило 2G», обычно не требуется носить защитные маски и соблюдать социальную дистанцию.

Одновременно Йенс Шпан сообщил, что вакцина для прививки от коронавируса детей в возрасте до 12 лет может быть одобрена ориентировочно в первом квартале 2022 года. Несколько дней назад немецкий производитель вакцин Biontech заявил, что его вакцина для детей в возрасте от 5 до 11 лет может быть допущена на рынок уже в конце текущего года.

Коронавирус в Германии

По данным Института имени Роберта Коха (RKI), к утру 20 сентября на территории Германии с начала пандемии выявлено в общей сложности 4 145 852 инфицированных коронавирусом, причем 3736 человек — за последние сутки. Число скончавшихся от пневмонии COVID-19 за минувшие сутки возросло на 13 — до 92 971. Снижавшийся шесть дней подряд средний по стране показатель инфицирования за последнюю неделю слегка увеличился — до 71,0 на 100 тысяч населения. Днем ранее он составлял 70,5, а неделей ранее — 81,9.

Как отмечают в Институте Коха, число зарегистрированных новых случаев инфицирования в выходные дни обычно ниже, чем в среднем за неделю. Это связано с меньшим количеством тестов и более длительной передачей данных федеральными землями.

Смотрите также:

• Коронавирус в Германии — 2020

  Без святой воды

  Первую фотографию в нашей рубрике «Кадр за кадром», связанную с пандемией коронавируса в Германии, мы опубликовали 28 февраля 2020 года. Именно тогда в самом посещаемом немецком храме приняли меры по профилактике распространения инфекции — в том числе, перестали наполнять чаши для святой воды. Прочитать эту и другие публикации можно, нажав на «+» справа над текстом или на ссылки под галереей.

• Коронавирус в Германии — 2020

  Осел в маске

  В 2020 году мы видели много разных памятников в масках. Вот, например, фотография из Бремена, сделанная в конце марта. Обычно здесь следует подержаться за ногу осла и загадать желание, но из-за распространения коронавирусной инфекции от этого во время пандемии лучше воздержаться.

• Коронавирус в Германии — 2020

  Оставайтесь дома!

  Самолет с таким баннером могли наблюдать в конце марта в небе над городом жители Гамбурга. В связи с пандемией коронавирусной инфекции подобные призывы появились в Германии повсюду — например, в виде хештегов #zuhausebleiben и #stayathome на экранах телевизоров или трафаретных граффити на тротуарах.

• Коронавирус в Германии — 2020

  Съедобная бумага

  Готовясь уйти на многонедельный карантин из-за коронавируса, жители Германии весной особенно охотно закупали впрок макаронные изделия, муку, крупы и туалетную бумагу. Спрос на последнюю увеличился на 700 процентов! Полки опустели. В одной кондитерской в Дортмунде решили выпускать свой вариант этого товара повседневного спроса — сдобные рулоны.

• Коронавирус в Германии — 2020

  Любовь во время короны

  Эти фотографии были сделаны в конце марта на датско-германской границе около Зюдерлюгума. Из-за пандемии граница была закрыта, но эти влюбленные пенсионеры — 89-летний немец Карстен Тюхзен Хансен и 85-летняя датчанка Инга Рассмусен — нашли решение проблемы. Они встречались каждый день — устраивали посиделки около шлагбаума.

• Коронавирус в Германии — 2020

  Хоум-офис для балерины

  Так во время весеннего локдауна проходили репетиции берлинского Государственного балета — транслировались через веб-камеру. Эта фотография сделана в однокомнатной квартире балерины Вивиан Ассал Кохнавард. В театральной мастерской для артистов изготовили специальные напольные покрытия, чтобы они могли выполнять упражнения у себя дома.

• Коронавирус в Германии — 2020

  Дурацкий коронавирус!

  В 2020 году из-за коронавируса пасхальный декор в Германии несколько отличался от традиционного. Например, такого пасхального зайца установили около школы в баварском Оттенхофене — из соломы, в баварских кожаных штанах и с табличкой «Дурацкий коронавирус»!

• Коронавирус в Германии — 2020

  Без Октоберфеста

  Эта фотография сделана в Мюнхене в апреле. Глава баварского правительства Маркус Зёдер идет на пресс-конференцию, чтобы сообщить об отмене традиционного Октоберфеста за пять месяцев до запланированного начала. Символический снимок. Октоберфест и другие многолюдные народные праздники, музыкальные, винные и прочие фестивали во время пандемии в Германии не состоялись.

• Коронавирус в Германии — 2020

  Маски для монархистов

  Задержимся в Баварии. Раньше портреты короля Людвига II украшали разные баварские сувениры. Во время пандемии этого популярного и любимого монарха, построившего замок Нойшванштайн, можно было увидеть на защитных масках.

• Коронавирус в Германии — 2020

  Концерт на грузовике

  Еще одним признаком коронавирусного времени стали концерты музыкантов в необычных местах или необычных форматах. Кэмерон Карпентер — единственный в мире органист, владеющий личным концертным органом. В начале мая он совершил турне по Берлину, чтобы поддержать людей во время пандемии. Эти фотографии сделаны во время выступления перед одним из столичных домов престарелых в районе Шпандау.

• Коронавирус в Германии — 2020

  Первая тренировка

  В рамках послабления карантинных мер в Германии 11 мая в некоторых немецких регионах после многонедельного перерыва вновь открылись первые фитнес-клубы. Эти фотографии были сделаны в Кельне в одном из таких центров. Он работает круглосуточно и поэтому распахнул двери для посетителей ровно в полночь. Условием открытия таких спортивных клубов являлось соблюдение строгих мер гигиены и дистанции.

• Коронавирус в Германии — 2020

  Очереди за щенками

  Летом немецкие собаководы сообщили о небывалом спросе на щенков. В частности, многие из тех, кто давно собирался завести собаку, работая в режиме хоум-офиса, посчитали нынешний момент особенно подходящим, так как почти все время находятся дома. Большой популярностью пользовались лабрадоры и золотистые ретриверы.

• Коронавирус в Германии — 2020

  Кинотеатр для олдтаймеров

  После начала пандемии в Германии повсюду стали открываться автомобильные кинотеатры. Эти фотографии были сделаны в нижнесаксонской коммуне Худе во время сеанса, организованного специально для владельцев олдтаймеров. Фильм был подобран в соответствии с интересами публики — «Ford против Ferrari».

• Коронавирус в Германии — 2020

  Пустые бордели

  Многие бордели и секс-клубы в Германии после нескольких месяцев коронавирусного локдауна оказались на грани банкротства — они оставались закрытыми даже после того, как работу возобновили парикмахерские, фитнес-клубы, бассейны и сауны. 16 июля некоторые публичные дома в разных регионах страны — например, в Гамбурге — провели день открытых дверей, чтобы привлечь внимание к сложной ситуации.

• Коронавирус в Германии — 2020

  Не поедем на Майорку

  Из-за боязни отправляться в дальние края многие немцы предпочли в 2020 году отдыхать летом на море дома — на пляжах Балтийского и Северного морей. Так курорт Тиммендорфер-Штранд выглядел в один из выходных дней в июле. Доступ на некоторые пляжи приходилось периодически перекрывать из-за переизбытка желающих поплавать в море и полежать на солнышке в непосредственной близости от воды.

• Коронавирус в Германии — 2020

  И яйца, и радость

  Во время пандемии жители Германии стали чаще заводить кур в качестве домашних животных — и детям радость, и свежие яйца к столу. Этот тренд наметился еще до начала пандемии, но из-за локдауна и прочих, так сказать, побочных коронавирусных последствий стал еще более очевидным. Эти фотографии агентства dpa были сделаны в сентябре около дома семьи Вагнеров из баварского Бад-Грёненбаха.

• Коронавирус в Германии — 2020

  Коронавирусный колокол

  Такой колокол со стилизованным изображением возбудителя коронавирусной инфекции отлили в Германии осенью для готического храма в баден-вюртембергском городе Херренберге. Он сменит один из здешних старых колоколов, который получил повреждения еще во время Второй мировой войны и несколько лет назад окончательно пришел в негодность.

• Коронавирус в Германии — 2020

  COVID-отрицатели

  Демонстрации так называемых корона-скептиков в разных городах Германии — еще одна сторона пандемии. Они считают все происходящее заговором. В ноябре полиция в Берлине после неоднократных предупреждений была вынуждена применить водометы против COVID-отрицателей, пытавшихся прорваться к Рейхстагу во время заседания парламента, обсуждавшего поправки к закону об эпидемиологической защите.

• Коронавирус в Германии — 2020

  Курящий вирусолог

  Специалисты-вирусологи — герои нашего времени. Среди немецких ученых особую известность в 2020 году получил профессор Кристиан Дростен из Берлина. Один из мастеров традиционных промыслов в Рудных горах даже решил посвятить уважаемому вирусологу партию курящих человечков — таких вот рождественских сувениров с курительными свечами.

• Коронавирус в Германии — 2020

  Плюшевая «Панда-Мия»

  «Посетителей нет, но есть 100 панд на продажу». Такое объявление в декабре появилось на входе в один из ресторанов Франкфурта, закрытого для посетителей из-за частичного коронавирусного локдауна. Внутри устроили инсталляцию под названием «Панда-Мия» («Panda-Mie»). Панд можно купить — по 150 евро, чтобы поддержать владельца и сотрудников ресторана в нынешние нелегкие времена.

  Автор: Максим Нелюбин

Смертность от ковида в Беларуси: ученый о занижении статистики в 15 раз | Беларусь: взгляд из Европы — спецпроект DW | DW

Израильский ученый Ариэль Карлински из Еврейского университета в Иерусалиме вместе с Дмитрием Кобаком, научным сотрудником, специализирующимся на машинном обучении и нейронауке в университете немецкого города Тюбингена, провели исследование, в котором собрали данные об уровне смертности в пандемию коронавируса в разных странах. Ученые проанализировали то, как случаи смертей, связанные с COVID-19, отражаются в официальной статистике. Их научная статья (препринт) опубликована на портале medRxiv.

В интервью DW Дмитрий Кобак рассказал о выводах, к которым ученые пришли.

Дмитрий Кобак: Наша цель — собрать оперативные данные об общем числе смертей по разным странам. К сожалению, не существует единой базы, в которой бы собирались эти данные. Скажем, Россия публикует данные о числе смертей за каждый месяц на сайте Росстата. Украина — на сайте Укрстата. Соединенные Штаты публикуют данные о числе смертей за каждую неделю у себя на сайте. И так далее. Мы постарались собрать все это в одну таблицу. Пока получилось найти данные по 79 странам. Надеемся, что удастся еще расширить этот список.

Исходя из этих данных, можно посчитать так называемую избыточную
смертность в каждой стране с начала пандемии. Избыточная смертность — это превышение количества смертей за время пандемии над ожидаемым количеством смертей, исходя из данных за предыдущие годы — за период с 2015-го по 2019-й.

— Почему данных Университета Джонса Хопкинса недостаточно для оценки масштаба пандемии?

Научный работник Тюбингенского университета Дмитрий Кобак

— Потому что разные страны по-разному ведут подсчет коронавирусных смертей. В некоторых странах считают только умерших с подтвержденным диагнозом. В других — считают в том числе и умерших с подозрением на коронавирус. В некоторых считают только тех, у кого коронавирус записан как основная причина смерти. В других — всех умерших с коронавирусом. И так далее. Методики подсчета разные, поэтому сравнивать страны между собой трудно. Считается, что более надежный и более объективный показатель — это избыточная смертность, которая никак не зависит от методики подсчета коронавирусных смертей. Мы просто считаем избыточную смертность, и всё.

— В составленной вами международной базе данных 79 стран. Согласно одному из ваших выводов, во многих странах официальные данные по количеству умерших от COVID-19 занижены. Каков реальный масштаб?

— Действительно, во многих странах количество умерших оказывается занижено, но обычно не очень сильно. Например, во многих странах ЕС избыточная смертность раза в полтора больше, чем официальное количество ковидных смертей. По всей вероятности, это происходит из-за того, что там не учитываются ковидные смерти без подтвержденного диагноза. Думаю, в большинстве случае в занижении нет ничьего злого умысла. Это просто следствие неудачно или неправильно выбранной методики подсчета ковидных смертей.

