АСП (Анатоксин Стафилококковый Поливалентный) — Ветаптека ФаунаХаус

Опис

АСП (Анатоксин Стафилококковый Поливалентный)

1 ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ.

1.1 Анатоксин стафилококковый поливалентный (АСП) предназначен для лечения и профилактики стафилококкозов у собак. Для изготовления анатоксина АСП использованы токсины А, В, С, а также ряд соматических антигенов стафилококка. Препарат содержит также иммуномодулирующий компонент, выполняющий иммунокоррегирующие и иммуностимулирующие функции.
1.2 Препарат по внешнему виду представляет собой суспензию от белого до светло-коричневого цвета.
1.3 Анатоксин следует хранить в темном сухом месте при температуре 4-10 град. С.

2 ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА. 
2.1 Препарат обеспечивает быструю и мощную стимуляцию специфического иммунного ответа на различные экзотоксины и соматические антигены стафилококков. Это обуславливает быструю гибель возбудителя в организме, а также формирует в дальнейшем невосприимчивость к стафилококковой инфекции.

3 ПРИМЕНЕНИЕ.
3.1 Для лечения собак анатоксин вводят внутримышечно с соблюдением правил асептики по следующей схеме:
==========================================================================
№ инъекции                                           Масса животного (килограмм)
до 5         5-10           10-20           20-40
——————————————————————————————————-
1 инъекция (доза в мл)              0.1              0.2              0.3              0.4
2 инъекция (доза в мл)              0.2              0.4              0.6              0.8
3 инъекция (доза в мл)              0.3              0.6              0.9              1.2
4 инъекция (доза в мл)               0.5              0.9              1.3              1.6
5 инъекция (доза в мл)              0.7               1.2              1.6               2.0
==========================================================================

3.2 Интервал между инъекциями 2-3 дня. При необходимости количество инъекций с возрастающими дозами может быть увеличено или уменьшено.
3.3 Для профилактики стафилококкоза препарат вводят внутримышечно двукратно из расчета по 0.1 мл на 1 кг массы животного, но не более 2.0 мл. Интервал между введениями должен составлять от 15 до 20 дней.
3.4 Для предотвращения побочных аллергенных явлений допускается одновременное использование антигистаминных препаратов. Препарат начинают применять не раньше месячного возраста

Производитель. Научно-исследовательский центр Игнатова, Россия.

АСП (анатоксин)

Состав и форма выпуска. Для изготовления анатоксина стафилококкового поливалентного (АСП) используются экзотоксины и ряд соматических антигенов стафилококков. Препарат содержит иммуностимулирующий компонент, повышающий иммунный ответ на стафилококковые антигены.

Суспензия белого или светло-желтого цвета. Ампулы и флаконы по 6, 10 и 200 мл.

Фармакологическое действие. Действие препарата сводится к специфической стимуляции иммунного ответа на различные экзотоксины и соматические антигены стафилококков, что обуславливает быструю гибель возбудителя в организме животного, а также формирует в дальнейшем невосприимчивость к стафилококковой инфекции.

Показания. Лечение и профилактика дерматитов, отитов, вагинитов, баланопоститов, раневых инфекций и маститов стафилококковой этиологии или осложненных секундарной стафилококковой инфекцией у собак и кошек.

Дозы и способ применения. Анатоксин стафилококковый поливалентный вводят внутримышечно с соблюдением правил асептики и антисептики. С лечебной целью четырех — пятикратно (с учетом тяжести заболевания) с интервалом в 2 — 3 дня в возрастающих дозах в зависимости от массы тела животного. Порядок применения указан в таблице.

 

Порядковый номер инъекции	Масса животного (кг) / доза препарата (мл)
	До 5	От 5 до 10	От 10 до 20	Свыше 20
1	0,1	0,2	0,3	0,4
2	0,2	0,4	0,6	0,8
3	0,3	0,6	0,9	1,2
4	0,5	0,9	1,3	1,7
5	0,7	1,2	1,6	2,0

 

В случае обширных поражений рекомендуется уменьшить дозу в 2 раза, а количество инъекций увеличить на одну (при этом интервал между инъекциями не изменяется и остается 2-3 дней). Для профилактики стафилококковых инфекций препарат вводят двукратно из расчета 0,1 мл на 1 кг массы животного, но не более 2,0 мл на голову. Интервал между введениями 15-20 дней. С профилактической целью обрабатывают беременных самок и потомство в возрасте 35 — 40 дней.

Побочные действия. В рекомендуемых дозах не наблюдаются. В очень редких случаях возможны аллергические реакции. Для их предотвращения можно использовать антигистаминные препараты (димедрол, супрастин).

Противопоказания. Повышенная чувствительность на предыдущее введение. Не применять животным моложе 1 месяца.

Особые указания. Необходимо строго соблюдать дозировку и интервалы между инъекциями. Препарат, неиспользованный в течение 24-х часов после открытия флакона (ампулы), обеззараживают кипячением в течение 3-5 минут.

Условия хранения. В заводской упаковке в сухом, защищенном от света месте при температуре от 2 до 10 °С. Срок годности — 18 месяцев.

Производитель. Научно-исследовательский центр Игнатова, Россия.

описание состава и свойств, показания к применению :: SYL.ru

Тяжелые инфекционные болезни — проблемы, с которыми приходится сталкиваться многим людям. И в некоторых случаях врачи назначают препарат под названием «Анатоксин стафилококковый». Что представляет собой подобное средство? Для чего оно используется? Эти вопросы интересуют многих пациентов.

Что представляет собой препарат «Анатоксин стафилококковый»

Данное лекарство выпускается в виде прозрачного раствора (иногда жидкость может иметь светлый желтоватый оттенок), помещенного в герметичные стеклянные ампулы. Основным активным компонентом является стафилококковый токсин. Естественно, перед употреблением его обезвреживают при помощи формалина и высоких температур, а затем очищают от так называемых балластных белков. Препарат «Анатоксин стафилококковый» не содержит в себе ни антибиотиков, ни консервантов. Сразу же после введения лекарство стимулирует работу иммунной системы, способствует выработке специфических антител. Таким образом, удается не только устранить стафилококковую инфекцию, но также и выработать невосприимчивость организма к патогенным микроорганизмам.

Показания к применению

Данный препарат относится к группе бактериальных вакцин. При помощи него проводят иммунотерапию при некоторых инфекционных заболеваниях. В частности, показанием к его применению является острая инфекционная болезнь, при которой в роли возбудителя выступают стафилококки. Кроме того, при помощи данного препарата лечат хронические стафилококковые заболевания на стадии обострения. При некоторых травмах или хирургических вмешательствах пациентам вводят разовую дозу препарата в качестве профилактики дальнейших осложнений. Кстати, подобные вакцины используют не только для лечения людей. Например, препарат «Анатоксин стафилококковый поливалентный» предназначен для устранения инфекции у собак. Но следует понимать, что только врач может назначить подобное лекарство.

Раствор для инъекций «Стафилококковый анатоксин»: инструкция по применению

Данное средство предназначено исключительно для подкожного введения — внутривенные и внутримышечные инъекции запрещены. Вводят раствор под кожу в нижнем углу лопатки, чередуя стороны. В большинстве случаев пациенту назначают семь инъекций, перерыв между которыми составляет два дня. Лишь в том случае, если терапевтический эффект появился сразу же, а симптомы болезни исчезли, врач может сократить курс лечения к пяти введениям. Доза возрастает с каждым введением. Например, при первой инъекции вводят 0,1 мл вещества, а во время седьмой его количество возрастает до 1,5 мл. Ни в коем случае нельзя вводить препарат, если предварительно была нарушена целостность ампулы или условия хранения. Раствор также непригоден, если присутствуют какие-то физические изменения, например, в нем образовались хлопья. После вскрытия ампулы лекарство должно быть использовано немедленно. Во время терапии пациенту запрещено использовать некоторые другие препараты, в частности, антистафилококковую плазму и иммуноглобулины.

Противопоказания к использованию

Препарат «Анатоксин стафилококковый» запрещено применять в том случае, если в анамнезе пациента указаны тяжелые аллергические реакции, например, отек Квинке или анафилактический шок. Лекарство также не назначают беременным женщинам, так как исследования этой категории пациенток не проводились. Противопоказаниями также считаются острые и хронические инфекционные болезни, возбудителям которых являются не стафилококки, — в таких случаях перед началом терапии необходимо подождать хотя бы месяц после выздоровления.

Возможны ли побочные реакции

У некоторых пациентов применение препарата «Анатоксин стафилококковый» может быть сопряжено с побочным реакциями. В частности, наиболее часто наблюдаются местные побочные эффекты — кожа в области инъекции может слегка отекать и краснеть. Иногда в месте укола сохраняется болезненность. Возможны и системные нарушения. В частности, время от времени пациенты жалуются на сильную слабость и общее недомоганием. Изредка наблюдается повышение температуры тела до 37,5 градуса. Наличие подобных симптомов в большинстве случаев не является причиной для того, чтобы прекращать терапию, — чаще всего побочные реакции проходят сами по себе и не несут угрозы для здоровья человека (за исключением тяжелых форм аллергии). Тем не менее, об их наличии стоит обязательно рассказать врачу — возможно, нужно продлить перерыв между инъекциями до трех дней.

Пиобактериофаг поливалентный очищенный 20мл n4

Состав 

Пиобактериофаг поливалентный жидкий представляет собой смесь стерильных фильтров фаголизатов стафилококков, стрептококков (в т.ч. энтерококков), эшерихий коли, протея (мирабилис и вульгарис), псевдомонас аэругиноза и клебсиелл пневмония.

консервант — хинозол в конечной концентрации 0,1±0,02 мг/мл.

Форма выпуска

Раствор для приема внутрь, местного и наружного применения во флаконах по 20 мл, в упаковке 4 флакона.

Фармакологическое действие :

Пиобактериофаг поливалентный очищенный оказывает иммуностимулирующее действие. Обладает способностью специфически лизировать бактерии стафилококков, стрептококков, протея (мирабилис и вульгарис), синегнойной палочки, клебсиелл пневмонии, эшерихии коли (различных серогрупп).

Показания для применения

Лечение и профилактика различных форм гнойно-воспалительных и энтеральных заболеваний, вызванных бактериями Staphylococcus, Streptococcus, Proteus, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli.

Противопоказания

Гиперчувствительность к компонентам препарата.

Способ применения и дозы

Препарат используют для приема внутрь (через рот), в виде клизм, аппликаций, орошений, введения в полости ран, вагины, матки, носа, пазух носа, а также в дренированные полости: абсцессов, брюшную, плевральную, мочевого пузыря, почечной лоханки.

Внутрь препарат принимают натощак за 0,5–1 час до приема пищи.

Рекомендуемые дозировки препарата зависят от возраста пациента и способа введения препарата

В случае обработки полости гнойного очага химическими антисептиками перед применением бактериофага она должна быть промыта стерильным 0,9% раствором натрия хлорида.Лечение гнойно-воспалительных заболеваний с локализованными поражениями должно проводиться одновременно как местно, так и приемом препарата внутрь.

При лечении ангины, фарингита, ларингита препарат используют для полосканий полости рта и глотки 3 раза в день по 10–20 мл, курс лечения 7–10 дней.

При лечении бронхита, пневмонии препарат принимают внутрь 3 раза в день по 10–20 мл, а также применяют в виде аэрозолей и ингаляций (без подогрева и использования ультразвука), курс лечения 15–20 дней.

При лечении отита препарат используют для промывания и введения в полость среднего уха по 2–5 мл 1–3 раза в день. Курс лечения 7–15 дней.

При лечении воспаления пазух носа препарат используют для промывания полости носа, носоглотки и пазух носа в дозе 5–10 мл и введения в пазухи 2–3 мл. Процедуру повторяют ежедневно однократно в течение 7–10 дней. Кроме того, препарат вводят в полость носа в виде турунд, смоченных бактериофагом, по очереди в каждый носовой ход и оставляют в течение 0,5–1 часа. Процедуру повторяют 3 раза в день, курс лечения 7 — 15 дней.

При лечении стоматита и хронического пародонтита препарат используют в виде полосканий полости рта 3–4 раза в день в дозе 10–20 мл, а также введением в пародонтальные карманы турунд, пропитанных бактериофагом, на 5–10 мин, курс лечения 7–10 дней.

При коньюнктивите и кератоконьюнктивите препарат применяют по 2–3 капли 4 — 5 раз в день, курс лечения 5–7 дней; при гнойной язве роговицы —по 4–5 капель в день в течение 7–10 дней, при гнойном иридоциклите — по 6–8 капель каждые 3 часа в сочетании с приемом внутрь в терапевтических дозировках в течение 7–10 дней.

При абсцессе после вскрытия и удаления гнойного содержимого препарат вводят в количестве меньшем, чем объем удаленного гноя ежедневно однократно, курс лечения 7 — 10 дней.