Вакцинация от коронавируса в Беларуси

Но есть и страны, где совпадение очень хорошее: например, Швеция, Франция, Бельгия — там никакого занижения нет. А, например, в некоторых странах Латинской Америки занижение сильнее, в два-три раза. Есть, конечно, страны, где, к сожалению, можно подозревать намеренное занижение.

— Беларусь в числе стран, которые «грешат» недоучетом больше всего. Хуже ситуация только в Узбекистане. Согласно вашим подсчетам, по состоянию на 30 июня 2020 года в Беларуси от COVID-19 скончались 5800 человек. Официально Минздрав РБ тогда сообщал о 400 погибших. Есть ли основания говорить о преднамеренном занижении?

— В Беларуси у нас получилось занижение в 14,7 раз. Примерно как в Египте (13 раз) и Казахстане (11 раз). В Узбекистане занижение почти в 30 раз. На пятом месте по этому показателю идет Россия, где занижение в 6,5 раз. Объяснение этих чисел не входит в задачу нашей статьи. Но трудно предположить, что такие большие коэффициенты занижения могут иметь какое-то незлонамеренное объяснение.

Я отдельно изучал Россию, где доступны данные по отдельным регионам, и, например, в Башкортостане занижение получается больше, чем в сто раз. Я считаю, это нельзя объяснить никак, кроме как намеренным занижением числа ковидных смертей. Это подтверждается и журналистскими расследованиями из Башкортостана. Что касается Беларуси, то я таких расследований не видел, но занижение в 14,7 раз говорит само за себя.

— С какими данными по Беларуси вы работали? Временной отрезок
заканчивается 30 июня 2020 года. Далее данных пока нет, или они еще не обработаны? Запрашивали ли вы дополнительные цифры?

— Данные из Беларуси по какой-то загадочной причине нашлись в базе
данных Организации Объединенных Наций. В этой базе информация
появляется с очень большой задержкой, и там почти нет стран с информацией за 2020 год. Но почему-то именно данные из Беларуси там есть, за первое полугодие 2020-го. Сама Беларусь никаких данных не публикует. Мы обращались в Белстат, и нам ответили, что никаких данных у них нет. К сожалению, это означает, что нет никаких надежных данных о количестве умерших от ковида в Беларуси на сегодня — слишком много времени прошло с июня.

— Какая ситуация у стран-соседей Беларуси? В России, Украине?

— В России ужасная ситуация. По официальным данным, на сегодня умерло 72 тысячи человек, но с учетом коэффициента занижения в 6.5 реально избыточную смертность на сегодняшний день можно оценить выше 450 тысяч, то есть скоро будет полмиллиона жертв эпидемии. Думаю, Россия скоро обгонит США по этому показателю и выйдет на первое место в мире. На Украине занижение у нас получилось в 2 раза, это терпимый показатель.

— Что вы планируете делать в дальнейшем с вашей базой данных, будете расширять, актуализировать?

— Будем стараться обновлять в режиме реального времени до тех пор, пока пандемия не закончится. Надеемся, эти данные помогут другим исследователям в их работе.

Смотрите также:

• Коронавирус в Германии — 2020

  Без святой воды

  Первую фотографию в нашей рубрике «Кадр за кадром», связанную с пандемией коронавируса в Германии, мы опубликовали 28 февраля 2020 года. Именно тогда в самом посещаемом немецком храме приняли меры по профилактике распространения инфекции — в том числе, перестали наполнять чаши для святой воды. Прочитать эту и другие публикации можно, нажав на «+» справа над текстом или на ссылки под галереей.

• Коронавирус в Германии — 2020

  Осел в маске

  В 2020 году мы видели много разных памятников в масках. Вот, например, фотография из Бремена, сделанная в конце марта. Обычно здесь следует подержаться за ногу осла и загадать желание, но из-за распространения коронавирусной инфекции от этого во время пандемии лучше воздержаться.

• Коронавирус в Германии — 2020

  Оставайтесь дома!

  Самолет с таким баннером могли наблюдать в конце марта в небе над городом жители Гамбурга. В связи с пандемией коронавирусной инфекции подобные призывы появились в Германии повсюду — например, в виде хештегов #zuhausebleiben и #stayathome на экранах телевизоров или трафаретных граффити на тротуарах.

• Коронавирус в Германии — 2020

  Съедобная бумага

  Готовясь уйти на многонедельный карантин из-за коронавируса, жители Германии весной особенно охотно закупали впрок макаронные изделия, муку, крупы и туалетную бумагу. Спрос на последнюю увеличился на 700 процентов! Полки опустели. В одной кондитерской в Дортмунде решили выпускать свой вариант этого товара повседневного спроса — сдобные рулоны.

• Коронавирус в Германии — 2020

  Любовь во время короны

  Эти фотографии были сделаны в конце марта на датско-германской границе около Зюдерлюгума. Из-за пандемии граница была закрыта, но эти влюбленные пенсионеры — 89-летний немец Карстен Тюхзен Хансен и 85-летняя датчанка Инга Рассмусен — нашли решение проблемы. Они встречались каждый день — устраивали посиделки около шлагбаума.

• Коронавирус в Германии — 2020

  Хоум-офис для балерины

  Так во время весеннего локдауна проходили репетиции берлинского Государственного балета — транслировались через веб-камеру. Эта фотография сделана в однокомнатной квартире балерины Вивиан Ассал Кохнавард. В театральной мастерской для артистов изготовили специальные напольные покрытия, чтобы они могли выполнять упражнения у себя дома.

• Коронавирус в Германии — 2020

  Дурацкий коронавирус!

  В 2020 году из-за коронавируса пасхальный декор в Германии несколько отличался от традиционного. Например, такого пасхального зайца установили около школы в баварском Оттенхофене — из соломы, в баварских кожаных штанах и с табличкой «Дурацкий коронавирус»!

• Коронавирус в Германии — 2020

  Без Октоберфеста

  Эта фотография сделана в Мюнхене в апреле. Глава баварского правительства Маркус Зёдер идет на пресс-конференцию, чтобы сообщить об отмене традиционного Октоберфеста за пять месяцев до запланированного начала. Символический снимок. Октоберфест и другие многолюдные народные праздники, музыкальные, винные и прочие фестивали во время пандемии в Германии не состоялись.

• Коронавирус в Германии — 2020

  Маски для монархистов

  Задержимся в Баварии. Раньше портреты короля Людвига II украшали разные баварские сувениры. Во время пандемии этого популярного и любимого монарха, построившего замок Нойшванштайн, можно было увидеть на защитных масках.

• Коронавирус в Германии — 2020

  Концерт на грузовике

  Еще одним признаком коронавирусного времени стали концерты музыкантов в необычных местах или необычных форматах. Кэмерон Карпентер — единственный в мире органист, владеющий личным концертным органом. В начале мая он совершил турне по Берлину, чтобы поддержать людей во время пандемии. Эти фотографии сделаны во время выступления перед одним из столичных домов престарелых в районе Шпандау.

• Коронавирус в Германии — 2020

  Первая тренировка

  В рамках послабления карантинных мер в Германии 11 мая в некоторых немецких регионах после многонедельного перерыва вновь открылись первые фитнес-клубы. Эти фотографии были сделаны в Кельне в одном из таких центров. Он работает круглосуточно и поэтому распахнул двери для посетителей ровно в полночь. Условием открытия таких спортивных клубов являлось соблюдение строгих мер гигиены и дистанции.

• Коронавирус в Германии — 2020

  Очереди за щенками

  Летом немецкие собаководы сообщили о небывалом спросе на щенков. В частности, многие из тех, кто давно собирался завести собаку, работая в режиме хоум-офиса, посчитали нынешний момент особенно подходящим, так как почти все время находятся дома. Большой популярностью пользовались лабрадоры и золотистые ретриверы.

• Коронавирус в Германии — 2020

  Кинотеатр для олдтаймеров

  После начала пандемии в Германии повсюду стали открываться автомобильные кинотеатры. Эти фотографии были сделаны в нижнесаксонской коммуне Худе во время сеанса, организованного специально для владельцев олдтаймеров. Фильм был подобран в соответствии с интересами публики — «Ford против Ferrari».

• Коронавирус в Германии — 2020

  Пустые бордели

  Многие бордели и секс-клубы в Германии после нескольких месяцев коронавирусного локдауна оказались на грани банкротства — они оставались закрытыми даже после того, как работу возобновили парикмахерские, фитнес-клубы, бассейны и сауны. 16 июля некоторые публичные дома в разных регионах страны — например, в Гамбурге — провели день открытых дверей, чтобы привлечь внимание к сложной ситуации.

• Коронавирус в Германии — 2020

  Не поедем на Майорку

  Из-за боязни отправляться в дальние края многие немцы предпочли в 2020 году отдыхать летом на море дома — на пляжах Балтийского и Северного морей. Так курорт Тиммендорфер-Штранд выглядел в один из выходных дней в июле. Доступ на некоторые пляжи приходилось периодически перекрывать из-за переизбытка желающих поплавать в море и полежать на солнышке в непосредственной близости от воды.

• Коронавирус в Германии — 2020

  И яйца, и радость

  Во время пандемии жители Германии стали чаще заводить кур в качестве домашних животных — и детям радость, и свежие яйца к столу. Этот тренд наметился еще до начала пандемии, но из-за локдауна и прочих, так сказать, побочных коронавирусных последствий стал еще более очевидным. Эти фотографии агентства dpa были сделаны в сентябре около дома семьи Вагнеров из баварского Бад-Грёненбаха.

• Коронавирус в Германии — 2020

  Коронавирусный колокол

  Такой колокол со стилизованным изображением возбудителя коронавирусной инфекции отлили в Германии осенью для готического храма в баден-вюртембергском городе Херренберге. Он сменит один из здешних старых колоколов, который получил повреждения еще во время Второй мировой войны и несколько лет назад окончательно пришел в негодность.

• Коронавирус в Германии — 2020

  COVID-отрицатели

  Демонстрации так называемых корона-скептиков в разных городах Германии — еще одна сторона пандемии. Они считают все происходящее заговором. В ноябре полиция в Берлине после неоднократных предупреждений была вынуждена применить водометы против COVID-отрицателей, пытавшихся прорваться к Рейхстагу во время заседания парламента, обсуждавшего поправки к закону об эпидемиологической защите.

• Коронавирус в Германии — 2020

  Курящий вирусолог

  Специалисты-вирусологи — герои нашего времени. Среди немецких ученых особую известность в 2020 году получил профессор Кристиан Дростен из Берлина. Один из мастеров традиционных промыслов в Рудных горах даже решил посвятить уважаемому вирусологу партию курящих человечков — таких вот рождественских сувениров с курительными свечами.

• Коронавирус в Германии — 2020

  Плюшевая «Панда-Мия»

  «Посетителей нет, но есть 100 панд на продажу». Такое объявление в декабре появилось на входе в один из ресторанов Франкфурта, закрытого для посетителей из-за частичного коронавирусного локдауна. Внутри устроили инсталляцию под названием «Панда-Мия» («Panda-Mie»). Панд можно купить — по 150 евро, чтобы поддержать владельца и сотрудников ресторана в нынешние нелегкие времена.