При перитоните и плеврите препарат вводят в дренированные полости — брюшную и плевральную через дренажные трубки ежедневно однократно 20–70 мл, курс лечения 10 — 15 дней.

При остеомиелите препарат вводят в полость раны через турунды, дренажи в количестве 10–30 мл ежедневно однократно, курс лечения 15–20 дней.

При лечении мастита, нагноений ран и ожогов, препарат применяют в виде орошения, аппликаций, повязок, введения в дренаж в дозе 5–50 мл в зависимости от очага поражения не менее 1 раз в день, курс лечения 10–15 дней.

При лечении гнойно-воспалительных гинекологических заболеваний (нагноений ран, эндометрита, вульвита, бартолинита, кольпита, сальпингоофорита) препарат используют для орошений, аппликаций, вводят в полости ран, вагины, матки по 5–20 мл один раз в день в течение 7–10 дней.

При цистите, пиелонефрите, уретрите препарат принимают внутрь в терапевтической дозе 3 раза в день за 1 час до еды в течение 10–20 дней. В том случае, если полость мочевого пузыря или почечной лоханки дренированы, препарат вводят через цистостому или нефростому 1–3 раза в день по 20–50 мл в мочевой пузырь и 5–7 мл в почечную лоханку, курс лечения 7–15 дней.

При гастроэнтероколите, панкреатите, холецистите, а также дисбактериозе кишечника бактериофаг принимают внутрь в возрастных дозировках 3 раза в день за 1 час до еды в течение 7–15 дней (по клиническим показаниям). При неукротимой рвоте препарат применяют в виде высоких клизм 2–3 раза в день по 20–40 мл. При дисбактериозе кишечника препарат может применяться с препаратами нормофлоры.

Для профилактики внутрибольничных хирургических инфекций препарат используют для обработки послеоперационных и свежеинфицированных ран в дозе 5 — 50 мл в зависимости от очага поражения ежедневно однократно в течение 5–7 дней.

Условия хранения:

Хранить в недоступном для детей месте при температуре не выше 8°С.

инструкция по применению, отзывы и цена

Автор Evgeny Kirsanov На чтение 4 мин. Просмотров 65 Опубликовано 14.03.2016

Стафилококковый анатоксин – это лекарственный препарат (вакцина) обладающий выраженным противотоксическим, иммуностимулирующим и антимикробным действием. Стафилококковый анатоксин представляет собой обработанный (очищенный) жидкий токсин стафилококка в ампулах по 1 мл и 10 штук в упаковке.
[содержание]

Анатоксин стафилококковый поливалентный предназначен только для активной иммунизации у животных, чаще у собак. Такая разновидность этого препарата изготовляется путем использования АВС и ряда соматических антигенов бактерии.

Препарат Стафилококковый анатоксин

Интересно то, что анатоксин действует против не только микроба, но и токсинов, синтезируемых им.

Анатоксин стафилококковый обеспечивает появление и стойкое укрепление иммунитета человека к стафилококку. Необходимо отметить то, что этот лекарственный препарат в основном применяется для специфической иммунотерапии.

[youtube]pyqmmqhU_ds[/youtube]

Интересно то, что сам по себе стафилококковый анатоксин представляет токсин, который был обезврежен формалином и высокими температурами под давлением.

Показания к применению анатоксина стафилококкового

Среди основных показаний к применению уместно упомянуть:

1. Стафилококковая инфекция у взрослых людей, протекающая остро, с целью обеспечения специфического иммунитета;
2. Инфекция, вызванная стафилококком при обострении хронической стадии с такой же целью, как и предыдущем случае.

Важно знать то, что полный курс терапии анатоксином стафилококковым включает 7 инъекций, осуществляемых каждых два дня с постепенно нарастающей дозой.

Противопоказания

Укол

Стафилококковый анатоксин противопоказан при острых инфекционных и неинфекционных болезнях, не связанных с этим микробом, а также обострении хронических заболеваний. В таком случае анатоксин вводится только по истечению одного месяца после выздоровления. Такой препарат также противопоказан при бронхиальной астме, так как может вызвать чрезмерную аллергическую реакцию.

Анатоксин противопоказан и при «сывороточной болезни», тяжелых аллергических проявлений в анамнезе, беременности, лактации, некомпенсированных болезнях почек, печени и сердечно-сосудистой системы. Также противопоказанием к применению этого препарата являются различные эндокринологические нарушения (сахарный диабет и прочие).

Побочные эффекты от применения лекарственного средства против микроорганизма

Стафилококковый анатоксин, отзывы которого гласят, что при его введении могут возникать различного рода местные и генерализованные (общие) реакции организма.

К общим реакциям необходимо отнести: повышение температуры тела до 38 градусов, общая слабость и вялость, ломота в суставах, а при склонности к аллергии, могут возникать анафилактический шок, отек Квинке, крапивница и отек слизистой трахеи. К местным относятся все признаки локализованного воспаления: боль, покраснение, отек, нарушение функции.

Важно понимать, что местная реакция после введения препарата может проявится и вследствие занесения с иглой микробов, находящихся на поверхности эпидермиса внутрь. Необходимо знать, что отзывы и возникновение этих проявлений могут зависеть от общего состояния пациента на момент проведения иммунизации.

Стафилококковый анатоксин, инструкция по применению

Это лекарственное средство строго назначают по следующей схеме: вводится только подкожно и первоначальная доза составляет 0,1 мл, прибавляя по 0,1 мл каждую инъекцию. Так делает до тех пор, пока едино разовая доза не станет 1,0 мл. следует отметить то, что эта доза является предельной и не должна превышаться в любом случае. Иногда, в экстренных случаях можно провести дозу в 0,5 мл, в область лопатки. Это делается для экстренной профилактики и является больше исключением, чем правилом.

Такая схема введения этого лекарственного средства (по инструкции) считается наиболее оправданной, так как в экспериментальных условиях показала свою эффективность, а также низкое количество побочный явлений и различного рода патологических проявлений.

[youtube]UrqQeGp9pPU[/youtube]

Необходимо добавить то, что появление различных проявлений, как общих, так и местных, не является противопоказанием к противопоказанию дальнейшей иммунизации. Но, если два типа проявлений возникли одновременно, то нужно увеличить интервалы между инъекциями (примерно на один день). В тоже время, наличие местных проявлений, не распространяющихся дальше одного анатомического сегмента кожных покровов или частей тела, не является показанием к удлинению курса по специфической иммунизации.

Купить это лекарственное средство можно в государственных аптеках, после предварительного заказа. Цена определяется фирмой производителем.

Анатоксин стафилококковый

Стафилококковые заболевания являют собой обширную группу различных болезней, вызванных стафилококками. К их основным проявлениям следует относить гнойные кожные поражения и заболевания подкожной клетчатки, ангины, энтероколит, пневмонии. Проявлениями является и стафилококковый сепсис, отравление токсином  стафилококка. В некоторых случаях наблюдается поражение ЦНС.

Стафилококк относится к основным возбудителям пиодермии. Он является наиболее частым и опасным возбудителем внутрибольничной инфекции. Распространение этих возбудителей в медучреждениях провоцирует гнойно-септические осложнения в хирургических стационарах. При этом нередко результаты прекрасно выполненных операций сводится к нулю. Развитие стафилококковых эпидемий в роддомах может вызвать тяжелейшие послеродовые осложнения у пациенток и новорожденных. Нередкими являются и летальные исходы.

Стафилококки весьма устойчивы к воздействию многих антибактериальных средств. Этим обусловлен кратковременный эффект антибиотикотерапии. Как правило, наблюдается возвращение симптомов заболевания. При этом со слизистых и участков поражения происходит распространение патогенных стафилококков, относящихся уже к резистентным к данному антибиотику штаммам.

Данная инфекция является проблемой сниженного иммунитета.

Одним из основных способов лечения инфекции, используемых в сочетании с антибиотикотерапией или заменяющих ее, является анатоксин стафилококковый. Его выделяют в процессе культивирования одного из самых патогенных штаммов. Анатоксин стафилококковый полностью обезврежен, очищен от балластных веществ. В нем сохранены иммуногенные свойства.

При лечении стафилококковых инфекций наиболее эффективным считается адсорбированный и очищенный анатоксин стафилококковый. Данная иммунотерапия  совершенно безвредна. Анатоксин стафилококковый, в отличие от медикаментов, используемых при антибиотикотерапии, не имеет негативных побочных проявлений.

Стафилококковый анатоксин. Инструкция

Препарат выпускается в виде раствора для подкожных инъекций. Препарат вводится под лопаточный угол, с чередованием сторон при последующем введении. Подкожное введение в плечо не допускается. Полный терапевтический курс включает семь инъекций. Их необходимо производить через два дня с применением следующих нарастающих доз: 0,1; 0,3; 0,5; 0,7; 0,9; 1,2; 1,5 миллилитров. Побочными проявлениями могут быть аллергические реакции.

Иммунизация организма способствует формированию активного антитоксического и противоинфекционного иммунитета. Использование препарата в значительной степени помогает организму справляться с инфекцией. Кроме того, иммунитет, сформированный при помощи иммунотерапии, предотвращает повторное внедрение инфекции. Как показывает практика, выздоровление наблюдается у 90% пациентов после иммунизации. Применение анатоксина у беременных значительно снижает риск инфицирования как новорожденного, так и матери. Необходимо отметить, что заболеваемость, при применении анатоксина, снижается не только в течение периода пребывания в роддоме, но и на протяжении полугода после выписки.

Стафилококковые инфекции поражают не только человека, но и животных. В частности, у собак различают «секундарную» форму заболевания, которая осложняет развившиеся дерматиты, и генерализованное заболевание. В последнем случае, инфекция вовлекает в патологический процесс не только кожный покров, но и другие органы.

В качестве активной иммунотерапии для собак используют анатоксин стафилококковый поливалентный, направленный на активизацию реакций иммунной защиты.

Ответы на экзаменационные иммунобиологические препараты

Вакцина живая туберкулёзная БЦЖ — лиофильно высушенная культура апатогенного штамма микобактерий туберкулеза. Применяется для активной специфической профилактики туберкулеза. Вакцина живая сибиреязвенная (СТИ) – взвесь высушенная живых спор B.anthracis авирулентного штамма. Для профилактики. Вакцина живая чумная – высушенная живая культура Y.pestis. Вводят внутрикожно или подкожно по эпидемическим показаниям. Для профилактики чумы. Вакцина живая бруцеллёзная — готовят из вакцинного штамма бруцелл. Прививки проводят по эпидпоказаниям здоровым людям с отрицательной сероло­гической и аллергической реакцией на бруцеллез. Для профилактики. Вакцина живая туляремийная — для профилактики, модифицированная живая культура вакцинного штамма бактерий туляремии. Вводят накожно или внутри­кожно раз в пять лет с учетом эпидемических показаний и результата реакции с тулярином. Вакцина живая против Ку-лихорадки — лиофилизированная взвесь аттенуированного штамма коксиелл, выращенных на куриных эмбрионах. Предназначена для создания активного иммуни­тета. Для профилактики. Вакцина живая полиомиелитная — пероральная, ослабленные штаммы вируса полиомие­лита трех иммунологических типов I, II, III, полученные из культур почечных клеток мартышек. Для профилактики. Стойкий общий, местный иммунитет. Вакцина живая оспенная — сухая, представляет высу­шенный со стабилизатором живой вирус осповакцины. Создает прочный иммунитет. Вакцина живая коревая — получают на клеточ­ных культурах почек морских свинок. Для активной специфической профилактики, подкожное введение детям 1-ого года жизни. Вакцина живая паротитная — для специфической профилактики детям старше 1 года. Для профилактики. Вакцина живая против желтой лихорадки — вируссодержащая суспензия ткани куриных эмбрионов, инфицированных аттенуированным штаммов вируса. Создает напряженный иммунитет. Вакцина живая против краснухи – на основе аттенуированных штаммов вируса Wistar. Используют ассоциированные вакцины (паротитно-коревая-краснушная), моновакцины. Вакцина живая гриппозная — содержит атте­нуированные вакцинные штаммы вируса гриппа. Применяют в сочетании с антибиотиком — ремантадином. Вакцина убитая брюшнотифозная спиртовая – сухая, обогащенная Vi-антигеном—содержит возбудите­лей брюшного тифа, обезвреженных спиртом и высушенных. Для профилактики. Вакцина убитая холерная – комплексная, холероген-анатоксин и химический О-антиген обоих био-и сероваров Огава и Инаба. Вводят подкожно. Для профилактики. Вакцина убитая лептоспирозная — взвесь инактивированных нагреванием лептоспир трех серологических типов. При­меняют по эпидемическим для профилактики. Вакцина убитая гриппозная — готовят из штам­мов, выращенных на куриных эмбрионах.. Вво­дят интраназально. Для профилактики. Вакцина убитая антирабическая сухая — аттенуированный вакцинный вирус бешенства, выращенный на культуре клеток почек хомяка. Вводят в подкожную клетчатку живота. Вакцина убитая против клещевого энцефалита — культуральный специфический антиген вируса клещевого энцефалита, инактивированного формалином. Применяют в эпидемических очагах для профилактики. Вакцина убитая против ветряной оспы — щадящий метод вакцинации — подкожное введение инактивированной (убитой) вакцины с последую­щей прививкой живой оспенной вакциной. Химическая вакцина менингококковая – для активной иммунизации, из очищенных капсульных полисахаридов серогрупп А и С. Гриппозная полимерсубъединичная вакцина (Гриппол) – раствор поверхностных антигенов гемагглютинина и нейраминидазы, выделенных их очищенных вирусов гриппа А и В. Активная профилактика. Формирует специфический иммунитет.