  Автор: Максим Нелюбин

Гемофагоцитарная гистиоцитарная саркома собак: пролиферативное заболевание макрофагов CD11d +

Гистиоцитарные нарушения у собак включают гистиоцитому, локализованную гистиоцитарную саркому (HS), диссеминированный HS (злокачественный гистоцитоз) и реактивные гистиоцитозы: кожные и системные. Общим элементом этих заболеваний является пролиферация дендритных клеток (ДК) либо клеток Лангерганса (эпителиальные ДК), либо интерстициального происхождения ДК. В этом отчете описаны 17 собак с гемофагоцитарным HS.Пострадавшие породы включали бернский зенненхунд (6), золотистый ретривер (4), ротвейлер (3), лабрадор-ретривер (2), смешанные породы собак и шнауцер в возрасте от 2,5 до 13 лет. У собак наблюдалась анемия, отрицательная по Кумбсу у 16 ​​из 17 собак (94%), тромбоцитопения у 15 из 17 собак (88%), гипоальбуминемия у 16 ​​из 17 собак (94%) и гипохолестеринемия у 11 из 16 собак (69%). ). Все собаки умерли или были усыплены. Клинический курс составлял от 2 до 32 недель (в среднем 7,1 недели). Постоянно присутствовала диффузная спленомегалия с нечеткими массами.Микроскопические поражения преобладали в селезенке, печени, легких и костном мозге. Метастазирование произошло путем коварной внутрисосудистой инвазии с минимальным образованием массы. Гистиоциты были заметно эритрофагоцитами и сопровождались очагами экстрамедуллярного кроветворения. Цитологически гистиоциты варьировали от хорошо дифференцированных до атипичных, причем атипия более распространена в селезенке, чем в костном мозге. Эти опухоли возникли из красной пульпы селезенки и макрофагов костного мозга, которые экспрессируют главный комплекс гистосовместимости класса II и бета2-интегрин CD11d.У них была низкая и / или непостоянная экспрессия CD1 и CD11c, которые преимущественно экспрессируются негемофагоцитарными ГС собак происхождения DC. Гистиоцитарные пролиферативные заболевания собак теперь включают пролиферацию всех членов миелоидного гистиоцитарного происхождения: клеток Лангерганса, интерстициальных DC и макрофагов.

Этот золотистый ретривер превосходит тесты ПЦР при обнаружении COVID во французском доме престарелых

Всего через месяц после начала обучения обнаружению COVID-19 золотистый ретривер Покаа занял свой пост в доме престарелых в восточном Эльзасе. регион Франции.

Вместо того, чтобы проводить назойливую мазок людей из носа, Покаа нужно только понюхать ткань, которую держали под мышкой жителя, чтобы определить, есть ли у них вирус.

На данный момент ему удалось добиться впечатляющих результатов, достигнув 100-процентного успеха в обнаружении COVID-19 у пациентов с симптомами и 94% в бессимптомных случаях.

«Если Pokaa обнаруживает положительный мазок, он садится перед конусом, он действительно сохраняет свою позицию и может быть очень настойчивым в своей маркировке», — сказала тренер Pokaa, Кристель Шрайбер.

«Если он обнаружит отрицательный мазок, он почувствует его запах или очень быстро проигнорирует его, а затем вернется ко мне и скажет, что там ничего нет», — добавила она.

Как только собака обнаруживает болезнь, для подтверждения диагноза проводится ПЦР-тест, и пациент изолируется от других жителей дома.

Важно отметить, что Pokaa доказала свою способность вынюхивать вирус за 48 часов до того, как он будет обнаружен с помощью теста CPR.

«Мы смогли проверить, что люди, которые дали отрицательный результат за 48 часов до ПЦР и были обнаружены собакой положительно, на самом деле имели положительный результат ПЦР через 48 часов», — сказал Ален Легран, директор ассоциации Handi’chiens, где «Покаа прошел обучение», — пояснил.

Собак обычно дрессируют Handi’chiens, чтобы они помогали и помогали людям с ограниченными возможностями.

Но пандемия вдохновила благотворительную организацию на то, чтобы использовать острое обоняние собак в борьбе с COVID-19.

«Я верю, что наши собаки, я искренне верю в это от всей души, наши собаки спасут жизни в учреждениях», — сказал Роберт Колер, директор дома престарелых La Roselière и президент Handi’chiens.

«The люди, о которых мы заботимся, уязвимы, страдают множеством заболеваний, и, несмотря на вакцину, они все еще могут быть поражены вирусом.И именно этих людей мы должны действительно защищать ».

Чтобы узнать больше об этой истории, посмотрите видео в медиаплеере выше.

Давайте сыграем в игру поиска, В. К. Джоши (Биджи)

Как объяснялось в моем предыдущем блоге, собаки инстинктивно извлекают предметы. У них есть чутье нести предметы во рту в их логово или к вождю стаи. Для домашней собаки хозяин — вожак стаи, и дрессированная собака испытывает огромное удовольствие, доставляя ему предмет обратно.Собаки — это сгусток энергии, а игра в поисках — отличный источник стресса для собаки. Это своего рода снятие стресса и для хозяина, так как ему не нужно бегать с собакой, чтобы тренировать ее. Еще одним большим преимуществом обучения собаку принести является то, что это развивает своего рода невидимую связь между вами и собакой. В тот момент, когда вы ведете его в парк с гантелью или мячом в руке, он постоянно смотрит на вас и остается взволнованным мыслью о предстоящей игре. Связь становится настолько сильной, что вскоре собака начинает относиться к мячу как к награде.

Такая связь важна, так как помогает как хозяину, так и собаке добиваться поставленных целей. Владелец может ожидать лучших результатов, а собаке не нужно ломать голову, пытаясь быть лингвистом! Именно эта невидимая и неписаная связь навсегда делает его вашей тенью. Пятка и Пригонка — две команды, которые еще больше укрепляют связь и делают вашу собаку все более и более внимательной по мере взросления. Пока он щенок, его набеги во время тренировки следует игнорировать.От щенка нельзя ожидать, что он будет концентрироваться на ваших командах все время и каждый день. Могут быть дни, когда щенок может быть не в цвете, или вы могли поссориться с женой или боссом, и, хмурясь на лбу, вы не сможете развить ту связь со своей собакой, которую я пытаюсь передать здесь.

Игра в выборку — это не просто вытаскивание гантели по вашей команде. Он также может быть обновлен во многих других альтернативах. Например, после того, как он берет гантель и ловко садится перед вами, чтобы доставить ее вытянутыми ладонями, вместо того, чтобы забирать ее у него.Вы ловко похлопываете свое левое бедро и заставляете его обойти вас по часовой стрелке, чтобы сесть в положение пятки слева от вас. В тот момент, когда он садится, взлетайте с командой Heel. Как обычно, сначала двигайте левой ногой, так как это быстрее привлекает его внимание. К вашему счастью, он будет шустро ходить с гантелью во рту. Сначала сделайте всего несколько шагов, а затем заставьте его остановиться и сесть на пятки. Теперь попросите его принести. Это немного сложно для собаки. Потому что ваша цель — попросить его подойти и сесть перед вами, все еще держа предмет во рту.Сначала он может нащупать, но вскоре поймет, сядет в желаемое положение и доставит вам предмет. Снова бросьте гантель и повторите заново выученную игру — носить гантель во рту, пока он идет с вами.

Постепенно увеличивайте дистанцию, которую он ходит с вами с гантелью во рту. На этом этапе вы можете ввести другую команду «Перенести». Если у вас есть лабрадор-ретривер, золотистый ретривер или мопс, он без особых усилий выучит команду.Эти породы умеют носить вещи. Однако практически все породы собак усвоить это могут с небольшими трудностями. Многое зависит от правильного размера объекта. Собаке должно быть удобно и комфортно носить с собой.

Как только собака научится брать и нести гантель или мяч, вы можете заменить ее корзиной и заставить ее «носить» ее во рту и быстро ходить рядом с вами. Так как к настоящему времени ваша собака также обучена Го — вы всегда можете попросить ее принести корзину с цветами для вашего любимого человека или даже пойти в магазин, чтобы принести разные предметы.

Точно так же все это упражнение дает вам еще несколько дополнительных минут желаемого сна рано утром. Вы можете научить собаку приносить газету каждый день. Процедура для собаки, обученной возвращению, проста. Сначала скатайте газету, бросьте ее и попросите собаку принести. После этого щедро вознаградите его. Через несколько дней откройте дверь утром и покажите ему свернутую газету в вашем доме. Заставьте его сходить за ним, и вот, каждое утро ежедневная газета будет в ваших руках.Я должен добавить здесь, что между собакой и газетой существует иная привязанность.

Обратите внимание, собака получает садистское удовольствие, разрывая газету. Шорох рвущейся бумаги так возбуждает собаку, что он воображает, что это молитва — возможно, птица между его клыками! Часто люди обращаются ко мне с этой проблемой. Их милая собака разрывает их газету в клочья еще до того, как они просыпаются. Таким образом, обучение собаки принести газету не только спасет вашу драгоценную бумагу, но и изменит ее психику по отношению к таким предметам.

Когда ваша собака научится ловить рыбу, вы можете рассчитывать на несколько нововведений. Например, как вы будете себя чувствовать, когда вернетесь из офиса, ваша собака ловко подносит ваши тапочки, кладет их к вашим ногам и ждет, чтобы вы сняли вонючие носки и обувь, чтобы поставить их на свое место! Отлично, не правда ли? Что ж, это совсем не сложно. Сначала научите его приносить ваши тапочки. Он скоро научится это делать. Сначала вам, возможно, придется пойти в назначенное место, указать ему тапочки и попросить его «отнести», а затем попросить его «принести» и доставить в то место, где вы обычно расслабляетесь после возвращения домой с работы.Всегда добавляйте слова вроде принести тапочки, чтобы он понял, что от него требуется. В тот день, когда ваша собака принесет вам тапочки, пока вы сядете в свой любимый стул, вы будете вне всякого понимания в приподнятом настроении.

Игра в выборку бесконечна. С тапочек вы можете перейти на нашу прогулочную обувь или кеды. Ваша собака научится раньше, чем вы можете себе представить, потому что, надев туфли и заменив тапочки, вы выводите ее на прогулку и играете.Они делают два плюс два четыре очень быстро и выполняют задание безо всякой обиды. Теперь для него прогулка — награда. Еще одним дополнением к этому могло быть то, что его также можно было обучить носить с собой поводок.

Разве это не интересно?

Ну, как я уже сказал, игре в выборку нет конца, и она ведет ко многим другим играм / тренировкам. У собаки развивается привязанность к предметам, которые он приносит. А в следующем блоге вы прочтете, как заставить его унюхать спрятанный предмет?

Активность, экспрессия и генетические вариации собачьего β-дефенсина 103: многофункциональный противомикробный пептид в коже домашних собак — FullText — Journal of Natural Immunity 2012, Vol.4, № 3

Абстрактные

Кожа действует не только как физический барьер для инфекции. Эпителиальные клетки кожи могут синтезировать антимикробные пептиды, в том числе дефенсины, которые проявляют прямую антимикробную активность. Здесь мы охарактеризуем паттерн экспрессии, генетические вариации и активность основного β-дефенсина, экспрессируемого в коже собак, β-дефенсина 103 собаки (CBD103). Ген, кодирующий CBD103, демонстрирует две формы полиморфизма: общий аллель с делецией 3 пары оснований и вариацию числа копий гена.Золотистые ретриверы и лабрадоры были единственными породами, кодировавшими вариантный аллель CBD103, назвал CBD103 Δ G23 . Обе эти породы также демонстрировали полиморфизм числа копий гена CBD103 и , который варьировался от 2 до 4 копий гена на диплоидный геном. Рекомбинантные CBD103 и CBD103ΔG23, а также человеческий ортолог человеческий β-дефенсин 3 (hBD3) и hBD3ΔG23 показали мощное и сопоставимое уничтожение противомикробных препаратов как в отношении чувствительного к метициллину, так и устойчивого к метициллину Staphylococcus pseudintermedius .Образцы биопсии кожи собак с атопическим дерматитом показали, что уровни экспрессии CBD103 и аналогичны уровням экспрессии у здоровых людей и сопоставимы на участках поражения и без повреждений. Этот паттерн экспрессии у собак отличается от ранее описанного сниженного уровня экспрессии ортолога человека при атопическом дерматите. В целом, сходство CBD103 и его человеческого ортолога, о котором здесь сообщается, подтверждают мнение о том, что домашняя собака может служить ценной моделью для изучения биологии β-дефенсина в коже.