Анатоксин АД – дифтерийно адсорбированный очищенный анатоксин; дифтерийный экзотоксин очищенный. Для активной иммунизации против дифтерии. Анатоксин АС- столбнячный анатоксин очищенный, применяют для активной иммунизации, для экстренной профилактики. Анатоксин АДС— ассоциированный препарат очи­щенных концентрированных дифтерийного и столбнячного анатоксинов, адсорбированных на гидрате окиси алюминия. Для профилактики. АКДС — адсорбированная коклюшно – дифтерийно – столбнячная вакцина. Содержит взвесь коклюшный бактерий, убитых формалином, и очищенные концентрированные дифтерийный и столбнячный анатоксины. Применяется для вакцинации детей. Тетраанатоксин – смесь очищенных от белков анатоксина, адсорбированного на геле гидроксида алюминия. Для профилактики ботулизма и столбняка. Специф. иммунитет. Секстаанатоксин – сорбированные на гидроокиси алюминия столбнячный, ботулинические типов А, В,Е и гангренозные перфрингенс и нови – анатоксины. Для профилактики. Анатоксин стафилококковый – очищенный, адсорбированный, экзотоксин стандартного токсигенного штамма стафилокок­ка, обезвреженный формалином. Для активной иммунизации для профилактики. Энджерикс В – генно-инженерная вакцина рекомбинантная, содержащая HBs-антиген против гепатита В. Сухая живая комбинированная сыпнотифозная вакцина Е (ЖКСВ-Е). Смесь живой культуры риккетсий Провацека (вакцинный штамм Е), выращенный в курином эмбрионе, с растворимым антигеном вирулентного штамма риккетсий Провацека. Для активной иммунизации против сыпного тифа. Гоновакцина убитая – поливалентный препа­рат из нескольких штаммов гонококков. Применяют для ле­чения хронической гонореи и для определения степени излеченности. Стафиловакцина – взвесь золотистых стафилококков, инактивированных нагреванием. Применяется для лечения. Герпетическая убитая вакцина – для специфической профилактики рецидивирующего герпеса в период ремиссии. Инактивированная, культуральная. Бактериофаг брюшнотифозный — смесь бактериофагов, активных в отношении возбу­дителей брюшного тифа различных фаготипов. Препарат применяют для экстернной профилактики. Бактериофаг сальмонеллезный – фильтрат фаголизатов сальмонеллезных бактерий (паратиф, холера). Для профилактики. Бактериофаг дизентерийный – содержит разные фаги, лизирующие шигеллы Флекснера и Зонне. Профилактика. Бактериофаг стафилококковый – фильтрат фаголизата стафилококков. Для лечения. Бактериофаг стрептококковый — фильтрат фаголизата стрептококка. Для лечения. Бактериофаг синегнойный – для лечения гнойных инфекций кожи, абсцессов, ожогов, осложненных синегнойной инфекцией. Бактериофаг клебсиеллезный – фильтрат фаголизатов клебсиелл, пневмонии. Для лечения гнойно-воспалительных и энтеральных заболеваний, вызванных клебсиеллами. Бактериофаг коли — протейный – содержит фаги, лизирующие энтеропатогенные эшерихии и протеи. Применяется для лечения. Пиобактериофаг –смесь фаголизатов стафилококкового, стрептококкового, коли, протейного бактериофагов. Для лечения хирург. инфекций, заболеваний ЖКТ. Бактериофаг интести – фильтраты фаголизатов шигеллезных, сальмонеллезных, энтеропатогенных штаммов кишечной палочки, протея, стафилококковых бактерий, синегнойной палочки. Для лечения дизентерии, сальмонеллеза, колита. Лактобактерин – микробная масса живых лактобацилл, лиофилизированных в среде культивирования. Для лечения хронических колитов, при применении антибиотиков. Бифидумбактерин – лиофильно высушенная взвесь живых, активных штаммов бифидобактерий. Для лечения кишечных дисфункций. Колибактерин — лиофилизированная культура кишечной палочки. Бификол – лиофильно высушенная микробная масса живых активных штаммов бифидобактерий и кишечной палочки. Для лечения хронических колитов.

Противогангренозная поливалентная антитоксическая сыворотка — получают путем иммунизации лоша­дей анатоксинами: Cl.perfringens, Cl.septicum. Применяют: с лечебной целью—при газовой ин­фекции, для профилактики при тяжелых травмах. Противоботулиническая А, В, Е антитоксическая сыворотка — белковая фракция сыворотки крови гипериммунизированных ботулиническими анатоксинами или токсинами (А,В,Е), содержащая специфические иммуноглобулины. Для лечения, экстренной профилактики. Противостолбнячная антитоксическая сыворотка — белковая фракция сыворотки крови гипериммунизированных столбнячным анатоксином лошадей, содержащая специфические иммуноглобулины, очищенная. Для лечения и экстренной профилактики. Противодифтерийная антитоксическая сыворотка – белковая фракция сыворотки крови гипериммунизированных дифтерийным анатоксином лошадей, содержащая специфические иммуноглобулины, очищенная. Для лечения больных дифтерией. Противостолбнячный антитоксический иммуноглобулин – получен из гамма-глобулиновой фракции крови людей, ревакцинированных очищенным столбнячным анатоксином. Для пассивной экстренной профилактики, для лечения. Противоботулинический антитоксический иммуноглобулин — белковая фракция, содержащая антитела к ботулиническому экзотоксину, выделенная из сыворотки крови доноров. Для лечения. Иммуноглобулин нормальный гомологический антимикробный – активная белковая фракция, выделенная из человеческой сыворотки или плазмы. Для профилактики гепатита А, кори, гриппа, коклюша, менингококковой инфекции, полиомиелита. Иммуноглобулин противостафилококковый гомологический – белковая фракция, содержащая антитела к стафилококковому экзотоксину, выделенная из сыворотки крови доноров. Для лечения заболеваний стафилококковой этиологии. Иммуноглобулин против клещевого энцефалита – иммунологически активная фракция белка, выделенная из донорской плазмы, содержит специфические антитела к вирусу клещевого энцефалита. Для экстренной профилактики и лечения энцефалита. Иммуноглобулин противогангренозный – белковая фракция, содержащая антитела к гангренозному токсину, выделенная из сыворотки крови доноров. Для лечения. Иммуноглобулин противолептоспирозный – для лечения и профилактики. Иммуноглобулин противосибиреязвенный – гамма-глобулиновая фракция сыворотки крови лошади, гипериммунизированной живой сибиреязвенной вакциной. Для лечения и профилактики. Иммуноглобулин антирабический – получен при гипериммунизации лошадей вирусом бешенства. Препарат обезвреживает вирус бешенства и предупреждает поствакцинальные энцефалиты. Иммуноглобулин противочумный – белковая фракция, содержащая антитела к токсину чумы, выделенная из сыворотки крови доноров. Для лечения. Иммунная плазма – получена от лиц, иммунизированных чужеродным антигеном, в крови которых циркулируют антитела, выработанные к этому антигену. Используется с профилактической и лечебной целью. Из нее готовят иммуноглобулины. Циклоспорин – иммунодепрессант, препарат, понижающий функции иммунной системы. Лейкоцитарный интерферон — продуцируется мононуклеарными фагоцитами, оказывают противовирусное и противоопухолевое действие. , ,  интерфероны регулируют специфический иммунный ответ и неспецифическую резистентность. Тиламин и Т-активин повышают активность и улучшаю пролиферацию Т-клеток иммунной системы. Эритроцитарный диагностикум содержит взвесь эритроцитов, с укрепленными на них антигенами различных бактерий. Бактериальные диагностикумы содержат взвесь убитых микробов или отдельные антигены. Вирусные диагностикумы содержат убитые вирусы. Типовой стафилококковый бактериофаг – фаг против стафилококков, применяемый при лечении и профилактике. Является фильтратом фаголиза патогенных стафилококков. Брюшнотифозный типовой бактериофаг – фаг (вирус S. tiphy) сальмонелл, применяемый при диагностике. Туберкулин – препарат, применяемый для постановки реакции Манту, выявляется положительный результат у лиц, зараженных M. tuberculosis. Представляет собой антиген микобактерий туберкулеза. Используется для постановки аллергической пробы. Бруцеллин – препарат, представляющий собой антиген бруцелл, применяемый при диагностике, используется для постановки аллергической пробы. Тулярин – антиген F. tularensis, применяется для диагностики при постановке кожной аллергической пробы при диагностике бруцеллёза. Моноклональные антитела – антитела, полученные от 1 плазматической клетки или гибридомы. Эритроцитарные диагностикумы – взвесь эритроцитов с укрупненными на них антителами к различным микробам. Диагностические иммунные сыворотки – взвесь антител к различным микробам с укреплёнными на них молекулами флюоресцирующих веществ (люминесцирующие сыворотки). Комплемент – представляет собой сыворотку морской свинки, в которой наиболее выражена комплиментарная функция. применяется в постановке РСК или реакции бактериолиза.

Вакцина против токсинов, устойчивых к антибиотикам, Staphylococcus aureus (20110070, д-р Патрик Шливерт), доступная в компании Technology Commercialization

Вакцина против токсинов Staphylococcus aureus

Вакцина, нацеленная на устойчивый к антибиотикам Staphylococcus aureus, предотвращает инфекцию, воздействуя на несколько секретируемых бактериальных токсинов. S. aureus продуцирует семейство экзотоксинов (суперантигены и цитолизины), которые гиперактивируют иммунную систему и способствуют способности организма вызывать инфекции и смерть.Эти кандидаты в токсоидные вакцины обеспечивают 100% иммунитет в отдельных кроличьих моделях эндокардита и пневмонии, которые являются весьма релевантными заменителями состояния человека. Эти вакцины не производятся в яйцах, что снижает производственные затраты, снижает риск побочных реакций и увеличивает количество пациентов, соответствующих критериям отбора.

Устойчивый к антибиотикам золотистый стафилококк создает проблемы при лечении

Staphylococcus aureus — это высоковирулентный бактериальный патоген и наиболее значимая причина инфицирования человека.Инфекции, вызванные S. aureus, могут передаваться как в больнице, так и в обществе. Возможности лечения S. aureus ограничены из-за появления устойчивых к антибиотикам штаммов, таких как устойчивый к метициллину Staphylococcus aureus (MRSA). Таким образом, усилия переместились в сторону разработки вакцины. Однако вирулентность S. aureus и способность быстро приобретать и подавлять избыточные вирулентные детерминанты создают проблемы для текущих испытаний вакцин, нацеленных на поверхностные белки S. aureus.

Вакцина против S. aureus действует как адъювант

Недавнее открытие показало, что суперантигены имеют дополнительный рецептор клетки-хозяина, который опосредует продукцию антител.Исследования, оценивающие продукцию антител в ответ на вакцины-кандидаты суперантигена и цитолизинового анатоксина, показывают синергетический эффект при введении в комбинации. Таким образом, эта вакцина действует как адъювант, предлагая преимущества в качестве дополнения к существующим вакцинам.

ПРЕИМУЩЕСТВА ВАКЦИНЫ ДЛЯ АНТИБИОТИКОВ, УСТОЙЧИВОГО STAPHYLOCOCCUS AUREUS:

• Поливалентная вакцина нацелена на устойчивые к антибиотикам штаммы S. aureus
• Обеспечивает защиту от наиболее распространенных штаммов S.золотистый
• Адъювантную вакцину можно комбинировать с существующими вакцинами.
• Не производится в яйцах, что снижает производственные затраты, снижает риск побочных реакций и увеличивает количество подходящих пациентов
• Нацелен на токсины, выделяемые S. aureus
• Механизм действия нацелен на поверхностные белки
• Повышенная эффективность по сравнению с конкурентами
• 100% иммунитет у животных модели

Подробная информация о продукте В основе технологии лежит разработка вакцины против Staphylococcus aureus, которая нацелена на токсины, выделяемые бактериями.

Сведения о выполнении Лицензиат получит права на использование интеллектуальной собственности (патентную заявку) в целях разработки и производства коммерческого продукта.

Фаза развития Модели in vivo / животных.