© 2012 S. Karger AG, Базель

Введение

Поверхности эпителия, включая кожу, часто сталкиваются с болезнетворными микроорганизмами, но частота инфицирования относительно низка. Физические барьеры для инфекции, циркулирующие лейкоциты и эндогенная микрофлора играют важную роль в защите хозяина. В дополнение к этим защитным механизмам эпителиальные клетки синтезируют и секретируют растворимые эффекторные молекулы, называемые антимикробными пептидами, которые служат эндогенными антибиотиками для предотвращения инфекции [1,2].Эти эпителиальные антимикробные пептиды экспрессируются многими разнообразными видами, от беспозвоночных до видов более высокого уровня, включая млекопитающих [3].

У млекопитающих дефенсины являются основным семейством антимикробных пептидов, и эту группу можно разделить на подсемейства: α-, β- и θ-дефенсины [4]. Α-дефенсины были описаны у многих млекопитающих, включая глейров, лошадей, мышей, крыс, приматов и людей, тогда как θ-дефенсины присутствуют только у нечеловеческих приматов [5]. Напротив, β-дефенсины представляют собой старейшее эволюционное подсемейство, обнаруженное у различных видов, от подковообразных крабов и птиц до гоминидов.Геномы некоторых млекопитающих, таких как жвачные и плотоядные, по-видимому, кодируют исключительно β-дефенсины.

β-дефенсинов экспрессируются во многих эпителиальных тканях, включая высокую экспрессию в коже. Они выполняют множество функций в врожденном иммунитете, включая защиту хозяина в качестве эндогенных антибиотиков, передачу сигналов, способствующих хемотаксису и заживлению ран, и другие виды межклеточной коммуникации [3,5,6,7,8]. Экспрессия и биологическая роль β-дефенсинов при различных кожных заболеваниях были предметом многочисленных исследований [1,9,10,11,12,13].Однако большая часть наших знаний о β-дефенсинах в коже основана на исследованиях пептидов человека, поскольку модели на животных еще не полностью разработаны. В этом отношении домашняя собака становится потенциально ценной моделью для изучения β-дефензинов [8,14,15,16]. Вычислительный анализ генома собаки, выполненный Патилом и соавт. [14], показали, что геном собаки кодирует 43 гена и псевдогена β-дефенсина. Геномная организация этих генов аналогична таковой для генов β-дефенсина у людей и мышей.Напр., Главный кластер β-дефенсина человека на хромосоме 8 является синтеничным кластеру собак на хромосоме 16 [14]. Два из человеческих β-дефенсинов (hBD), кодируемых в этом кластере, hBD2 и hBD3, индуцибельно экспрессируются до высоких уровней в коже человека, и оба обладают сильной антимикробной активностью [1,17,18]. На основании сравнения последовательностей hBD3 и собачий β-дефенсин 103 (CBD103), по-видимому, являются ортологами. CBD103 экспрессируется в коже собак [8,15] и дыхательных путях [16], паттерн тканевой экспрессии подобен его аналогу у человека.Обладает ли CBD103 мощной антибактериальной активностью hBD3, еще не было тщательно изучено и проверено в этом исследовании. В настоящее время у собак нет ортолога hBD2. Как характерно для семейства дефенсинов, часто существует большая вариабельность от вида к виду, поэтому такие различия обычно выявляются [3] и их важно учитывать при разработке полезных моделей на животных.

Интересно, что CBD103 демонстрирует два типа генетических полиморфизмов: (1) вариантный аллель с делецией из 3 пар оснований в его кодирующей последовательности и (2) вариация числа копий гена.Делеция из 3 пар оснований в CBD103 , обозначенная как CBD103 Δ G23 , была идентифицирована как аллельный вариант, ответственный за доминирующий черный окрас шерсти у собак [8]. CBD103ΔG23 не имеет остатка глицина на N-конце зрелого пептида и может связываться с рецептором меланокортина 1 (Mc1r) на поверхности меланоцитов с более высоким сродством, чем CBD103. Считается, что из-за своей аффинности связывания и высокого уровня экспрессии CBD103ΔG23 вытесняет Агути, антагонист передачи сигналов Mc1r, позволяя Mc1r передавать неослабевающий сигнал, что приводит к синтезу черного пигмента эумеланина и приводит к черной окраске шерсти.

В дополнение к варианту последовательности ΔG23, CBD103 , по-видимому, проявляет другую форму генетической пластичности, вариацию числа копий гена [19]. В то время как большинство генов присутствует в двух копиях на диплоидный геном, вариация числа копий описывает явление, при котором гены, расположенные в одном локусе, присутствуют в популяции с переменным числом копий по сравнению с эталонным геномом. У человека ген, кодирующий hBD3, находится в кластере генов β-дефенсина, который демонстрирует полиморфизм числа копий, который варьируется от 1 до 12 копий на диплоидный геном в популяциях человека [20].Полиморфизм числа копий гена для этого кластера β-дефенсина, включая ген, кодирующий hBD3 и соседние гены β-дефенсина, был тщательно исследован, в том числе его связь с восприимчивостью к кожным заболеваниям [11]. Однако сведения об изменении числа копий гена предполагаемого ортолога собаки, CBD103, , скудны.

Атопический дерматит (БА) — это хроническая воспалительная дерматопатия, которая часто осложняется вторичной бактериальной инфекцией как у собак, так и у людей [21].Считается, что у людей с БА воспалительные цитокины в коже, такие как IL-4 и IL-13, снижают экспрессию hBD3 [22]. Кроме того, было отмечено, что кожа человека с БА не способна убивать Staphylococcus aureus из-за аберраций в мобилизации hBD3 [23]. Недавнее исследование на собаках с БА показывает, что экспрессия CBD103 и одинакова для поврежденной и не поврежденной кожи, но снижена по сравнению со здоровой контрольной группой [24].

В этом исследовании мы стремились дать представление об антимикробной активности, экспрессии тканей в здоровых и больных образцах, а также о разновидностях CBD103 и его общих генетических полиморфизмах.Поскольку домашние собаки появляются в качестве модели для изучения биологии β-дефенсинов в коже, представленные здесь данные подчеркивают многие сходства CBD103 с его аналогом у человека, хотя наблюдаются некоторые различия в экспрессии.

Материалы и методы

Ткань

Собачья ткань была получена от принадлежащих клиенту собак, которые по причинам, не связанным с данным исследованием, были подвергнуты эвтаназии, обработаны для вскрытия и признаны неограниченными для использования в исследованиях. Это произошло в Школе ветеринарной медицины Дэвиса Калифорнийского университета (UC) Уильяма Р.Учебная ветеринарная больница Притчарда. Ткани (придаток яичка и кожа) помещали в RNAlater (Ambion, Applied Biosystems, Foster City, Калифорния, США) и встряхивали при комнатной температуре в течение ночи. Консервированные образцы хранили при –80 ° C до дальнейшей обработки. Дополнительную РНК из желудочно-кишечного тракта (язык, желудок, двенадцатиперстную кишку, тощую кишку, подвздошную кишку, толстую и прямую кишку), кожи, легких, почек, поджелудочной железы и костного мозга получали из коммерческого источника (Zyagen, San Diego, CA, USA).

Геномная ДНК собак

Образцы крови были взяты у пациентов Калифорнийского университета в Дэвисе Уильяма Р.Учебная ветеринарная больница Притчарда. Со всеми животными обращались в строгом соответствии с надлежащей практикой обращения с животными, как определено соответствующими национальными и / или местными органами по защите животных, и вся работа с животными была одобрена протоколом № 15356, утвержденным Комитетом по уходу и использованию животных. Геномную ДНК выделяли с использованием набора QiaAmp DNA Blood Mini (Qiagen Inc.).

ПЦР собак Defensins

РНК и синтез кДНК выполняли, как описано ранее [25,26].Качественная ПЦР использовалась в качестве инструмента широкого скрининга для определения паттернов экспрессии дефенсинов, кодируемых геномом собаки. Праймеры для ПЦР были сконструированы с использованием программного обеспечения MacVector (MacVector Inc., Кэри, Северная Каролина, США) для специфической амплификации последовательностей собачьего дефенсина, депонированных в Национальном центре биотехнологической информации (NCBI) [14], и расшифровки расшифровки собачьего рибосомного белка S5 ( RPS5) (таблица онлайн-поставки 1; все материалы онлайн-поставки см. На сайте www.karger.com?doi=10.1159/000334566) [27]. FastStart Taq (Roche Applied Sciences, Индианаполис, Индиана, США) использовали для амплификации кДНК, представляющей 100 нг общей РНК, со следующими параметрами: 94 ° C в течение 5 минут, 35 циклов при 94 ° C в течение 30 с, 55 ° C. в течение 30 с, 72 ° C в течение 1 мин и окончательное удлинение при 72 ° C в течение 7 мин. Придатки яичка и яички использовали в качестве положительного контроля для экспрессии дефенсина, поскольку было показано, что эти ткани экспрессируют большую часть дефенсинов у других видов [14]. В нестандартных контрольных образцах раствор ДНК заменяли водой.Продукты ПЦР разделяли электрофорезом в агарозном геле (1,5% мас. / Об.) И детектировали с помощью окрашивания бромидом этидия. Положительные продукты ПЦР для каждого транскрипта дефенсина вырезали из агарозного геля, очищали с помощью набора для очистки QIAquick PCR (Qiagen) и напрямую секвенировали, чтобы гарантировать идентификацию амплифицированной кДНК. Количественная ОТ-ПЦР (qRT-PCR) была проведена на кДНК из ткани из первоначального скрининга с использованием праймеров для CBD1 (2) s, CBD1 (118) a, CBD103 (12) s, CBD103 (117) a, CBD108 (23) s, CBD108 (126) a, RPS5 (54) s и RPS5 (235) a (онлайн-доп.таблица 1) [26].

Генетическая вариация

Для определения распространенности генетической вариации ΔG23 в CBD103 были разработаны праймеры для ПЦР (MacVector), фланкирующие геномную последовательность CBD103 , окружающую делецию из 3 пар оснований, с флуоресцентно меченным смысловым праймером 6FAM. (онлайн-приложение, таблица 1). Примерно 10 нг геномной ДНК от разных пород (доберман-пинчер (n = 15), немецкая овчарка (n = 15), золотистый ретривер (n = 13), лабрадор-ретривер (n = 16) и ротвейлер (n = 15)). ПЦР, амплифицированная с CBD103 (1662) s и CBD103 (1889) a (онлайн-приложение.таблица 1) с использованием следующих параметров: 94 ° C в течение 5 минут, 35 циклов 94 ° C в течение 30 секунд, 55 ° C в течение 30 секунд, 72 ° C в течение 1 минуты и окончательное удлинение при 72 ° C в течение 7 минут. Разведение 1:20 было выполнено с помощью GeneScan 400D Rox в формамиде Hi-Di (Life Technologies Corporation, Карлсбад, Калифорния, США). Образцы были обнаружены на генетическом анализаторе ABI 3100 (Life Technologies Corporation) с использованием программного обеспечения STRand, разработанного лабораторией ветеринарной генетики Калифорнийского университета в Дэвисе (http://www.vgl.ucdavis.edu/ informatics / strand.php) [28].

Для определения вариации GCN в CBD103 были разработаны праймеры для ПЦР, очищенные электрофорезом в полиакриламидном геле (MacVector) для амплификации областей CBD103 и эталонного гена, TATA-связывающего белка (TBP) , который считается диплоидным в геном [онлайн-доп. таблица 1: CBD103 CN (421) s, CBD103 CN (580) a, CTBP CN (17889) s и CTBP CN (17999) a]. Количественная ПЦР (кПЦР) была проведена с использованием FastStart Taq (Roche) с использованием 10 нг геномной ДНК от разных пород со следующими параметрами: 94 ° C в течение 5 минут, 35 циклов при 94 ° C в течение 30 секунд, 55 ° C в течение 30 секунд. , 72 ° C в течение 1 мин и окончательное удлинение при 72 ° C в течение 7 мин.GCN был рассчитан с использованием метода, подробно описанного Linzmeier и Ganz [29].

Иммуногистохимия

Образцы кожи собак фиксировали формалином и заливали парафином. Парафиновые срезы толщиной 5 мкм помещали на заряженные предметные стекла и дважды депарафинизировали в ксилоле в течение 3 мин. Затем слайды инкубировали в 100% этаноле дважды по 2 мин каждое и гасили эндогенные пероксидазы 0,1% перекисью водорода в метаноле в течение 5 мин. После регидратации в 95% этаноле в течение 2 мин, затем в 70% в течение 2 мин слайды помещали в увлажненную камеру при комнатной температуре.За этапом блокирования 0,02% козьей сывороткой в ​​фосфатно-солевом буфере (PBS) в течение 20 минут следовало нанесение первичных поликлональных антител против hBD3 [24] (Allele Biotech, Сан-Диего, Калифорния, США) в разведении 1: 500 в 0,02% козьей сыворотке в PBS. Срезы отрицательного контроля инкубировали с 0,02% козьей сыворотки в PBS при 4 ° C в течение ночи, а затем дважды промывали PBS в течение 10 мин. Биотинилированное вторичное антитело α-кролика (Vector Elite Kit, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) применяли в течение 20 минут.После двух промывок PBS в течение 2 минут на предметные стекла наносили реагент ABC (Vector Elite Kit) и инкубировали в течение 20 минут при комнатной температуре. После трех промывок трис-буферным физиологическим раствором (TBS) 3 раза в течение 2 минут хромаген 3,3′-диаминобензидин (Vector Elite Kit) был добавлен к каждому слайду на 5 минут. Окончательное контрастное окрашивание светло-зеленым (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США) в течение 5 минут проводили после промывки TBS в течение 4 минут и промывки деионизированной водой в течение 4 минут. После сушки предметных стекол покровные стекла закрывали с помощью Permount (ThermoFisher Scientific, Waltham, Mass., СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ). Оценку ткани и запись изображения выполняли с использованием микроскопа Olympus DP72 (Olympus America Corporation, Center Valley, PA, USA).

Рекомбинантный пептид

кДНК, кодирующая предсказанный зрелый CBD103 (45 аминокислот), CBD103ΔG23 (44 аминокислоты), hBD3 (45 аминокислот) и hBD3ΔG23 (44 аминокислоты), амплифицировали с помощью ПЦР (онлайн-таблица 1). Кодон, кодирующий остаток метионина, был встроен в смысловой праймер для ПЦР, непосредственно примыкающий к N-концевому кодону пептидов дефенсина, чтобы обеспечить сайт расщепления цианогенбромида, который позволит отщеплять зрелый пептид от оставшейся части экспрессированного гибридный белок.Каждый продукт ПЦР подвергали рестрикционной обработке с использованием Eco RI и Sal I и вставляли (в рамке) в вектор экспрессии pET32a (+) (Novagen, EMD Chemicals, Дармштадт, Германия), содержащий N-концевую His-метку. и тиоредоксин. Четыре (с подтвержденной последовательностью) экспрессионные конструкции были субклонированы в химически компетентные клетки BL-21 (DE3) (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), размноженные в лизогенном бульоне (LB), содержащем карбенициллин (50 мкг / мл) при 37 ° С. C встряхиванием в течение ночи и запасы глицерина замораживали при –80 ° C.Чтобы получить отдельные колонии для экспрессии, каждый исходный глицерин наносили штрихами на планшет LB, содержащий карбенициллин (50 мкг / мл), и инкубировали в течение ночи при 37 ° C. Отдельную колонию использовали для инокуляции заквасочной культуры (LB и карбенициллин 50 мкг / мл) и инкубировали при 37 ° C, встряхивая, в течение ночи. На следующее утро всю заквасочную культуру добавляли к 1 литру LB, содержащего карбенициллин (50 мкг / мл) и стерильный фосфатный буфер (36 мкм M K ₂ HPO ₄ ,8.5 м M KH ₂ PO ₄ ). Экспрессию пептидов индуцировали добавлением изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозида (конечная концентрация 0,5 мкМ M ) при OD ₆₀₀ , равном 0,5–0,6. Культуре позволяли индуцировать в течение 4–5 часов, после чего клетки BL21 осаждали при 5 000 г в течение 15 минут. Гранулированные клетки BL21 лизировали 6,0 M гуанидин-HCl и 100 мкл M Tris pH 8,0, обрабатывали ультразвуком и центрифугировали при 5000 g в течение 30 мин.Полученный осветленный супернатант инкубировали с гранулами Ni-NTA агарозы (Novogen, 5 мл / л индукции) в течение ночи при 4 ° C. Затем шарики помещали в колонку, промывали 6 M гуанидин / 100 м M Tris (pH 8,0) и элюировали 6 M гуанидин / 100 m M Tris / 1 M имидазол (pH 6.0). Элюент диализовали против 5% ледяной уксусной кислоты и лиофилизировали. Для химического отщепления His-метки и тиоредоксина от рекомбинантного пептида дефенсина лиофилизированный продукт восстанавливали в 80% муравьиной кислоте, продували газообразным аргоном и обрабатывали CNBr (20 мг / мл) в течение ночи при комнатной температуре.Нарезанный продукт реакции разбавляли в 10 раз Milli-Q H ₂ O, диализовали против 5% ледяной уксусной кислоты, лиофилизировали и восстанавливали в 0,05% ледяной уксусной кислоте. Затем расщепленные продукты реакции сначала очищали с использованием полупрепаративной обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ОФ-ВЭЖХ) C18 с 15-50% градиентным буфером B (99,9% ацетонитрила, 0,1% трифторуксусной кислоты), контролируя оптическую плотность при 230 нм, фракции собираются каждую минуту при скорости потока 1 мл / мин.Приблизительно 10% каждой фракции добавляли в 3 × буфер для образца белка (5% уксусная кислота, 3 M мочевина, 0,01% метилового зеленого) и загружали в 12,5% -ный электрофорез в полиакриламидном геле с мочевиной (AU-PAGE) и проводили при 130 В на обратной полярности на 1,5 ч. Полученные гели окрашивали SimplyBlue (Invitrogen) и обесцвечивали водой. Фракции, которые, как оказалось, содержали отщепленный зрелый пептид на основании миграции геля, были объединены и подвергнуты дальнейшим циклам очистки RP-HPLC с более мелким градиентом буфера B (26–38% для CBD103, CBD103ΔG23, hBD3ΔG23 и 40–46% для hBD3. ), используя колонку C18 с меньшим отверстием.На последней стадии очистки каждый пептид собирали вручную при элюировании. Общий выход составлял приблизительно 1 мг пептида на 6 литров бактериальной культуры. Выделенные пептиды подвергали ОФ-ВЭЖХ на аналитической колонке C18 с градиентом ацетонитрила при скорости потока 1 мл / мин (онлайн-приложение, рис. 3). Очищенные пептиды также анализировали с помощью масс-спектроскопии MALDI-TOF (онлайн-приложение, рис. 4). Для дальнейшего анализа рекомбинантных пептидов с помощью AU-PAGE и вестерн-блоттинга каждый из пептидов восстанавливали с помощью 100 мкл M TCEP при 55 ° C в течение 25 мин.Приблизительно 1 мкг восстановленного пептида добавляли к 3 × буферу для образца белка, загружали в 12,5% AU-PAGE и проводили при 130 В в течение 1,5 часов. Полученный гель окрашивали SimplyBlue (Invitrogen) и обесцвечивали водой. Для вестерн-блоттинга 250 нг каждого восстановленного пептида добавляли к 3 × буферу для образца белка, загружали в 12,5% AU-PAGE и проводили при 130 В при обратной полярности в течение 1,5 часов. Пептиды переносили на PVDF-мембрану (Millipore, Billerica, MA, USA) в обратной полярности с током 2 мА / см ² в течение 20 мин.Блот фиксировали 0,05% глутаровым альдегидом и зондировали поликлональным антителом против hBD3 (Allele Biotech) в разведении 1: 3000 в TBS-Tween 20 и молоке (0,05%). После последующих промывок блот инкубировали с вторичным антителом козьего α-кролика (KPL, Гейтерсбург, Мэриленд, США), разведенным в TBS-Tween 20 и молоке (0,05%). Хемилюминесцентный сигнал детектировали с помощью системы визуализации Biospectrum AC (UVP, Upland, Калифорния, США).

Антимикробный анализ

Были приобретены клинические изоляты Staphylococcus pseudintermedius , чувствительные к метициллину и резистентные к метициллину, а также бактерии, выделенные из кожи собак.Для подтверждения идентичности клинических изолятов бактериальную ДНК выделяли с помощью мини-набора QIAamp DNA Stool (Qiagen, Валенсия, Калифорния, США), для чего использовали универсальные бактериальные праймеры [Bac16s (27) s и Bac16s (1391) a]. амплифицировать ген 16S рРНК, субклонировать в pBluescript и секвенировать. Радиально-диффузионный антимикробный анализ был использован для определения антибактериальной активности невосстановленных CBD103, CBD103ΔG23, hBD3 и hBD3ΔG23 при различных концентрациях (250, 83, 28, 9 и 3 мкг / мл) каждого пептида [26,30].

Образцы атопического дерматита

Собаки, включенные в исследование, были представлены для внутрикожного тестирования (IDT). Все собаки имели клинические признаки и анамнез, подтверждающий AD. Перед представлением для внутрикожного тестирования возможность зуда, связанного с аллергическим дерматитом на блох, была исключена с помощью строгой борьбы с блохами с помощью соответствующего взрослого средства, и собаки все еще получали либо местное, либо пероральное средство для борьбы с блохами во время биопсии кожи и IDT были выполнены.Кожная побочная реакция на пищу была исключена до обращения к IDT, что было подтверждено завершением испытания элиминационной диеты и последующим повторным тестированием. Все вторичные инфекции, вызванные бактериями или дрожжами, были эффективно вылечены. Собаки не получали ни антигистаминных препаратов, ни кортикостероидов перорально или местно в течение 4 недель до обращения к IDT. Некоторые получали циклоспорин для лечения зуда во время кожных пробы.

Для получения образцов кожи использовался 6-миллиметровый пробойник для биопсии.Пораженная кожа относится к биопсии, взятой из подмышечной впадины, области, которая обычно поражается у собак с БА. Образцы без поражения были взяты из межлопаточной области, области, которая обычно не затрагивается при БА. Образцы биопсии были сагитально разделены пополам, одна половина была зафиксирована формалином, а оставшаяся половина сохранена в RNAlater (Ambion) и обработана так же, как и другие образцы кожи, описанные выше. Все собаки были обследованы сертифицированным ветеринарным дерматологом (C.A.O.), и у некоторых собак не было выявлено никаких клинических поражений, кроме легкой эритемы в подмышечной впадине.Гистологическое исследование всех биопсий кожи было выполнено сертифицированным ветеринарным дерматопатологом (V.K.A.), и никаких повреждений не было обнаружено. Все образцы были собраны в соответствии с рекомендациями Совета по надзору за клиническими испытаниями Калифорнийского университета в Дэвисе и Институционального комитета по уходу и использованию животных, и было получено письменное согласие клиента.

Статистический анализ

Все статистические сравнения были выполнены с использованием парных двусторонних t-критериев Стьюдента в Excel (Microsoft Corporation, Редмонд, Вашингтон, США).

Результаты

Экспрессия собачьего β-дефенсина

В попытке определить, является ли CBD103 единственным высокоэкспрессированным β-дефенсином в коже, мы приступили к наиболее полному на сегодняшний день скринингу на экспрессию собачьего β-дефенсина. Праймеры для ПЦР (онлайн-приложение, таблица 1) были разработаны для специфической амплификации каждого из 41 предполагаемого транскрипта гена β-дефенсина [14] из кожи, а также из 13 других тканей. Мужской придаток яичка экспрессировал почти каждый β-дефенсин, кодируемый геномом собаки, что удобно служило положительным контролем для всех, кроме одной реакции ПЦР (онлайн-приложение.инжир. 1). CBD121 был единственным собачьим β-дефенсином, не обнаруженным ни в одной ткани. Продукт ПЦР из каждой из других реакций ПЦР с β-дефенсином был непосредственно секвенирован для подтверждения его идентичности. CBD1 , CBD108 и CBD123 продемонстрировали обобщенный паттерн экспрессии, поскольку транскрипты мРНК были идентифицированы в большинстве проанализированных тканей (онлайн-приложение, рис. 1). Напротив, более конкретный паттерн экспрессии был отмечен для CBD103 , CBD109 , CBD112 , CBD119 , CBD122 , CBD139 и CBD140 .Единственными двумя генами β-дефенсина с легко обнаруживаемой экспрессией в коже были CBD1 и CBD103 .