Исследователи

Патрик Шливерт, доктор философии

Профессор микробиологии, Университет Айовы

Повышение безопасности поливалентных фагов Staphylococcus aureus путем их производства на штамме Staphylococcus xylosus

Abstract

Team1 (vB_SauM_Team1) — поливалентный стафилококковый фаг, принадлежащий к семейству Myoviridae .Phage Team1 размножали на штамме Staphylococcus aureus и непатогенном штамме Staphylococcus xylosus , используемом в промышленной ферментации мяса. Два препарата Team1 сравнивали по их микробиологическим и геномным свойствам. Размеры вспышек, латентные периоды и диапазоны хозяев двух производных были идентичны, как и их последовательности генома. Phage Team1 содержит 140 903 п.н. двухцепочечной ДНК, кодирующей 217 открытых рамок считывания и 4 тРНК. Сравнительный геномный анализ выявил сходство со стафилококковыми фагами ISP (97%) и G1 (97%).Диапазон хозяев Team1 сравнивали с хорошо известными поливалентными стафилококковыми фагами phi812 и K с использованием панели из 57 штаммов S. aureus , собранных из различных источников. Было обнаружено, что эти бактериальные штаммы представляют 18 типов последовательностей (MLST) и 14 клональных комплексов (eBURST). В целом три фага, размноженные на S. xylosus , лизировали 52 из 57 отдельных штаммов S. aureus . Идентификация нечувствительных к фагам штаммов подчеркивает важность разработки коктейлей фагов с широко варьирующими и перекрывающимися диапазонами хозяев.В целом, наше исследование предполагает, что некоторые стафилококковые фаги могут размножаться на пищевых бактериях в целях биоконтроля и безопасности.

Образец цитирования: Эль Хаддад Л., Бен Абдаллах Н., Планте П.-Л., Думареск Дж., Кацарава Р., Лабри С. и др. (2014) Повышение безопасности поливалентных фагов Staphylococcus aureus путем их производства на штамме Staphylococcus xylosus . PLoS ONE 9 (7): e102600. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0102600

Редактор: Марк Дж. ван Раай, Национальный центр биотехнологии — CSIC, Испания

Поступила: 11 апреля 2014 г .; Одобрена: 19 июня 2014 г .; Опубликовано: 25 июля 2014 г.

Авторские права: © 2014 El Haddad et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Авторы подтверждают, что все данные, лежащие в основе выводов, полностью доступны без ограничений. Все соответствующие данные находятся в документе и его файлах с вспомогательной информацией.

Финансирование: Эта работа финансировалась FQRNT, MAPAQ, Agriculture et Agroalimentaire Canada и Novalait. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Staphylococcus aureus — одна из основных причин инфекций, связанных с больницей [1], и заражения через пищевые продукты [2]. Несмотря на обнаружение на коже и слизистых оболочках здоровых носителей, S. aureus вызывает широкий спектр заболеваний, включая легкие и тяжелые кожные инфекции, сепсис, эндокардит и другие опасные для жизни инфекции. Метициллин-резистентные S. aureus (MRSA) часто обнаруживаются в больницах или в общественных местах, и их появление становится глобальной проблемой [3].Кроме того, около штаммов S. aureus вызывают пищевое отравление, которое возникает в результате приема внутрь стафилококковых энтеротоксинов, выделяемых во время роста в продуктах питания [2]. Для борьбы с пагубными последствиями роста стафилококков в качестве альтернативной стратегии исследуются фаги.

Однако некоторые стафилококковые фаги кодируют гены вирулентности, такие как лейкоцидин Пантона-Валентайна, эксфолиативный токсин и гены энтеротоксина [4] — [8]. Фактически, многие фаги умеренного климата являются источником лизогенной конверсии, поскольку они могут интегрироваться в бактериальный геном при инфицировании посредством экспрессии генов, связанных с лизогенией.Когда фаги существуют в состоянии профага, феномен индукции может реактивировать и вырезать их геном из бактериальной хромосомы, чтобы инициировать литический цикл. Умеренные фаги могут в конечном итоге играть роль в горизонтальном переносе факторов вирулентности от донора-хозяина к реципиентной клетке [9]. Следовательно, в приложении биоконтроля более целесообразно использовать только вирулентные фаги, чтобы гарантировать отсутствие генов, кодирующих нежелательные признаки.

Чтобы избежать передачи генов вирулентности, использование непатогенного бактериального штамма или «суррогата» для размножения этих фагов является предпочтительным, если это не вызывает изменений в характеристиках фага.Например, фаги против Listeria monocytogenes размножаются на штаммах непатогенного Listeria innocua [10] — [12]. Другие показали, что размножение поливалентного фага Salmonella phi PVP-SE1 на непатогенном штамме Escherichia coli не изменило микробиологические свойства и профиль рестрикции ДНК этого фага. Доступность таких непатогенных хозяев, продуцирующих фаг, будет способствовать процессу очистки, ведущему к более безопасному продукту фага [13].

Недавно было проведено дополнительное исследование использования вирулентных стафилококковых фагов в качестве средств биоконтроля, что было вызвано растущим появлением штаммов, устойчивых к антибиотикам. Некоторые поливалентные стафилококковые фаги были выделены и охарактеризованы в последнее десятилетие [14] — [19]. Особый интерес представляют стафилококковые фаги, принадлежащие к семейству Myoviridae (геном дцДНК, икосаэдрический капсид и сократительный хвост), известные своим широким кругом хозяев [20] — [23] и их способностью инфицировать коагулаза-положительные и отрицательные стафилококки (CoPS и CoNS) животного и человеческого происхождения [22], [24].

В этом исследовании новый поливалентный фаг под названием Team1 (vB_SauM_Team1), принадлежащий к семейству Myoviridae , был охарактеризован после размножения на штамме CoPS S. aureus и на непатогенном штамме CoNS Staphylococcus xylosus . S. xylosus — это коагулазонегативный вид стафилококков, который долгое время использовался в качестве закваски в греческих, испанских, итальянских и других традиционных процессах ферментации колбас [25]. S. xylosus способствует сохранению аромата и стабильности цвета конечного продукта, сводя к минимуму прогорклость и, в некоторых случаях, обеспечивая биозащитный эффект от микробного заражения [26], [27].Мы также сравнили микробиологические и геномные свойства фага Team1 со свойствами двух хорошо известных поливалентных стафилококковых фагов K и 812. Параллельно мы генотипировали широкий спектр штаммов S. aureus , выделенных из разных источников, и подтвердили поливалентную природу фагов. три фага.

Материалы и методы

Штаммы бактерий и среды

Штамм CoPS S. aureus SA812 и штамм CoNS S. xylosus SMQ-121 использовали для размножения фагов (таблица 1). S. xylosus SMQ-121 — коммерчески доступная мясная закваска. Штаммы были получены из Справочного центра бактериальных вирусов Феликса д’Эрелля (www.phage.ulaval / ca /). Мы установили диапазоны хозяев фагов с использованием 56 дополнительных штаммов S. aureus , выделенных из различных источников. Триптический соевый бульон (TSB) использовали для культивирования всех стафилококковых клеток.

Идентификация штаммов бактерий и генотипирование

Виды стафилококков всех штаммов были сначала подтверждены с помощью анализа 16S и набора API Staph (BioMérieux ™).Мы амплифицировали ген рибосомной РНК 16S путем извлечения бактериальной геномной ДНК [28] и проведения полимеразной цепной реакции с использованием универсальных праймеров 27, прямого и 1492, обратного, проводимой с помощью машины PTC-200 (MJ Research, термоциклер Пельтье) следующим образом: 1 выдержка при 94 ° C в течение 3 минут, затем 35 циклов при 94 ° C в течение 1 минуты, 58 ° C в течение 1 минуты и 73 ° C в течение 1 минуты 45 секунд. Заключительный этап удлинения при 73 ° C в течение 5 мин выполняли после последнего цикла. Продукты ПЦР секвенировали на геномной платформе Госпитального центра Лаваль с использованием аппарата ABI Prism 3100 (Applied Biosystems, Foster City, CA).Последовательности ДНК сравнивали с последовательностями, доступными в базе данных GenBank из Национального центра биотехнологической информации (NCBI), с использованием анализа BLAST (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/), а также проекта базы данных рибосом [ 29]. Кроме того, мы генотипировали все штаммы S. aureus с помощью метода MLST [28]. Этот метод нацелен на секвенирование семи генов домашнего хозяйства размером ~ 450 п.н. Реакции ПЦР включали: 5-минутную денатурацию при 95 ° C, затем 30 циклов отжига при 55 ° C в течение 1 минуты, удлинение при 72 ° C в течение 1 минуты и денатурацию при 95 ° C в течение 1 минуты с последующими заключительный этап удлинения при 72 ° C в течение 5 мин и секвенирование продуктов ПЦР.Каждой полученной последовательности гена был присвоен соответствующий номер аллеля. Комбинация 7 аллелей определяла аллельный профиль, который соответствовал его типу последовательности (ST). Это было выявлено с помощью веб-сайта базы данных MLST [28]. Более того, различные полученные ST были сгруппированы в клональные комплексы (CC) с использованием алгоритма eBURST. Этот алгоритм запрограммирован на сборку ST, которые имеют 6 или 7 общих аллелей под одним и тем же CC [30].

Фаговые препараты

Phage Team1 был выделен как вирулентный фаг в Республике Грузия после госпитальной стафилококковой инфекции [31], [32].Phage Team1 размножали в течение четырех пассажей в среде TSB при 37 ° C на штамме-хозяине S. aureus SA812 (т.е. Team1-SA812), а также на S. xylosus SMQ-121 (т.е. Team1-SMQ121). . Два хорошо известных поливалентных фага стафилококков, phi812 [23] и K [22], также были размножены на обоих этих штаммах. Препараты фага были названы 812-SA812, 812-SMQ121, K-SA812 и K-SMQ121 для фагов phi812 и K соответственно. Для размножения фагов бактерии выращивали при 37 ° C до оптической плотности при 600 нм, равной 0.1, а затем в среду добавляли примерно 10 ⁵ фагов. Инкубацию продолжали при 37 ° C до полного лизиса бактерий, и полученный лизат фильтровали с использованием шприцевого фильтра 0,45 мкм.

Электронная микроскопия

Образец лизата фага объемом 1,5 мл (титр не менее 10 ⁹ БОЕ / мл) центрифугировали при 23,500 × g в течение 1 ч при 4 ° C. Супернатант удаляли, оставляя в пробирке примерно 100 мкл. Осадок фага дважды промывали 1,5 мл ацетата аммония (0.1 M, pH 7,5). Остаточный объем (100 мкл) использовали для приготовления сетки наблюдения следующим образом: 10 мкл окрашивающего раствора (2% фосфорновольфрамовая кислота, pH 7,0) наносили на сетку с углеродным покрытием Formvar (200 меш; Pelco International). Через 30 с 10 мкл промытого лизата смешивали с пятном путем пипетки вверх и вниз. Через 90 с остатки жидкости удаляли с сетки, касаясь края промокательной бумагой. Фаги наблюдали при 80 кВ с помощью просвечивающего электронного микроскопа JEOL 1230, доступного в Institut de Biologie Intégrative et des Systèmes (IBIS) Университета Лаваля.

Микробиологические анализы

Одноступенчатый анализ кривой роста Team1-SA812 и Team1-SMQ121 проводили в трех повторностях, как описано ранее [33], с множественностью заражения (MOI) 0,05 и при температуре 37 ° C. Размер всплеска рассчитывали путем деления среднего титра фага после экспоненциальной фазы на средний титр до того, как инфицированные клетки начали выделять вирионы [33]. Подсчет фагов Team1, phi812 и K, размноженных на обоих видах, выраженный в виде значений EOP, был получен с использованием метода двухслойного титрования бляшек.Вкратце, 5 мкл препарата фага (неразбавленного лизата и серийно разведенного (от 10 ^-1 до 10 ^-8 )) были нанесены пятнами на мягкий агар TSB, содержащий от 100 до 200 мкл стафилококковой культуры, ранее выращенной в течение ночи. Для каждого фага и штамма были сделаны два биологических и два технических повтора. Значения EOP рассчитывали путем деления титра фага на тестируемом штамме на титр фага на его штамме-хозяине. Всего 58 штаммов (57 S. aureus и 1 S.xylosus ) были протестированы против трех фагов и их производных.

Подготовка и секвенирование ДНК фага

Геномные ДНК

Phage Team1-SA812, Team1-SMQ121, 812-SA812, 812-SMQ121, K-SA812 и K-SMQ121 были выделены с использованием набора Lambda Maxi (Qiagen) с модификациями, описанными в другом месте [34]. Профиль рестрикции EcoRV (Roche Diagnostics) шести фагов сравнивали для подтверждения различий между фагами Team1, phi812 и K, а также идентичности с их соответствующими производными, амплифицированными на другом штамме.Фрагменты ДНК разделяли в 0,8% агарозном геле, окрашивали EZVision (Amresco) и фотографировали при УФ-освещении. Секвенирование выполняли с использованием технологии пиросеквенирования на приборе 454 FLX, доступном в Plateforme d’analyses génomiques IBIS. Чтения были собраны в один контиг с 32-кратным покрытием для Team1-SMQ121 и 86-кратным покрытием для Team1-SA812. Для фагов phi812-SA812 и phi812-SMQ121 чтения были собраны в один контиг с 32-кратным и 71-кратным покрытием соответственно.Наконец, для фагов K-SA812 и K-SMQ121 покрытие было 72-кратным и 62-кратным, соответственно.