анализов qRT-PCR для трех наиболее высоко экспрессируемых транскриптов β-дефенсина собак ( CBD1 , CBD103 и CBD108) на основе этого начального качественного скрининга ПЦР. Используя эту технику, CBD1 также показал общий образец экспрессии с заметными уровнями в коже, языке и почках (рис.1а). CBD108 был экспрессирован на низких уровнях в любых протестированных тканях, с более высокими уровнями в почках и семенниках (онлайн-приложение, рис. 2A). Напротив, более тканеспецифичный паттерн экспрессии был обнаружен с CBD103 с экспрессией на высоких уровнях, обнаруженных в коже (8,2E + 03 копии / 10 нг общей РНК) и языке (1,5E + 04 копии / 10 нг в целом). РНК) (рис. 1б). RPS5 , используемый в качестве гена домашнего хозяйства [27], продемонстрировал относительно постоянные и высокие уровни экспрессии во всех различных исследованных тканях (онлайн-приложение.инжир. 2Б). Эти данные показали, что CBD103 был наиболее экспрессируемым β-дефенсином в коже собак.

Рис. 1

Экспрессия собачьих β-дефенсинов. qRT-PCR анализ абсолютного числа копий транскриптов мРНК, кодирующих CBD1 ( a ) и CBD103 ( b ) в РНК, выделенной из различных тканей, включая кожу, желудочно-кишечный тракт (язык, желудок, двенадцатиперстную кишку, тощую кишку, подвздошную кишку, толстую кишку, прямая кишка), легкие, почки, поджелудочная железа, костный мозг, яички и придатки яичка.Каждая полоса представляет собой среднее значение повторных анализов (стандартное отклонение <10%) для одного протестированного образца (n = 1). ND = Не обнаружено.

Чтобы расширить наш анализ экспрессии эпидермиса CBD103 , были получены образцы кожи вентральной и спинной части 6 собак разных пород и возрастов. РНК экстрагировали из каждого образца ткани, и экспрессию CBD103 и оценивали с помощью qRT-PCR (рис. 2a). Средний уровень экспрессии мРНК CBD103 и был практически одинаковым при сравнении кожи с обоих спинных (среднее: 1.7E + 4 копии / 10 нг общей РНК) или вентральной поверхности (среднее: 1,3E + 4 копии / 10 нг общей РНК). Кроме того, мРНК CBD103 и экспрессировалась до аналогичных уровней в коже у каждой из 6 различных исследованных собак (рис. 2а). Чтобы идентифицировать сайт экспрессии CBD103 в коже, мы использовали иммуногистохимию с использованием поликлональных антител, индуцированных против человеческого ортолога CBD103, hBD3. Положительное окрашивание было обнаружено в кератиноцитах эпидермиса, а также в фолликулярных эпителиальных клетках (рис. 2б).

Рис. 2

Эпидермальная мРНК и пептидная экспрессия CBD103. анализ qRT-PCR абсолютного количества копий транскриптов мРНК, кодирующих CBD103, в РНК, выделенной из каудодорсальной (дорсальной) и паховой (брюшной) кожи собак. Рассчитанное среднее значение для 6 собак, кожа спины и брюшины. Планки погрешностей представляют стандартную ошибку. b Иммуноокрашивание CBD103 в коже собаки (2 ×) с использованием поликлонального антитела (1: 500), индуцированного против hBD3. CBD103 локализуется в кератиноцитах и ​​фолликулярных эпителиальных клетках. Вставка сделана с разрешением 20 ×. c Отрицательный контроль для окрашивания только вторичным антителом (2 ×). Вставка сделана с разрешением 20 ×. Стрелки указывают на положительное окрашивание. Полоса размера при 2-кратном просмотре: 300 мкм и при 20-кратном просмотре: 30 мкм.

CBD103 Генетическая вариация

Общий вариант CBD103 , CBD103 Δ G23 , имеет делецию из 3 пар оснований, кодирующую аминоконцевой глицин зрелого пептида. Этот вариант ранее был идентифицирован как аллель, ответственный за доминирующий черный окрас шерсти у собак [8].Анализ генотипирования на основе ПЦР был разработан для оценки присутствия этой вариантной последовательности у различных пород собак. Флуоресцентно меченые продукты ПЦР разделяли с помощью электрофореза в капиллярном геле, и аллели выделяли в зависимости от размера продукта. Из 5 оцененных пород ротвейлеры, доберман-пинчеры и немецкие овчарки не обладали вариантным аллелем; был обнаружен только аллель CBD103 дикого типа (рис. 3а). Интересно, что вариантный аллель был обнаружен у всех голден ретриверов (54% WT / ΔG23; 46% ΔG23 / ΔG23) и лабрадоров (75% WT / ΔG23; 25% ΔG23 / ΔG23).

Рис. 3

Распространенность общего варианта CBD103 и вариация числа копий гена. a Круговые диаграммы представляют особей данной породы, разделенные на генотипы собак: CBD103 / CBD103 (синий), CBD103 / CBD103 Δ G23 (желтый) и CBD103 Δ G23 / CBD103 Δ G23 (красный) . Доберманы (n = 15), немецкие овчарки (n = 15) и ротвейлеры (n = 15), по-видимому, не имеют аллеля CBD103 Δ G23 , тогда как голден ретриверы (n = 13) и лабрадоры ( n = 16) обладают аллелем CBD103 Δ G23 как гетерозиготный или гомозиготный вариант. b График вариации числа копий гена CBD103 с цветами, указывающими генотип CBD103 . Доберманы-пинчеры, немецкие овчарки и ротвейлеры кодируют 2 копии CBD103 на диплоидный геном, тогда как у золотистых ретриверов и лабрадоров есть вариации в общем количестве копий гена CBD103 .

Помимо аллеля CBD103 Δ G23 , другой формой генетической вариации, идентифицированной в локусе β-дефенсина на хромосоме 16, был полиморфизм числа копий гена [19].Ген CBD103 расположен в кластере β-дефенсинов, который является синтеничным с кластером ортологов на хромосоме 8 человека, многие из которых считаются ортологами между двумя видами [14]. У людей этот кластер проявляет полиморфизм числа копий гена, и данный индивидуум может кодировать от 1 до 12 копий этого кластера на диплоидный геном [20,29]. Чтобы исследовать подобный полиморфизм числа копий гена у собак, мы разработали анализ кПЦР со специфическими праймерами для гена CBD103 и диплоидного эталонного гена TBP .Доберманы-пинчеры, немецкие овчарки и ротвейлеры, по-видимому, не проявляли полиморфизма числа копий гена CBD103 и , поскольку у каждого испытуемого было общее число копий гена CBD103 , равное примерно двум на диплоидный геном (рис. 3b). Напротив, у золотистых ретриверов и лабрадоров обнаружен полиморфизм числа копий гена с числом копий гена CBD103 и , составляющим 2–4 копии на диплоидный геном (рис. 3b).

Антимикробная активность

Для исследования возможной дифференциальной антимикробной активности CBD103 дикого типа и его варианта ΔG23 были экспрессированы рекомбинантные пептиды (рис.4а), очищенные с помощью ОФ-ВЭЖХ (онлайн-приложение, рис. 3) и проанализированные с помощью масс-спектрометрии (онлайн-приложение, рис. 4). Для сравнения, hBD3 и соответствующий вариант, hBD3ΔG23, экспрессировали, очищали и анализировали аналогичным образом (онлайн-приложение, рис. 3, 4). Очищенные пептиды подвергали AU-PAGE в восстанавливающих условиях и анализировали для оценки иммунореактивности (фиг. 4b, c). Вестерн-блоттинг рекомбинантных пептидов показал, что hBD3 и hBD3ΔG23 одинаково распознаются поликлональным антителом α-hBD3, тогда как пептид CBD103ΔG23 распознается по-разному по сравнению с CBD103 (рис.4в). Результат подтверждает, что N-концевые остатки CBD103 доступны для белок-белковых взаимодействий, что согласуется с его предполагаемой ролью в цвете шерсти [8].

Фиг. 4

CBD103 и hBD3 и рекомбинантная экспрессия. a Предсказанные зрелые пептидные последовательности для CBD103 и CBD103ΔG23, а также hBD3 и hBD3ΔG23. Звездочками обозначены аминокислотные различия, все из которых консервативны, за исключением S37G и T58R. b AU-PAGE TCEP восстановил рекомбинантные CBD103, CBD103ΔG23, hBD3 и hBD3ΔG23, демонстрируя гомогенность пептида по окрашиванию SimplyBlue. c Вестерн-блоттинг TCEP восстановил рекомбинантные CBD103, CBD103ΔG23, hBD3 и hBD3ΔG23 с использованием поликлонального антитела (1: 3000), индуцированного против hBD3.

Антибактериальная активность рекомбинантных дефенсинов была протестирована с использованием анализа радиальной диффузии как с грамположительными, так и с грамотрицательными бактериями. Клинические изоляты S. pseudintermedius , распространенного патогена кожи собак, особенно собачьих пациентов с БА, были закуплены для антимикробного тестирования. В дополнение к этим клиническим изолятам культивировали эндогенные бактерии из кожи собак для сравнения с S.Псевдоним . И CBD103, и CBD103Δ23 проявляли относительно одинаковую активность против метициллин-чувствительного и метициллин-устойчивого S. pseudintermedius (фиг. 5a, b). Точно так же hBD3 и hBD3ΔG23 были одинаково противомикробными против S. pseudintermedius . Оба набора пептидов собак и человека проявляли сильную антимикробную активность против эндогенных бактерий, обнаруженных на коже собак ( Bacillus licheniformis , Micrococcus sp. И Bacillus cereus) , а также лабораторный штамм Escherichia coli D31 (таблица 1).

Таблица 1

Рис. 5

Антибактериальная активность рекомбинантного CBD103. Определение антибактериальной активности CBD103, CBD103ΔG23, hBD3 и hBD3ΔG23 с использованием антибактериального анализа радиальной диффузии с клиническими изолятами метициллин-чувствительного ( a ) и метициллин-устойчивого ( b ) S. pseud82intermedius. Графическое изображение антибактериального клиринга CBD103, CBD103ΔG23, hBD3 и hBD3ΔG23 [30].

Ассоциация с атопическим дерматитом

У людей с БА уровни мРНК hBD3 и мобилизация пептидов нарушены [9,10,23].Поэтому мы предположили, что собачьи пациенты с БА также могут иметь пониженную экспрессию дефенсина, что предрасполагает их к вторичной инфекции. Чтобы проверить эту гипотезу, были взяты образцы кожи для пункционной биопсии как с пораженной (подмышечной), так и с неповрежденной (межлопаточной) кожи пациентов с диагнозом AD. Мы не обнаружили статистически значимой разницы в экспрессии мРНК CBD103 и между пораженной (среднее: 1,1E + 04 копий / 10 нг общей РНК) и не поврежденной (среднее: 9.4E + 03 копии / 10 нг общей РНК) кожи (p = 0,42, рис. 6). Интересно, что S100A8, воспалительный белок, который, как известно, активируется в коже собак с атопией [31], проявлял в 6 раз более высокую экспрессию мРНК в очаге поражения (в среднем: 2,5E + 06 копий / 10 нг общей РНК) по сравнению с неповрежденным ( среднее: 4,4E + 05 копий / 10 нг общей РНК) кожи. В качестве контроля в этих экспериментах ген домашнего хозяйства, RPS5, экспрессировался на равных уровнях между двумя участками кожи (рис. 6).

Рис. 6

Экспрессия CBD103 при AD.Количественный анализ с помощью ОТ-ПЦР абсолютного числа копий транскриптов мРНК, кодирующих RPS5, CBD103 и S100A8, в РНК, выделенной из биоптатов пораженных и не пораженных участков кожи собак (n = 18) с диагнозом AD. Планки погрешностей представляют стандартную ошибку.