Биоинформатический анализ

Геномы анализировали с помощью Staden [35] и BioEdit 7.0.9.0 [36]. Открытые рамки считывания (ORF) были идентифицированы с помощью инструмента ORFinder [37] и GeneMarkS [38]. Каждая ORF начинается с начального кодона (AUG, UUG или GUG), и большинству из них предшествует последовательность Шайна-Дальгарно, специфичная для стафилококков и оптимально размещенная примерно на 10 нуклеотидов перед стартовым кодоном [39].Предполагаемая функция каждого белка была выведена путем поиска гомологии с использованием blast2GO [40]. Теоретическая изоэлектрическая точка (pI) и молекулярная масса (MM) каждого выведенного фагового белка были получены с использованием Compute pI / Mw, доступного на веб-странице ExPASy (http://ca.expasy.org/tools/pi_tool.html). Наконец, тРНК были идентифицированы с помощью сервера tRNAscan-SE [41] и программы ARAGORN [42]. Геном фага Team1 сравнивали с базой данных NCBI с помощью BLAST. Были отобраны два фага, обладающие наибольшим нуклеотидным сходством с фагом Team1.Геномы этих трех фагов сравнивали на уровне ДНК, и результаты были представлены в циклическом выравнивании с использованием программного обеспечения Circos [24]. Использование кодонов определялось с помощью инструмента использования кодонов, доступного через веб-сервер DNA 2.0 (DNA 2.0, Menlo Park, CA), и программы Countcodon, доступной на веб-странице Kazusa DNA Research Institute (http://www.kazusa.or.jp). / кодон /). Процент использования синонимичных кодонов был рассчитан для каждой аминокислоты. Использование бактериального кодона S. aureus Jh2 было получено из базы данных Исследовательского института ДНК Казуса для целей сравнения.

Регистрационный номер нуклеотидной последовательности

Последовательность генома S . xylosus Фаг Team1-SMQ121 был депонирован в GenBank под регистрационным номером KC012913.

Результаты и обсуждение

Сравнение кривых роста фагов Team1-SA812 и Team1-SMQ121

Team1 имеет икосаэдрический капсид диаметром 90,4 ± 4,1 нм и длинную сократительную оболочку 227,2 ± 7,6 нм в длину и 21,6 ± 1,5 нм в ширину, морфология напоминающая другой стафилококк Myoviridae [21], [23] (рис. .1). Перед размножением Team1 на S. xylosus видовая принадлежность была подтверждена с помощью анализа 16S рРНК и определения набора API-Staph. Штамм SMQ-121 имел 99% идентичности со штаммами S. xylosus по результатам анализа 16S рРНК и 96,7% идентичности с использованием набора API-Staph, что подтверждает принадлежность этого штамма к виду S. xylosus .

Влияние размножающегося фага Team1 на виды S. aureus и S. xylosus определяли путем сравнения их соответствующих кривых роста (рис.2). Размер пика Team1 был одинаковым для обоих хозяев: 31 ± 7 БОЕ на инфицированную клетку S. aureus SA812 и 37,5 ± 3 БОЕ на инфицированную клетку S. xylosus SMQ-121 примерно через 35 минут. Латентные периоды (определяемые как временной интервал между поглощением и началом первого всплеска) также были идентичны примерно через 20 минут при выращивании при 37 ° C. Эти значения аналогичны другим стафилококковым фагам Myoviridae (20, 21, 23). Миофаг phi812, который имеет более длинную латентную фазу и меньший размер вспышки [23], и недавно выделенные фаги SAH-1 и Stau2, которые имеют аналогичные латентные периоды, но большие размеры вспышек, составляющие 100 БОЕ на инфицированную клетку [20], [21].

Рис. 2. Кривые одношагового роста для Team1-SA812 (▴) и Team1-SMQ121 (×).

Планки погрешностей указывают стандартное отклонение для трех испытаний. Первый подсчет фага (нулевой момент времени) произошел примерно через 10 мин после добавления фага к клеткам [33].

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0102600.g002

Анализ генома

Phages ДНК Team1-SA812 и Team1-SMQ121 были извлечены, секвенированы и сравнены. Полный геном Team1 представляет собой линейную двухцепочечную ДНК размером 140 903 п.н.Кроме того, геном Team1 имеет содержание GC 30,3%, что ниже оценочного содержания GC S. aureus и S. xylosus , которые имеют содержание GC 32,8% и 34,2% соответственно [25] , [43], [44]. Однако это содержание GC сходно с другими фагами стафилококков Myoviridae [45]. Концы генома фага Team1 содержат 8053 п.н. длинных прямых концевых повторов (LTR), отделенных от неизбыточной части ДНК вириона 12-п.н. инвертированными последовательностями повторов 5′-TAAGTACCTGGG-3 ‘и 5′-CCCAGGTACTTA-3’ , которые характерны для Twort-подобных вирусов [45].Гомологичная рекомбинация между LTR делает возможной циркуляризацию инфицированной фаговой ДНК. Phage Team1 кодирует 217 предсказанных ORF, 44 из которых имеют предполагаемую функцию (20%) (Таблица S1). Как и большинство фагов, геном Team1 можно разделить на несколько модулей, включая два модуля репликации ДНК и два модуля лизиса, разделенных модулями упаковки ДНК и морфогенеза. Эта модульная организация характерна для фагов, принадлежащих к семейству Myoviridae [8]. Геном Team1 также кодирует четыре тРНК.ТРНК ^Met (ATG) расположена между ORF33 и ORF34, тогда как три других (тРНК ^Trp — TGG, тРНК ^Phe — TTC и тРНК ^Asp — GAC) расположены между ORF76 и ORF77 в непосредственной близости от модуль лизиса. В геноме фага Team1 не было обнаружено никаких известных факторов вирулентности, свидетельствующих о его безопасности. Более того, в его геноме не было обнаружено лизогенного модуля или известных генов, связанных с интегразой, что подтверждает его строго вирулентную природу. Наконец, сравнительный анализ профилей рестрикции (EcoRV) и последовательностей генома показал 100% идентичность между фагами Team1-SA812 и Team1-SMQ121, показывая, что размножение этого фага на двух разных видах стафилококков не привело к геномным изменениям.

Сравнительная геномика

Геном фага Team1 оказался на 97% идентичным опубликованным геномам стафилококковых фагов ISP [18], а также G1 [39]. Фактически, большинство стафилококковых миофагов, за исключением фага Twort, имеют общие идентичности на уровне ДНК между собой, в пределах от 88,3% до 99,9% [45]. При сравнении фага Team1 с геномами G1 и ISP, делеции 375 п.н. и 379 п.н. наблюдались в геноме Team1 в положениях 7 535 и 39 917 соответственно (рис. 3).Делеции были фланкированы последовательностями прямых повторов, что позволяет предположить, что делеции могли произойти в результате внутримолекулярной рекомбинации между прямыми повторами гомологичной ДНК. Вторая делеция соответствовала некодирующим областям. Однако делеция 375 п.н. привела к удалению гена, кодирующего предполагаемый концевой белок ДНК, что может объяснить более короткую последовательность LTR в геноме Team1 по сравнению с последовательностью фагов G1 и ISP [45]. Вставки 1348 п.н., 1375 п.н., 146 п.н. (по сравнению с фагом G1) и 260 п.н. (по сравнению с фагом ISP) также были идентифицированы в положениях 42 626 111 668 и 140 903 в геноме Team1 [24].С этими вставками были добавлены два гена: orf86 и orf155 . Первый является гипотетическим геном, тогда как orf155 кодирует предполагаемую эндонуклеазу, кодируемую интроном [46]. Последние вставки составляли повторяющиеся некодирующие последовательности.

Рисунок 3. Циркулярное сравнение геномов фагов Team1, G1 и ISP.

Phages Геномы Team1, G1 и ISP и содержание GC представлены, соответственно, с использованием фиолетового цвета (вверху справа), красного (в центре) и зеленого (вверху слева).Для каждого генома фага кодирующие области в минусовой (синий) и плюсовой (оранжевый) цепях показаны в соответствующих рамках. Желтые линии показывают дополнительные приобретенные последовательности между этими тремя геномами. Ширина линии зависит от длины полученных последовательностей [24].

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0102600.g003

Три фага обладают одинаковыми четырьмя тРНК, в том числе двумя соответствующими уникальными кодонами для метионина и триптофана. Мы также исследовали использование кодонов фага [47] и сравнили его с S.Использование кодона aureus получено из программы Countcodon. Использование кодонов у трех фагов очень похоже. В то время как четыре тРНК, кодируемые фагами, подобны тРНК хозяина, были отмечены значительные различия в использовании кодонов между этими миофагами и проанализированным штаммом S. aureus (Таблица 2), который, вероятно, способствует продукции специфического фагового белка [48].

Генотипирование

штаммов S. aureus

На следующем этапе мы определили диапазон хозяев фагов Team1-SA812 и Team1-SMQ121.Прежде чем сравнивать диапазоны хозяев этих фагов, мы собрали панель из 57 S. aureus из различных источников, таких как сырой сыр, мастит, клинические и больничные инфекции, а также внебольничные инфекции. Мы типизировали этих хозяев, чтобы оценить разнообразие этого набора штаммов бактерий. Типирование было выполнено с использованием метода MLST, каждому штамму присваивался номер ST, и их кластеризовали в CC с использованием алгоритма eBURST (Таблица 1).

Генотипы штаммов различались в зависимости от происхождения выделения. Штаммы S. aureus , выделенные из сырого сыра или от инфекций мастита, имеют некоторые общие черты в своих группах CC. S. aureus является наиболее частой причиной мастита крупного рогатого скота и часто обнаруживается в сыром молоке [49]. Мастит характеризуется воспалением молочных желез, вызывающим бактериальные инфекции, которые приводят к глобальным экономическим потерям для молочной промышленности. Изученные штамма S. aureus , выделенные из молока, можно разделить на шесть групп в соответствии с их номерами ST (352, 151, 351, 2270, 2187 и 126).Однако при применении алгоритма eBURST и сборке ST, имеющих как минимум 6 аллелей из 7, штаммы S. aureus , выделенные из молока, были разделены на три группы или три CC, то есть CC97, CC126 и CC151. Большинство этих штаммов принадлежит к CC97 (47,5%) и CC151 (47,5%). Другие исследования показали, что последние CC распространены по всему миру и составляют основные группы, вызывающие вспышки инфекции мастита, в основном в Северной и Южной Америке и Европе [50], [51]. Однако CC126 является наиболее преобладающим в Бразилии наряду с CC97 [52].В отличие от CC97, CC151 и CC126 подтверждены исключительно в изолятах крупного рогатого скота. Также предполагается, что штаммы крупного рогатого скота во всем мире произошли от CC97. Линия CC97 существует более 50 лет и возникла раньше, чем CC151 [50].

Другие штаммы, будь то MSSA (метициллин-чувствительный S. aureus ) или MRSA, имели разные ST и CC, демонстрируя генотипы, зависящие от источника. Штаммы MSSA, HER1101, HER1049, HER1225, A170 и штамм-хозяин SA812, принадлежат к CC707, CC25, CC9, CC45 и CC30 соответственно.Напротив, канадский MRSA (CMRSA), больничный и приобретенный в сообществе, имеет свою собственную отдельную кластеризацию и принадлежит к разным клональным комплексам, то есть CC1, CC5, CC8, CC22, CC36, CC45, CC239. Два клональных комплекса имеют некоторое сходство между изученными штаммами MSSA и MRSA. Штаммы CMRSA1 и A170 относятся к CC45. Кроме того, CC30 ( S. aureus SA812) и CC36 (CMRSA4, относящийся к EMRSA-16 и USA200) имеют только два локуса различий в их аллельном профиле. Кроме того, вирулентные штаммы MRSA, принадлежащие к CC1, CC5 и CC8, ответственны за несколько вспышек в Северной Америке [3], [53], а также переносятся на животных-хозяев [54].

Сравнение диапазонов хозяев фагов

После типирования 57 штаммов S. aureus были исследованы диапазоны хозяев фагов Team1-SA812 и Team1-SMQ121. Мы также протестировали диапазоны хозяев известных поливалентных стафилококковых фагов phi812 и K для сравнения с Team1. Эти два фага были также амплифицированы на S. aureus SA812 и S. xylosus SMQ-121 и секвенированы их геномы для подтверждения их идентичности. Мутации не было обнаружено при амплификации на обоих хозяевах, как это наблюдалось для Team1 (данные не показаны).