Обсуждение

β-дефенсины являются ключевыми эффекторными молекулами врожденного иммунитета, экспрессируемыми на многих поверхностях тела, включая кожу. Исследования β-дефенсинов в коже почти полностью сосредоточены на пептидах человека [32], включая исследования экспрессии [17,18], регуляции [33,34,35] и связи с кожной инфекцией [12,13,36] и др. заболевания, такие как псориаз и БА [10,11].Сообщалось о нескольких исследованиях β-дефензинов кожи на животных моделях, за исключением модели на собаках [8,15,16,24,37,38]. Настоящее исследование направлено на расширение наших знаний о собачьих β-дефензинах путем количественной оценки экспрессии CBD103 в здоровой коже, определения генетической изменчивости CBD103 среди и внутри разных пород, характеристики антибактериальной активности CBD103 и CBD103ΔG23 и оценки экспрессии CBD103. № из кожных покровов с повреждениями и без повреждений у собак с AD.

Из всех β-дефенсинов собак CBD103 экспрессируется в коже до самых высоких уровней. В соответствии с данными, представленными здесь, ранее сообщалось о локальной экспрессии CBD103 в кератиноцитах и ​​фолликулярных эпителиальных клетках [24]. Чтобы определить возможные вариации в экспрессии CBD103 в коже собак, мы получили образцы кожи в дорсальной и вентральной областях у собак, не страдающих кожными заболеваниями. CBD103 Экспрессия мРНК была примерно одинаковой между сайтами экспрессии как внутри одной собаки, так и между другими тестируемыми.Эти количественные данные подтверждают результаты исследования Wingate et al [15], в котором качественная ПЦР продемонстрировала продукты ПЦР сходной интенсивности с помощью гель-электрофореза. Ортолог CBD103 человека, hBD3, проявляет конститутивную экспрессию на низком уровне; однако в присутствии воспалительных стимулов, таких как инактивированные нагреванием бактерии и TNF-α, клетки кератиноцитов человека отвечали 20-30-кратным увеличением экспрессии hBD3 [18]. В отличие от низкого исходного уровня экспрессии у людей, конститутивная экспрессия мРНК CBD103 и заметно высока в коже собак.В моделях культуры клеток кератиноцитов собак мы не смогли индуцировать CBD103 сверх конститутивных уровней с помощью различных бактериальных или провоспалительных стимулов, включая IL-1β, гемолитический Streptococcus и S. pseudintermedius (неопубликованные результаты). Потребуются дальнейшие исследования, чтобы определить, отклоняются ли уровни экспрессии CBD103 и при каких-либо обстоятельствах от основных, о которых мы сообщаем здесь.

Собака представляет собой интересный вид для изучения генетической изменчивости β-дефенсина, поскольку существует два общих полиморфизма: делеция из 3 пар оснований в CBD103, и полиморфизм числа копий гена.Мы обнаружили, что последовательность вариантов CBD103, Δ G23 часто встречается у золотистых ретриверов и лабрадоров, в соответствии с другим исследованием, в котором также сообщалось об этом варианте у немецких дог, басенджи и пуделей [8]. В то время как CBD103 Δ G23 отвечает за доминирующий черный окрас шерсти у некоторых пород, цвет шерсти у золотистых ретриверов и желтых лабрадоров не зависит от их генотипа CBD103 из-за генетических мутаций в Mc1r [39] .Второй аспект генетической гетерогенности — это полиморфизм числа копий гена, который обеспечивает генетическую пластичность и наблюдается как у собак, так и у человеческих β-дефенсинов. И у золотистых ретриверов, и у лабрадоров было количество копий гена CBD103 , которое варьировалось примерно от 2 до 4 копий на диплоидный геном. Два исследования с использованием образцов биопсии человека и клеточной культуры продемонстрировали прямую корреляцию между экспрессией мРНК β-дефенсина и количеством копий гена [40,41]. В настоящее время неизвестно, приводит ли увеличенное число копий гена у собаки аналогичным образом к увеличению экспрессии β-дефенсина.

Одной из целей этого исследования было охарактеризовать антимикробную активность CBD103 и варианта CBD103ΔG23. Учитывая высокую частоту аллеля CBD103 Δ G23 у некоторых пород собак, мы задались вопросом, следует ли учитывать измененную антимикробную активность вариантного пептида при разработке моделей, объясняющих необычайно высокую частоту этого полиморфизма. Для проверки антибактериальной активности были получены клинические изоляты метициллин-чувствительного и метициллин-устойчивого S.pseudintermedius , частый возбудитель кожи собак. Кроме того, мы культивировали и изолировали эндогенную микрофлору кожи здоровой собаки, в том числе: B. licheniformis , Micrococcus sp. и B. cereus . Интересно, что CBD103 и CBD103ΔG23 показали одинаковую антибактериальную активность in vitro против всех протестированных бактерий. Это наблюдение особенно важно из-за преобладания генотипа CBD103 Δ G23 у некоторых наиболее распространенных пород собак, включая лабрадоров и золотистых ретриверов.CBD103 и CBD103ΔG23 также проявляли одинаково сильную антибактериальную активность по сравнению с hBD3 и соответствующим вариантом hBD3ΔG23. Сходная активность CBD103 и CBD103ΔG23 позволяет предположить, что антимикробная функция не может быть важным фактором для объяснения изменений частоты аллелей в популяциях собак.

Как у человека, так и у собак, пациенты часто осложняются рецидивирующими вторичными бактериальными инфекциями: S. aureus у людей [9,42] и S. pseudintermedius у собак [43].Предыдущие исследования продемонстрировали снижение убивающей способности эпидермиса у людей с БА из-за снижения экспрессии hBD3 [9,10,22] и мобилизации на поверхность кожи [23]. Интересно, что мы не обнаружили разницы в уровнях транскрипта мРНК CBD103 между образцами с поражением и без него. Наши данные согласуются с данными другого исследования, в котором сообщается об одинаковой экспрессии мРНК CBD103 и в пораженной и не поврежденной коже при БА [24]. Однако мы не заметили каких-либо различий в экспрессии мРНК CBD103 и между здоровыми собаками и собаками с БА, в отличие от того, о чем сообщалось ранее [24].Генетические различия с точки зрения вариации аллеля CBD103ΔG23 и / или количества копий гена могут потенциально способствовать смещению отбора в отношении патогенов окружающей среды и / или ассоциаций болезней, особенно в тех породах, где наблюдаются обе вариации. Однако мы обнаружили, что CBD103 и CBD103ΔG23 являются мощными антибактериальными пептидами с практически эквивалентной антибактериальной активностью, особенно против распространенных патогенов кожи собак. Таким образом, наши данные показывают, что измененная экспрессия CBD103 в атопической коже не является причиной повторяющихся вторичных бактериальных инфекций.

В целом, экспрессия в коже, высокая антимикробная активность и полиморфизм числа копий гена являются свойствами, общими для CBD103 и его человеческого ортолога. С другой стороны, очевидная конститутивная экспрессия в здоровой коже и AD отличает собачий β-дефенсин от его человеческого аналога. Результаты этого исследования помогут сформировать дальнейшее развитие домашней собаки как ценной модели биологии β-дефенсина в коже.

Благодарности

Мы благодарим доктора В.Дениз М. Имаи за ее помощь в визуализации иммуногистохимического обнаружения CBD103 и доктору Николь Экхольм, доктору Кейси Степник, Монике Краточвил, Джуди Шеттлер и Нине Тобе за помощь в получении клинических образцов. Мы также благодарим Hiutung Chu за критическое прочтение рукописи. Исследование было частично поддержано грантами Центра ветеринарной медицины Калифорнийского университета в Дэвисе, Центра здоровья домашних животных и Национального института здравоохранения (AI32738, AI50843 и AI76246). B.C.L. получил поддержку от NIH T32AI60555 и T32RR021312, а также Школы ветеринарной медицины Калифорнийского университета в Дэвисе, программы подготовки ветеринарных ученых.

Список литературы

1. Шредер Дж. М., Хардер Дж.: Противомикробные кожные пептиды и белки. Cell Mol Life Sci 2006; 63: 469–486.
2. Бернард Дж. Дж., Галло Р. Л.: Защита границ: контрольная роль защитных пептидов хозяина в коже.Cell Mol Life Sci 2011; 68: 2189–2199.
3. Ганц Т: Дефенсины: антимикробные пептиды врожденного иммунитета. Нат Рев Иммунол 2003; 3: 710–720.
4. Ганц Т: Дефенсины: антимикробные пептиды позвоночных.C R Biol 2004; 327: 539–549.
5. Лерер Р.И.: Дефенсины приматов. Nat Rev Microbiol 2004; 2: 727–738.
6. Варога Д., Пуфе Т., Хардер Дж., Шредер Дж. М., Ментлейн Р., Мейер-Хофферт Ю., Голдринг М.Б., Тиллманн Б., Хассенпфлюг Дж., Паульсен Ф .: Человеческий бета-дефенсин 3 опосредует процессы ремоделирования тканей в суставном хряще за счет увеличения уровней металлопротеиназ и снижение уровня их эндогенных ингибиторов.Arthritis Rheum 2005; 52: 1736–1745.
7. Bowdish DM, Davidson DJ, Hancock RE: Иммуномодулирующие свойства дефензинов и кателицидинов. Curr Top Microbiol Immunol 2006; 306: 27–66.
8. Candille SI, Kaelin CB, Cattanach BM, Yu B, Thompson DA, Nix MA, Kerns JA, Schmutz SM, Millhauser GL, Barsh GS: мутация β-дефенсина вызывает черный цвет шерсти у домашних собак.Наука 2007; 318: 1418–1423.
9. Онг П.Й., Отаке Т., Брандт С., Стрикленд I, Богуневич М., Ганц Т., Галло Р.Л., Леунг Д.Ю.: Эндогенные антимикробные пептиды и кожные инфекции при атопическом дерматите. N Engl J Med 2002; 347: 1151–1160.
10. Howell MD, Boguniewicz M, Pastore S, Novak N, Bieber T., Girolomoni G, Leung DY: Механизм дефицита hBD-3 при атопическом дерматите.Clin Immunol 2006; 121: 332–338.
11. Hollox EJ, Huffmeier U, Zeeuwen PL, Palla R, Lascorz J, Rodijk-Olthuis D, van de Kerkhof PC, Traupe H, de Jongh G, den Heijer M, Reis A, Armor JA, Schalkwijk J: Псориаз связан с повышенной Число геномных копий бета-дефенсина. Нат Генет 2008; 40: 23–25.
12. Meyer-Hoffert U, Schwarz T, Schroder JM, Glaser R: Экспрессия человеческого бета-дефензина-2 и -3 в verrucae vulgares и condylomata acuminata. J Eur Acad Dermatol Venereol 2008; 22: 1050–1054.
13. Мейер-Хофферт У., Шварц Т., Шредер Дж. М., Глейзер Р.: Повышенная экспрессия бета-дефенсина 3 человека в контагиозном моллюске.Clin Exp Dermatol 2010; 35: 190–192.
14. Патил А.А., Цай Й., Санг И., Блеча Ф., Чжан Г.: Межвидовой анализ семейства генов β-дефенсина млекопитающих: наличие кластеров синтенных генов и преимущественная экспрессия в мужском репродуктивном тракте. Physiol Genomics 2005; 23: 5–17.
15. Wingate KV, Torres SM, Silverstein KA, Hendrickson JA, Rutherford MS: Экспрессия эндогенных антимикробных пептидов в нормальной коже собак.Vet Dermatol 2009; 20: 19–26.
16. Эрлес К., Браунли Дж.: Экспрессия бета-дефенсинов в дыхательных путях собак и антимикробная активность против bordetella bronchiseptica. Вет Иммунол Иммунопатол 2010; 135: 12–19.
17. Хардер Дж., Бартельс Дж., Кристоферс Е, Шредер Дж. М.: пептидный антибиотик из кожи человека.Природа 1997; 387: 861.
18. Хардер Дж., Бартельс Дж., Кристоферс Э., Шредер Дж. М.: Выделение и характеристика человеческого бета-дефенсина-3, нового человеческого индуцибельного пептидного антибиотика. J Biol Chem 2001; 276: 5707–5713.
19. Chen WK, Swartz JD, Rush LJ, Alvarez CE: Картирование структурных вариаций ДНК у собак.Genome Res 2009; 19: 500–509.
20. Hardwick RJ, Machado LR, Zuccherato LW, Antolinos S, Xue Y, Shawa N, Gilman RH, Cabrera L, Berg DE, Tyler-Smith C, Kelly P, Tarazona-Santos E, Hollox EJ: всемирный анализ бета-дефенсина Вариация числа копий предполагает недавний отбор высокоэкспрессируемой копии гена DEFB103 в Восточной Азии.Hum Mutat 2011; 32: 743–750.
21. Марселла Р., Джироломони Г.: Собачьи модели атопического дерматита: полезный инструмент с неиспользованным потенциалом. Дж. Инвест Дерматол 2009; 129: 2351–2357.
22. Nomura I, Goleva E, Howell MD, Hamid QA, Ong PY, Hall CF, Darst MA, Gao B, Boguniewicz M, Travers JB, Leung DY: Цитокиновая среда атопического дерматита, по сравнению с псориазом, кожа предотвращает индукцию врожденного иммунитета. гены ответа.J Immunol 2003; 171: 3262–3269.
23. Kisich KO, Carspecken CW, Fieve S, Boguniewicz M, Leung DY: Неэффективное уничтожение Staphylococcus aureus при атопическом дерматите связано со сниженной мобилизацией бета-дефенсина-3 человека. J Allergy Clin Immunol 2008; 122: 62–68.
24. van Damme CM, Willemse T., van Dijk A, Haagsman HP, Veldhuizen EJ: Измененная кожная экспрессия бета-дефензинов у собак с атопическим дерматитом. Мол Иммунол 2009; 46: 2449–2455.
25. Wehkamp J, Chu H, Shen B, Feathers RW, Kays RJ, Lee SK, Bevins CL: Антимикробные пептиды клеток Панета: топографическое распределение и количественная оценка в тканях желудочно-кишечного тракта человека.Письма FEBS 2006; 580: 5344–5350.
26. Леонард BC, Chu H, Johns JL, Gallo RL, Moore PF, Marks SL, Bevins CL: Экспрессия и активность нового кателицидина от домашних кошек. PLoS One 2011; 6: e18756.
27. Бринкхоф Б., Спи Б., Ротуйзен Дж., Пеннинг Л.С.: Разработка и оценка эталонных генов собак для точной количественной оценки экспрессии генов.Анальная биохимия 2006; 356: 36–43.
28. Toonen RJ, Hughes S: Повышенная производительность анализа фрагментов на автоматическом секвенаторе ABI prism 377 с использованием мембранной гребенки и программного обеспечения STRand. Биотехники 2001; 31: 1320–1324.
29. Linzmeier RM, Ganz T: Полиморфизм числа копий гена дефенсина человека: всесторонний анализ независимых вариаций в областях альфа- и бета-дефенсина в 8p22-p23.Геномика 2005; 86: 423–430.
30. Лерер Р.И., Розенман М., Харвиг С.С., Джексон Р., Эйзенхауэр П.: Сверхчувствительные анализы эндогенных антимикробных полипептидов. J. Immunol. Методы 1991; 137: 167–173.
31. Merryman-Simpson AE, Wood SH, Fretwell N, Jones PG, McLaren WM, McEwan NA, Clements DN, Carter SD, Ollier WE, Nuttall T: Экспрессия гена (мРНК) при атопическом дерматите собак: анализ микроматриц.Ветеринарный дерматол 2008; 19: 59–66.
32. Хардер Дж., Шредер Дж. М.: Противомикробные пептиды в коже человека. Chem Immunol Allergy 2005; 86: 22–41.
33. Harder J, Meyer-Hoffert U, Wehkamp K, Schwichtenberg L, Schroder JM: Дифференциальная индукция генов бета-дефенсинов человека (hBD-1, -2, -3 и -4) в кератиноцитах ингибируется ретиноевой кислотой.Дж. Инвест Дерматол 2004; 123: 522–529.
34. Соренсен OE, Cowland JB, Theilgaard-Monch K, Liu L, Ganz T., Borregaard N: заживление ран и экспрессия антимикробных пептидов / полипептидов в кератиноцитах человека, как следствие общих факторов роста. J Immunol 2003; 170: 5583–5589.
35. Соренсен О.Е., Тапа Д.Р., Розенталь А., Лю Л., Робертс А.А., Ганц Т.: Дифференциальная регуляция экспрессии бета-дефенсина в коже человека с помощью микробных стимулов. J Immunol 2005; 174: 4870–4879.
36. Kisich KO, Howell MD, Boguniewicz M, Heizer HR, Watson NU, Leung DY: Конститутивная способность кератиноцитов человека убивать Staphylococcus aureus зависит от бета-дефенсина 3.Дж. Инвест Дерматол 2007; 127: 2368–2380.
37. Фазакерли Дж., Кроссли Дж., МакЭван Н., Картер С., Наттолл Т.: Противомикробная эффективность бета-дефенсина 3 in vitro против изолятов Staphylococcus pseudintermedius из здоровой и атопической кожи собак. Ветеринарный дерматол 2010; 21: 463–468.
38. Санторо Д., Буник Д., Грейвс Т.К., Кэмпбелл К.Л.: Экспрессия и распределение антимикробных пептидов в коже здоровых гончих. Vet Dermatol 2011; 22: 61–67.
39. Everts RE, Rothuizen J, van Oost BA: Идентификация преждевременного стоп-кодона в гене рецептора меланоцит-стимулирующего гормона (Mc1r) у лабрадоров и золотистых ретриверов с желтым окрасом шерсти.Аним Генет 2000; 31: 194–199.
40. Fellermann K, Stange DE, Schaeffeler E, Schmalzl H, Wehkamp J, Bevins CL, Reinisch W., Teml A, Schwab M, Lichter P, Radlwimmer B, Stange EF: полиморфизм кластера генов хромосомы 8 с низким содержанием гена бета-дефенсина 2 человека число копий предрасполагает к болезни Крона толстой кишки.Am J Hum Genet 2006; 79: 439–448.
41. Groth M, Wiegand C, Szafranski K, Huse K, Kramer M, Rosenstiel P, Schreiber S, Norgauer J, Platzer M: как количество копий, так и вариации последовательности влияют на экспрессию человеческого DEFB4. Гены Иммун 2010; 11: 458–466.
42. Boguniewicz M, Leung DY: Атопический дерматит: заболевание, связанное с изменением кожного барьера и нарушением иммунной регуляции.Immunol Rev 2011; 242: 233–246.
43. DeBoer DJ, Marsella R: Целевая группа ACVD по атопическому дерматиту собак (XII): взаимосвязь кожных инфекций с патогенезом и клиническим течением атопического дерматита собак. Вет Иммунол Иммунопатол 2001; 81: 239–249.

Автор Контакты

Проф.Чарльз Л. Бевинс

Медицинский факультет Калифорнийского университета Дэвис

3146 Таппер Холл — MMI

Дэвис, Калифорния 95616-8645 (США)

Тел. +1 530 754 6889, электронная почта [email protected]

Подробности статьи / публикации

Предварительный просмотр первой страницы

Получено: 1 сентября 2011 г.
Принято: 19 октября 2011 г.
Опубликовано в Интернете: 19 января 2012 г.
Дата выпуска: апрель 2012 г.

Количество страниц для печати: 12
Количество рисунков: 6
Количество столов: 1

ISSN: 1662-811X (печатный)
eISSN: 1662-8128 (онлайн)

Для дополнительной информации: https: // www.karger.com/JIN

Авторские права / Дозировка препарата / Заявление об ограничении ответственности

Авторские права: Все права защищены. Никакая часть данной публикации не может быть переведена на другие языки, воспроизведена или использована в любой форме или любыми средствами, электронными или механическими, включая фотокопирование, запись, микрокопирование, или с помощью какой-либо системы хранения и поиска информации, без письменного разрешения издателя. .
Дозировка лекарств: авторы и издатель приложили все усилия, чтобы гарантировать, что выбор и дозировка лекарств, указанные в этом тексте, соответствуют текущим рекомендациям и практике на момент публикации.Тем не менее, ввиду продолжающихся исследований, изменений в правительственных постановлениях и постоянного потока информации, касающейся лекарственной терапии и реакций на них, читателю рекомендуется проверять листок-вкладыш для каждого препарата на предмет любых изменений показаний и дозировки, а также дополнительных предупреждений. и меры предосторожности. Это особенно важно, когда рекомендованным агентом является новый и / или редко применяемый препарат.
Отказ от ответственности: утверждения, мнения и данные, содержащиеся в этой публикации, принадлежат исключительно отдельным авторам и соавторам, а не издателям и редакторам.Появление в публикации рекламы и / или ссылок на продукты не является гарантией, одобрением или одобрением рекламируемых продуктов или услуг или их эффективности, качества или безопасности. Издатель и редактор (-ы) не несут ответственности за любой ущерб, причиненный людям или имуществу в результате любых идей, методов, инструкций или продуктов, упомянутых в контенте или рекламе.

Героический золотистый ретривер укусил гремучую змею в лицо, защищая своего хозяина в Аризоне

• Золотистый ретривер по имени Тодд спас свою хозяйку Паулу Гудвин от гремучей змеи во время похода в Гимн, штат Аризона, в пятницу
• Змея укусила его за щеку, когда он заблокировал ногу Гудвину
• Фотографии щенка с опухшим лицом стали вирусными в социальных сетях

от Megan Sheets для Dailymail.com

Опубликовано: 22:37 BST, 1 июля 2018 г. | Обновлено: 22:41 BST, 1 июля 2018 г.

Собака была провозглашена героем за то, что спасла своего хозяина от гремучей змеи, при этом укусив ее за морду.

Золотистый ретривер по имени Тодд был в походе со своей хозяйкой Полой Гудвин в Гимн, штат Аризона, в пятницу, когда пара наткнулась на гремучую змею.

Когда Гудвин неосознанно собирался наступить на змею, Тодд заметил ее и прыгнул перед ногой своего хозяина.

К сожалению, его героизм не обошелся без последствий: гремучка укусила его в лицо, в результате чего его щека сильно распухла.

Гудвин разместила фотографии выздоравливающего ретривера в своем Facebook с подписью: «Мой герой, щенок Тодд, спас меня».

Золотистый ретривер по имени Тодд спас своего хозяина от гремучей змеи, которая впоследствии укусила его в лицо. Фотографии, на которых он улыбается, несмотря на травму, стали вирусными в социальных сетях

От укуса щеки лицо Тодда сильно опухло, но ожидается, что он поправится.

Тодд был в походе со своей хозяйкой Полой Гудвин в пятницу в Гимне, штат Аризона, когда они наткнулись на гремучку-оскорбителя.

Тодд был доставлен в ветеринарную клинику Anthem для лечения и, как ожидается, выздоровеет.

Фотографии, на которых он улыбается, несмотря на травмированное лицо, стали вирусными в социальных сетях, и фанаты хвалят его смелость и позитивный настрой.

Одна популярная учетная запись Twitter под названием We Rate Dogs опубликовала о Тодде с подписью: «Это Тодд. Вчера он спас своего человека от гремучей змеи. Настоящий чертов герой. Ожидается, что он полностью выздоровеет, и 15 октября он был награжден нашим пятым призом ».

Пост лайкнули более 131 000 раз.

Гудвин обнимает своего героического щенка после того, как принесла его домой из ветеринарной клиники

Один популярный аккаунт в Твиттере под названием We Rate Dogs написал в Твиттере о героическом поступке Тодда

(слева) Гудвин держит Тодда, когда он был еще щенком.(справа) ретривер позирует в рубашке с надписью: «Это моя накидка»

Объявление

Подробнее на DailyMail.co.uk