Результаты диапазонов хозяев фагов дикого типа Team1, phi812 и K, размноженных как на S. aureus SA812, так и на S. xylosus SMQ-121, представлены в таблице 3. Каждый из трех фагов размножался на S. aureus SA812 инфицировал 52 из 57 протестированных S. aureus . Фактически, 56 из 57 штаммов могли быть инфицированы хотя бы одним миофагом. Только штамм 1049 (ST25, CC25) оказался устойчивым ко всем трем миофагам. Следует отметить, что этот штамм чувствителен к фагам Podoviridae, P68 и 44AHJD (данные не представлены).Когда одни и те же фаги размножались на S. xylosus SMQ-121, фаги Team1 и phi812 инфицировали 53 штамма, а фаг K инфицировал 51 штамм. В целом, 55 из 57 штаммов могли быть инфицированы по крайней мере одним миофагом, размноженным на S. xylosus SMQ-121. Размножающийся хозяин повлиял только на чувствительность к фагу штамма SMQ1321 (ST126, CC126), что предполагает присутствие факторов хозяина, которые изменяют поведение фага в этом уникальном случае [48].

Хотя общие диапазоны хостов остались неизменными, уровень чувствительности, определяемый значениями EOP, варьировался только в нескольких случаях.Например, три фага имели уменьшенный EOP (<10 ^-4 ) при посеве на S. aureus SMQ1292 (ST352, CC97), SMQ1321 и SMQ1322 (ST2270, CC126). Точно так же фаг К, размноженный на S. xylosus , имел пониженные значения EOP (от 10 ^-3 до 10 ^-5 ) при посеве на штаммы SMQ1286, CMRSA1, CMRSA3 и CMRSA8. EOP фага К, размноженного на S. aureus SA812, упал также до 10 ^-7 и 10 ^-6 при посеве на штаммы CMRSA3 и CMRSA8 соответственно (таблица 3).Подобное поведение фага K наблюдалось в другом исследовании [22].

В целом диапазоны хозяев и значения EOP были в основном схожими при сравнении фагов, амплифицированных на обоих хозяевах, что указывает на то, что S. xylosus SMQ-121 является подходящим хозяином для продуцирования этих миофагов. Хотя результаты демонстрируют поливалентную природу трех протестированных фагов, по крайней мере один штамм S. aureus был устойчив к этим поливалентным фагам, что свидетельствует о важности использования коктейлей фагов для охвата более широкого диапазона штаммов.Это также предполагает, что такой штамм следует использовать для обнаружения новых фагов.

В заключение был охарактеризован новый поливалентный стафилококковый фаг. Мы обнаружили, что фаг Team1, а также хорошо известные фаги K и phi812, также могут размножаться на непатогенном штамме S. xylosus и быть высокоэффективными в уничтожении большой панели из полученных штаммов S. aureus из разных источников и принадлежность к разным генотипам. В этом исследовании предлагается использовать пищевые бактерии для усиления вирулентных и поливалентных стафилококковых фагов с целью повышения безопасности этих многообещающих агентов биоконтроля как для медицинских, так и для пищевых применений.

Благодарности

Мы благодарим Барбару-Энн Конвей за помощь в редактировании. Мы также хотели бы поблагодарить Ministère de l’Agriculture, des Pêcheries et de l ‘Alimentation du Québec (MAPAQ), Канадскую сеть исследований мастита крупного рогатого скота и Национальную лабораторию микробиологии Агентства общественного здравоохранения Канады за предоставление S. aureus штаммов. Л.Х. был получателем стипендии Канадского агентства международного развития. Дж.К. занимает кафедру исследований в области медицинской геномики Канады.С.М. возглавляет канадскую кафедру бактериофагов.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: SM DSG JC SL LEH. Проведены эксперименты: LEH NBA PLP. Проанализированы данные: LEH NBA PLP JD RK SL JC DSG SM. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты для анализа: LEH NBA PLP RK JC DSG SM. Участвовал в написании рукописи: LEH NBA PLP JD RK SL JC DSG SM.

Ссылки

1. 1. Lowy FD (1998) Staphylococcus aureus инфекции.N Engl J Med 339: 520–532.
2. 2. Le Loir Y, Baron F, Gautier M (2003) Staphylococcus aureus и пищевое отравление. Genet Mol Res 2: 63–76.
3. 3. Голдинг Г. Р., Кэмпбелл Дж. Л., Спрейцер Д. Д., Вейл Дж., Суринич К. и др. (2008) Предварительные рекомендации по отнесению метициллин-устойчивого Staphylococcus aureus к канадскому эпидемическому типу для гель-электрофореза в импульсном поле с использованием типирования spa . Может ли заразить Dis Med Microbiol 19: 273–281.
4. 4. Эндо Ю., Ямада Т., Мацунага К., Хаякава Ю., Кайдо Т. и др. (2003) Фаговая конверсия эксфолиативного токсина А в Staphylococcus aureus , выделенном от коров с маститом. Vet Microbiol 96: 81–90.
5. 5. Kaneko J, Kimura T, Kawakami Y, Tomita T, Kamio Y (1997) Гены лейкоцидинов Panton-valentine в фагоподобной частице, выделенной из обработанного митомицином C Staphylococcus aureus V8 (ATCC 49775). Biosci Biotechnol Biochem 61: 1960–1962.
6. 6. Tinsley CR, Bille E, Nassif X (2006) Бактериофаги и патогенность: больше, чем просто предоставление токсина? Микробы заражают 8: 1365–1371.
7. 7. El Haddad L, Moineau S (2013) Характеристика нового стафилококкового фага, кодирующего лейкоцидин Пантона-Валентайна (PVL), и его естественно-лишенного PVL варианта. Appl Environ Microbiol 79: 2828–2832.
8. 8. Дегхорейн М., Ван Мелдерен Л. (2012) Семейство фагов стафилококков: обзор.Вирусы 4: 3316–3335.
9. 9. Fortier LC, Секулович О. (2013) Важность профагов для эволюции и вирулентности бактериальных патогенов. Вирулентность 4: 354–365.
10. 10. BIOHAZ (2012) Группа EFSA по биологическим опасностям. Научное заключение об оценке безопасности и эффективности Listex ™ ^{P100 для удаления поверхностного загрязнения сырой рыбы Listeria monocytogenes.} . EFSA J 10: 2615–2658.
11. 11. Carlton RM, Noordman WH, Biswas B, de Meester ED, Loessner MJ (2005) Бактериофаг P100 для контроля Listeria monocytogenes в пищевых продуктах: последовательность генома, биоинформатические анализы, исследование оральной токсичности и применение.Regul Toxicol Pharmacol 43: 301–312.
12. 12. Чибеу А., Агиус Л., Гао А., Сабур П.М., Кропински А.М. и др. (2013) Эффективность бактериофага Listex ™ P100 в сочетании с химическими противомикробными препаратами в снижении уровня Listeria monocytogenes в приготовленной индейке и ростбифе. Int J Food Microbiol 167: 208–214.
13. 13. Сантос С.Б., Фернандес Э., Карвалью С.М., Силланкорва С., Крылов В.Н. и др. (2010) Выбор и характеристика поливалентного фага Salmonella и его продукция в непатогенном штамме Escherichia coli .Appl Environ Microbiol 76: 7338–7342.
14. 14. Цуй З., Сонг З., Ван И, Цзэн Л., Шэнь В. и др. (2012) Полная последовательность генома широкого диапазона хозяев Staphylococcus aureus фага JD007. J Virol 86: 13880–13881.
15. 15. Гарсия П., Мартинес Б., Обесо Дж. М., Лавин Р., Лурц Р. и др. (2009) Функциональный геномный анализ двух фагов Staphylococcus aureus , выделенных из молочной среды. Appl Environ Microbiol 75: 7663–7673.
16. 16.Квачадзе Л., Баларджишвили Н., Месхи Т., Тевдорадзе Э., Схиртладзе Н. и др. (2011) Оценка литической активности стафилококкового бактериофага Sb-1 против свежевыделенных клинических патогенов. Microb Biotechnol 4: 643–650.
17. 17. Гу Дж, Лю Х, Лу Р, Ли И, Сонг Дж и др. (2012) Полная последовательность генома бактериофага Staphylococcus aureus Gh25. J Virol 86: 8914–8915.
18. 18. Vandersteegen K, Mattheus W., Ceyssens P-J, Bilocq F, De Vos D, et al.(2011) Микробиологическая и молекулярная оценка бактериофага ISP для борьбы с Staphylococcus aureus . PLoS ONE 6: e24418.
19. 19. Capparelli R, Parlato M, Borriello G, Salvatore P, Iannelli D (2007) Экспериментальная фаговая терапия против Staphylococcus aureus у мышей. Антимикробные агенты Chemother 51: 2765–2573.
20. 20. Хан Дж.Э., Ким Дж.Х., Хван С.И., Хореска С.Х. мл., Шин С.П. и др. (2013) Выделение и характеристика бактериофага Myoviridae против Staphylococcus aureus , выделенного от молочных коров с маститом.Res Vet Sci 95: 758–763.
21. 21. Hsieh SE, Lo HH, Chen ST, Lee MC, Tseng YH (2011) Широкий спектр хозяев и сильная литическая активность литического фага Staphylococcus aureus Stau2. Appl Environ Microbiol 77: 756–761.
22. 22. О’Флаэрти С., Росс Р.П., Мини В., Фицджеральд Г.Ф., Эльбреки М.Ф. и др. (2005) Потенциал поливалентного бактериофага K против Staphylococcus для борьбы с устойчивыми к антибиотикам стафилококками из больниц. Appl Environ Microbiol 71: 1836–1842.
23. 23. Pantucek R, Rosypalova A, Doskar J, Kailerova J, Ruzickova V, et al. (1998) Поливалентный стафилококковый фаг phi812: его мутанты в диапазоне хозяев и родственные фаги. Вирусология 246: 241–252.
24. 24. Кшивински М., Шейн Дж., Бирол И., Коннорс Дж., Гаскойн Р. и др. (2009) Circos: эстетика информации для сравнительной геномики. Genome Res 19: 1639–1645.
25. 25. Dordet-Frisoni E, Dorchies G, De Araujo C, Talon R, Leroy S (2007) Геномное разнообразие в Staphylococcus xylosus .Appl Environ Microbiol 73: 7199–7209.
26. 26. Barriere C, Centeno D, Lebert A, Leroy-Setrin S, Berdague JL и др. (2001) Роль супероксиддисмутазы и каталазы Staphylococcus xylosus в ингибировании окисления линолевой кислоты. FEMS Microbiol Lett 201: 181–185.
27. 27. Бенито М.Дж., Серрадилья М.Дж., Мартин А., Аранда Е., Эрнандес А. и др. (2008) Дифференциация стафилококков от иберийских сухих ферментированных колбас с помощью снятия протеиновых отпечатков пальцев.Food Microbiol 25: 676–82.
28. 28. Enright MC, Day NP, Davies CE, Peacock SJ, Spratt BG (2000) Мультилокусное типирование последовательностей для характеристики метициллин-устойчивых и метициллин-чувствительных клонов Staphylococcus aureus . J Clin Microbiol 38: 1008–1015.
29. 29. Майдак Б.Л., Олсен Г.Дж., Ларсен Н., Овербек Р., МакКоги М.Дж. и др. (1996) Проект базы данных рибосом (RDP). Nucl Acids Res 24: 82–85.
30. 30. Feil EJ, Li BC, Aanensen DM, Hanage WP, Spratt BG (2004) eBURST: определение закономерностей эволюционного происхождения среди кластеров родственных бактериальных генотипов на основе данных мультилокусного типирования последовательностей.J Bacteriol 186: 1518–1530.
31. 31. Джикия Д., Чхаидзе Н., Имедашвили Э., Мгалоблишвили И., Цитланадзе Г. и др. (2005) Использование нового биоразлагаемого препарата, способного к замедленному высвобождению бактериофагов и ципрофлоксацина, в комплексном лечении местных лучевых поражений, вызванных воздействием Sr90, с множественной лекарственной устойчивостью Staphylococcus aureus . Clin Exp Dermatol 30: 23–26.
32. 32. Маркоишвили К., Цитланадзе Г., Кацарава Р., Моррис Дж. Дж. Мл., Сулаквелидзе А. (2002) Новая матрица с замедленным высвобождением на основе биоразлагаемых поли (сложноэфирных амидов), пропитанная бактериофагами и антибиотиком, дает многообещающие результаты в лечении инфицированных язв венозного застоя и другие плохо заживающие раны.Int J Dermatol 41: 453–458.
33. 33. Moineau S, Durmaz E, Pandian S, Klaenhammer TR (1993) Дифференциация двух абортивных механизмов с использованием моноклональных антител, направленных против капсидных белков лактококковых бактериофагов. Appl Environ Microbiol 59: 208–212.
34. 34. Deveau H, Van Calsteren MR, Moineau S (2002) Влияние экзополисахаридов на взаимодействия фаг-хозяин в Lactococcus lactis . Appl Environ Microbiol 68: 4364–4369.
35. 35.Бонфилд Дж. К., Смит К. Ф., Стаден Р. (1995) Новая программа сборки последовательности ДНК. Nucleic Acids Res 23: 4992–4999.
36. 36. Hall TA (1999) BioEdit: удобный редактор выравнивания биологических последовательностей и программа анализа для Windows 95/98 / NT. Nucleic Acids Symposium Series 41: 95–98.
37. 37. Rombel IT, Sykes KF, Rayner S, Johnston SA (2002) ORF-FINDER: вектор для высокопроизводительной идентификации генов. Gene 282: 33–41.
38. 38. Besemer J, Lomsadze A, Borodovsky M (2001) GeneMarkS: метод самообучения для предсказания начала генов в микробных геномах.Значение для поиска мотивов последовательностей в регуляторных областях. Nucleic Acids Res 29: 2607–2618.
39. 39. Kwan T, Liu J, DuBow M, Gros P, Pelletier J (2005) Полные геномы и протеомы 27 бактериофагов Staphylococcus aureus . Proc Natl Acad Sci 102: 5174–5179.
40. 40. Конеса А., Гоц С., Гарсия-Гомес Дж. М., Терол Дж., Талон М. и др. (2005) Blast2GO: универсальный инструмент для аннотации, визуализации и анализа в исследованиях функциональной геномики.Биоинформатика 21: 3674–3676.
41. 41. Lowe TM, Eddy SR (1997) tRNAscan-SE: программа для улучшенного обнаружения генов транспортной РНК в геномной последовательности. Nucleic Acids Res 25: 955–964.
42. 42. Laslett D, Canback B (2004) ARAGORN, программа для обнаружения генов тРНК и генов тмРНК в нуклеотидных последовательностях. Nucleic Acids Res 32: 11–16.
43. 43. Dlawer A, Hiramatsu K (2004) Staphylococcus aureus : молекулярные и клинические аспекты. Япония: Horwood Publishing Limited.267 с.
44. 44. Kloos WE, Schleifer KH (1975) Выделение и характеристика стафилококков из кожи человека II. Описание четырех новых видов: Staphylococcus warneri , Staphylococcus capitis , Staphylococcus hominis и Staphylococcus simulans . Int J Syst Bacteriol 25: 62–79.
45. 45. Lobocka M, Hejnowicz MS, Dabrowski K, Gozdek A, Kosakowski J, et al. (2012) Геномика стафилококковых Twort-подобных фагов — потенциальные терапевтические средства постантибиотической эры.Adv Virus Res 83: 143–216.
46. 46. Vandersteegen K, Kropinski AM, Nash JH, Noben JP, Hermans K и др. (2013) Romulus и Remus, два изолята фага, представляющие отдельную кладу в пределах рода Twortlikevirus , обладают подходящими свойствами для применения в фаговой терапии. J Virol 87: 3237–3247.
47. 47. Стотхард П. (2000) Набор для обработки последовательностей: программы на JavaScript для анализа и форматирования последовательностей белков и ДНК. Биотехники 28: 1102–1104.
48. 48. Marcó MB, Garneau JE, Tremblay D, Quiberoni A, Moineau S (2012) Характеристика двух вирулентных фагов Lactobacillus plantarum . Appl Environ Microbiol 78: 8719–8734.
49. 49. Баркема Х.В., Грин М.Дж., Брэдли А.Дж., Задокс Р.Н. (2009) Приглашенный обзор: Роль инфекционных заболеваний в здоровье вымени. J Dairy Sci 92: 4717–4729.
50. 50. Хата Э, Кацуда К., Кобаяси Х., Учида И., Танака К. и др. (2010) Генетическая изменчивость среди штаммов Staphylococcus aureus из коровьего молока и их значение для метициллин-резистентных изолятов от людей.J Clin Microbiol 48: 2130–2139.
51. 51. Wolf C, Kusch H, Monecke S, Albrecht D, Holtfreter S и др. (2011) Геномная и протеомная характеристика Staphylococcus aureus изолятов мастита крупного рогатого скота. Протеомика 11: 2491–2502.
52. 52. Рабелло Р.Ф., Морейра Б.М., Лопес Р.М., Тейшейра Л.М., Райли Л.В. и др. (2007) Мультилокусное типирование последовательностей изолятов Staphylococcus aureus , выделенных от коров с маститом в бразильских молочных стадах.J Med Microbiol 56: 1505–1511.
53. 53. Монтгомери С.П., Бойл-Вавра С., Адем П.В., Ли Дж.С., Хусейн А.Н. и др. (2008) Сравнение вирулентности у ассоциированных с сообществом метициллин-резистентных Staphylococcus aureus pulsotypes USA300 и USA400 в модели пневмонии на крысах. J Infect Dis 198: 561–570.
54. 54. Sakwinska O, Giddey M, Moreillon M, Morisset D, Waldvogel A, et al. (2011) Staphylococcus aureus Диапазон хозяев и смещение хозяев от человека к корову.Appl Environ Microbiol 77: 5908–5915.

Местный иммунитет в молочной железе после инфузии стафилококковой клеточно-токсоидной вакцины

https://doi.org/10.1016/S0034-5288(18) 34527-2 Получить права и содержание

Резюме

Одна сторона вымени Каждой из 16 овцематок в течение засушливого периода вводили вакцину поливалентного клеточного анатоксина. Вакцина содержала бактериальные клетки нескольких штаммов, включая фаг типа 42D, α-гетнолизин и лейкоцидин.Дозу 10 ⁶ организмов фага типа 42D использовали для заражения иммунизированных и неиммунизированных сторон вымени через 3 недели после окота.

Тивенти. Через четыре часа после заражения у 5 овец развился острый мастит, а у 7 — легкий мастит на неиммунизированной стороне, но иммунизированные стороны были ощутимо нормальными. У 4 овец в это время не было признаков воспаления с обеих сторон. Клиническое обследование через месяц после заражения показало, что неиммунизированные стороны были затвердевшими у большинства овец.

В течение первых 3 дней после заражения количество бактерий, выращенных из молока на иммунизированных сторонах, всегда было меньше, чем на неиммунизированных сторонах. После этого количество бактерий в молоке иногда было больше в молоке от иммунизированных сторон. Однако дисперсионный анализ результатов показал, что молоко с иммунизированных сторон содержало значительно меньше стафилококков, чем молоко с неиммунизированных сторон, в течение первых 14 дней после заражения.

У большинства овец титр стафилококковой агглютинации был выше в молоке, собранном непосредственно перед контрольным заражением с иммунизированных сторон.Предполагается, что локальный иммунный ответ на антигены клеточной стенки в значительной степени отвечает за наблюдаемую защиту. Попытки продемонстрировать усиление местного ответа добавлением 5 мкг. липополисахарида в вакцину оказались безуспешными.

Рекомендуемые статьи Цитирующие статьи (0)

Полный текст

Авторские права © 1968 Опубликовано Elsevier Ltd.

Рекомендуемые статьи

Цитирование статей

BAM Глава 13B — Методы обнаружения стафилококковых энтеротоксинов

Бактериологическое аналитическое руководство (БАМ), главная страница

Авторы : Сандра М.Таллент, Реджинальд В. Беннет и Дженнифер М. Хейт

История изменений:

• Июнь 2017 г. — В «Руководство по бактериологическому анализу» добавлена ​​новая глава 13B
• Январь 2018 — Гиперссылка на форму 4 CDC APHIS / CDC исправлена ​​

---

Стафилококковое пищевое отравление (SFP) — это интоксикация, возникающая в результате употребления пищи, загрязненной достаточным количеством предварительно образованных энтеротоксинов. Симптомы SFP проявляются в течение 2-8 часов после приема внутрь и включают тошноту, рвоту, спазмы в животе с диареей или без нее, которые обычно проходят в течение 24-48 часов.(Аргудин и др. ., 2010). Число людей, затронутых SFP, является приблизительным из-за неправильной диагностики и незначительных вспышек, о которых не сообщается. Госпитализация случается редко, но отмечается у людей с ослабленным иммунитетом, особенно у пожилых и очень молодых (Scallan et al ., 2011).

Стафилококки обычно присутствуют на коже и слизистых оболочках человека, приблизительно 20-30% при постоянной колонизации и 60% при периодической колонизации (Kluytmans et al ., 2005). Обработчики пищевых продуктов, заселенные энтеротоксигенными стафилококками, считаются основным источником загрязнения пищевых продуктов при прямом контакте с продуктами или контактными поверхностями. Такие животные, как молочный скот, также могут быть переносчиками стафилококков и могут быть источником заражения молока и молочных продуктов. Наконец, стафилококки, присутствующие в окружающей среде, могут передаваться в пищевые продукты, служащие потенциальным источником заражения (Gutiérrez et al ., 2012).

Продукты питания, обычно связанные с SFP, включают обработанные пищевые продукты, мясо, птицу, молочные продукты и хлебобулочные изделия.После заражения пищи может произойти рост стафилококков и выработка энтеротоксина, особенно если не соблюдаются хорошие производственные условия, предотвращающие рост, такие как условия хранения в холодильнике или этапы теплового уничтожения, такие как пастеризация (Gutiérrez et al ., 2012). Стафилококковые энтеротоксины термостабильны и не денатурируют, если не подвергаются воздействию высоких температур в течение длительного времени, , то есть , автоклавировать при 121 ° C (250 ° F) при 15 фунтах на квадратный дюйм в течение 60 минут (CDC, 2007).

Staphylococcus aureus чаще всего связан со вспышками стафилококковых пищевых отравлений, но другие энтеротоксигенные коагулазоположительные стафилококки, такие как S.hyicus и S. intermediateus также были замешаны в вспышках (Hennekinne et al ., 2010). Стафилококковые энтеротоксины (SE) — это пирогенные экзотоксины с суперантигенной активностью. Энтеротоксины — это глобулярные белки, устойчивые к нагреванию и протеазам с молекулярным размером в среднем около 25 кДа. Оценки количества токсина, необходимого для возникновения болезни, очень занижены. Одна вспышка, связанная с шоколадным молоком, выявила уровень СЭА 0,5 нг / мл (Evenson et al ., 1988) и 0,38 нг / мл SEA было обнаружено во время вспышки, связанной с сухим молоком (Asao, et al. ., 2003).

Классические SE (SEA-SEE) и неклассические SE, SEG, SEH, SEI, SER и SET продемонстрировали рвотную активность. Рвотная активность SE-подобных энтеротоксинов SE1J-SE1Q, SE1S, SE1U и SE1V еще предстоит продемонстрировать. Все гены se и sel были локализованы на мобильных генетических элементах, включая бактериофаги, островки патогенности, плазмиды или транспозоны (Argudin et al., ., 2012).

Обнаружение SE имеет первостепенное значение для безопасности пищевых продуктов и защиты пищевых продуктов. Методы обнаружения SE основаны на коммерчески доступных поливалентных иммуноферментных анализах (ELISA) или иммуноферментных флуоресцентных анализах (EFLA) с антителами, которые обнаруживают SEA-SEE. Моновалентные методы специфичны для SEA-SEE и могут использоваться для различения этих типов. Эти методы требуют извлечения энтеротоксина из предполагаемой пищи перед анализом. Чувствительность и селективность метода улучшаются при диализе концентрирования пищевого экстракта, но временные ограничения могут потребовать предварительного тестирования без концентрирования.Тем не менее, диализное концентрирование должно проводиться для всех молочных продуктов перед анализом (Hennekinne et al ., 2012).

ВНИМАНИЕ: Стафилококковые энтеротоксины очень токсичны, и процедуры, которые могут привести к образованию аэрозолей, должны выполняться в утвержденном шкафу биологической безопасности (BSC ). Стафилококковые энтеротоксины (SEA, SEB, SEC, SED и SEE) являются избранными агентами. Ученые должны следовать руководящим принципам, установленным CDC : https://www.selectagents.gov/faq-general.html.

1. Специальное оборудование и материалы
   1. В помещении или холодильнике с регулируемой температурой 2-8 ° C.
   2. Блендер или гомогенизатор.
   3. Инкубатор 35-37 ° C.
   4. Весы аналитические и весовые лодки.
   5. Поднос для диализа.
   6. pH-метр. Важны pH во время экстракции и pH буферов, используемых при экстракции. Внесите корректировки в пределах ± 0,1 единицы pH.
   7. Центрифуга с охлаждением 2-8 ° C.
   8. Лабораторная посуда из стекла или полипропилена для предотвращения адсорбции токсинов.
   9. Фильтровальная ткань используется для сбора мусора после центрифугирования. Часто для выполнения этой задачи используют несколько слоев предварительно намоченной грубой марли.
   10. Распределительная воронка.
   11. Диализная мембрана MWCO 6000-8000 Дальтон (например, Spectra / Por® с крышками) плоская ширина 23 ± 2 мм.
   12. Вакуумные фильтрующие устройства с конической трубкой (мембрана 0,22 мкм), такие как Steriflip (EMD Millipore), рекомендуются для фильтрации супернатантов жидких культур в качестве меры безопасности, чтобы избежать аэрозолизации энтеротоксинов.
   13. Шкаф биологической безопасности.
2. Реактивы

   Примечание : производителям наборов могут потребоваться другие буферы или растворители.

   1. Забуференный фосфатом физиологический раствор (раствор PBS) pH 7,3 + 0,2 (NaCl / Na ₂ HPO ₄ : 145 мМ / 10 мМ) для приготовления 1 л PBS растворяют 9 г NaCl и 3,58 г Na ₂ HPO ₄ в 1 л дистиллированной воды. Отрегулируйте pH до 7,2 ± 0,2 с помощью HCl.
   2. Натрия хлорид (NaCl).
   3. Фосфат натрия (Na ₂ HPO ₄ ).
   4. Полиэтиленгликоль (ПЭГ) (20 000 мол. Масс.) Приготовьте 30% (мас. / Об.) Раствор ПЭГ, добавив 30 г ПЭГ на каждые 70 мл дистиллированной воды.
   5. 1 н. (Или 0,1 н.) NaOH.
   6. 1 н. (Или 0,1 н.) HCl.
3. Подготовка диализной мембраны
   Обрежьте диализную мембрану, достаточно длинную, чтобы вместить пищевой экстракт, подлежащий концентрированию. Погрузите трубку в 2 смены дистиллированной воды, чтобы удалить глицериновый налет. Используя мембранный затвор или свяжите один конец трубки двумя узлами близко друг к другу.Наполните пробирку дистиллированной водой и проверьте герметичность, сжимая наполненный мешок, удерживая открытый конец плотно закрытым. Опорожните мешок и поместите его в дистиллированную воду до использования.
4. Извлечение энтеротоксина из порции пищи

   ПРИМЕЧАНИЕ: эту процедуру и другие процедуры, которые могут вызвать образование аэрозолей патогенных микроорганизмов или энтеротоксинов, следует выполнять в утвержденном шкафу биобезопасности.

   1. Если возможно, измельчите пищевой продукт целиком или его части из репрезентативных выбранных продуктов в блендере, чтобы гомогенизировать образец, чтобы любой SE, присутствующий в продукте, распределился равномерно.
      1. Для сыров с кожурой возьмите образец сыра с 10% кожуры и 90% сыра.
      2. Для высушенных продуктов используйте равное количество воды с продуктом для смешивания или следуйте инструкциям производителя.
   2. Взвешивают 25 г образца в стеклянном стакане, переносят пробу для испытания в блендер с 40 мл дистиллированной воды и перемешивают на высокой скорости в течение 3 минут, получая гомогенизированную суспензию. Не добавляйте воду к жидким образцам, переходите к шагу 3.
   3. Дайте токсину диффундировать, встряхивая образец при комнатной температуре в течение 30 минут.
   4. Подкисляют смесь 0,1 н. HCl до pH от 3,5 до 4,0. Примечание: если pH опускается ниже 3,0, необходимо приготовить еще одну порцию по 25 г.
   5. Перенести подкисленную суспензию в конические пропиленовые пробирки на 50 мл. Центрифуга при 3,130 × g в течение 20 мин при 5 ° C. Можно использовать более низкие скорости с более длительным временем центрифугирования, но очистка некоторых продуктов не так эффективна. Отделение жирных веществ неэффективно, если пища не центрифугируется при охлажденной температуре.
   6. Слить надосадочную жидкость в стакан емкостью 800 мл через марлю или другой подходящий фильтрующий материал, помещенный в делительную воронку.Если супернатант непрозрачный, снова центрифугируйте и слейте жидкость через марлю. Проверьте уровень pH, который должен быть от 3,5 до 4,5. Если pH правильный, нейтрализуйте смесь 0,1 н. NaOH, чтобы получить pH от 7,4 до 7,6.
   7. Если pH> 4,5, повторите подкисление, но если <3,0 или = ""> 9,0, повторите процесс с другой порцией пищи 25 г.
   8. При наличии достаточного количества доступного образца для повторного тестирования аликвоту можно удалить для скрининга с использованием утвержденного анализа (см.ЧАС). Если результаты скрининга отрицательные, оставшийся экстракт необходимо сконцентрировать с помощью диализа и повторно протестировать.
5. Диализ Концентрация экстракта
   1. Поместите экстракт в подготовленный диализный мешок. Положите закрытый мешок в лоток и погрузите мешок в 30% (вес / объем) PEG. Держать при 5 ° C, пока объем не уменьшится до 15-20 мл или меньше. Этот процесс может занять 24-72 часа, но если объем не уменьшился после выдержки в течение ночи, добавьте в лоток порошкообразный ПЭГ. Удалите мешок из ПЭГ и тщательно промойте снаружи водой, чтобы удалить любой ПЭГ, приставший к мешочку.Замочить в дистиллированной воде 1-2 мин. Вылейте содержимое в небольшой стакан.
   2. Промойте мешок изнутри 2-3 мл дистиллированной воды (PBS используется для молока и молочных продуктов), проводя пальцами вверх и вниз за пределами мешочка, чтобы удалить материал, приставший к бокам трубки. Повторяйте полоскание, пока промывочный раствор не станет прозрачным. Держите объем как можно меньше.
   3. Довести pH экстракта до 7,4-7,6.
   4. Концентрированные экстракты следует анализировать в течение 48 часов и хранить при 3-5 ° C, в противном случае заморозьте экстракты при 18-20 ° C и полностью разморозьте при 3-5 ° C перед тестированием.Некоторые тесты, такие как Vidas SET2, требуют немедленного анализа.
6. Тестирование SE из бактериальных культур

   Штаммы стафилококков, предположительно продуцирующие энтеротоксины, могут быть предварительно обогащены питательным бульоном, таким как TSB или BHI.

   1. Перенесите две или три морфологически похожие колонии в 10 мл питательного бульона.
   2. Инкубируйте при 35–37 ° C в течение ночи на орбитальном шейкере.
   3. Центрифуга культур 5 минут 3500 × g при 10 ° C
   4. Отфильтруйте супернатант с помощью вакуумного фильтрующего устройства Steri-Flip с 0.Фильтр 22 мкм или другая закрытая система для предотвращения аэрозолизации энтеротоксинов. Эта процедура должна выполняться в шкафу биологической безопасности, чтобы обеспечить безопасность ученого.
   5. Супернатанты культур могут иметь высокие уровни SE, которые выходят за пределы линейного диапазона набора, может потребоваться разбавление PBS.
7. Отчетность

   О наличии стафилококкового энтеротоксина, обнаруженного в пищевых продуктах, следует сообщать в Программу федерального отбора агентов, управляемую Центром контроля и защиты заболеваний (CDC): https: // www.selectagents.gov/form4.html, заполнив форму APHIS / CDC 4.

   Положительные результаты должны быть зарегистрированы как стафилококковый энтертоксоин, обнаруженный в × г (мл) продукта. Отрицательные результаты должны быть сообщены, поскольку стафилококковый энтеротоксин не обнаружен в × г (мл) продукта.

8. Банкноты

   Набор должен быть способен обнаруживать энтеротоксин при минимальном уровне 0,05 нг / г с высокими уровнями относительной чувствительности (> 90%) и относительной специфичности (> 90%).

   Упоминание торговых наименований или коммерческих продуктов в методе используется исключительно в целях научной информации и не подразумевает рекомендации или одобрения со стороны U.S. Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов. Два метода, которые обычно используются для обнаружения SE, включают одобренный AOAC Vidas SET2 (bioMerieux, Inc), который представляет собой автоматический поливалентный ферментно-связанный флуоресцентный анализ (EFLA), который обнаруживает SEA-SEE (официальный метод AOAC 2007.06 VIDAS SET2 для обнаружения стафилококкового энтеротоксина в Select Foods, Final Action, 2010). Текущий каталожный номер для Vidas Set2 — Ref. 30705. Ridascreen SET Total (R-Biopharm AG) представляет собой ручной иммуноферментный анализ, выполняемый в лунках, покрытых поливалентными антителами.Поливалентный набор Ridascreen выявляет стафилококковые энтеротоксины SEA-SEE и прошел валидацию и проверку в ходе тщательных кольцевых испытаний и валидационных исследований третьей стороной под руководством Справочной лаборатории Европейского Союза по коагулазо-положительным стафилококкам для Европейского комитета по стандартизации (CEN) мандат, предложенный стандартом ISO 19020. A Моновалентный набор Ridascreen Set A, B, C, D, E (R-Biopharm AG) доступен, но этот набор не прошел валидацию третьей стороной. Каталожный номер поливалентного набора Set Total — R4105 (96 тестов) или R4106 (48 тестов).Каталожный номер моновалентного набора SET A, B, C, D, E — R4101.

Помехи

Неспецифические реакции могут возникать в пищевых продуктах, содержащих эндогенные ферменты, такие как лактопероксидаза или щелочная фосфатаза, и мешать работе наборов, таких как Vidas SET2, которые используют щелочную фосфатазу в качестве детектирующего фермента (Vernozy-Rozand, et al ., 2005). Рекомендуется подтверждать все положительные результаты альтернативным методом, использующим другой фермент обнаружения.В случае Vidas SET2 одним из альтернативных методов является Ridascreen SET Total, в котором используется лактопероксидаза.

Для удаления эндогенной щелочной фосфатазы из образца может применяться тепловая обработка следующим образом:

• Перенесите 600 мкл концентрированного экстракта в пробирку
• Нагреть 80 ° C в течение 2 минут
• Повторите анализ Vidas SET2 с охлажденным концентратом. Может произойти некоторая потеря энтеротоксина.

Если есть подозрение на неточный результат при использовании Ridascreen или другого набора, использующего лактопероксидазу, перенесите 100 мкл концентрированного экстракта в пробирку.Добавьте по 50 мкл каждого раствора субстрата и хромагена. Смешайте и наблюдайте за сине-зеленым цветом. Если появляется сине-зеленый цвет, это указывает на то, что в образце присутствует собственная лактопероксидаза, которая мешает анализу. Следовательно, необходимо использовать другой метод обнаружения.

---

Список литературы

1. Аргудин, Массачусетс, Мендоса, М.К., и Родичио, М.Р. Пищевое отравление и золотистый стафилококк энтеротоксины. Токсины 2010 , 2, 1751-1773.
2. Аргудин, Массачусетс, Мендоса, М.К., Гонсалес-Хевиа, Массачусетс, Бансес, М., Герра, Б., и Родисио, М.Р. Генотипы, содержание гена экзотоксина и устойчивость к противомикробным препаратам штаммов Staphylococcus aureus , извлеченных из пищевых продуктов и пищевых продуктов. AEM 2012 78 2930-2935.
3. Asao, T, Kumeda, Y, Kawai, T, Shibata, T, Oda, H, Nakazawa, H, and Lozaki, S. Обширная вспышка стафилококкового пищевого отравления из-за нежирного молока в Японии: оценка энтертоксина А в инкриминируемом молоке и сухом обезжиренном молоке. Epidemiol. Заражение ., 2003 , 130, 33-40.
4. Центры по контролю за заболеваниями / Национальные институты здравоохранения. Биобезопасность в микробиологических и биомедицинских лабораториях. Пятое издание, 2007 г., Эвенсон, М.Л., Хайндс, М.В., Бернштейн, Р.С., Бефгдолл, М.С. Оценка дозы стафилококкового энтеротоксина А для человека в крупной вспышке стафилококкового пищевого отравления с участием шоколадного молока. Int J Food Microbiol 1988 , 31, 311-316.
5. Гутьеррес, Д., Дельгадо, С., Васкес-Санчес, Д., Мартинес, Б., Каба, М.Л., Родригес, А., Эррера, Дж. Дж., И Гарсия, П.Заболеваемость Staphylococcus aureus и анализ ассоциированных бактериальных сообществ на поверхности пищевой промышленности. AEM 2012 , 78, 8547-8554.
6. Hennekinne, JA, Ostyn, A, Fuillier, F, Hervin, S., Prufer, AL, and Dragacci, S. Как следует охарактеризовать вспышки пищевого отравления стафилококками? Токсины, 2010 , 2, 2106-2116.
7. Hennekinne, JA, De Buyser, MA, и Dragacci, S. Staphylococcus aureus и его токсины пищевого отравления: характеристика и расследование вспышки.FEMS Microbiol Rev, 2012 , 36, 815-836.
8. Kluytmans, JAJW, и Wertheim, HFL. Носительство Staphylococcus aureus и профилактика внутрибольничных инфекций. Инфекция 2005 , 33, 3–8.
9. Scallan E, Hoekstra RM, Angulo FJ, Tauxe RV, Widdowson M-A, Roy SL, и др. . Болезни пищевого происхождения, приобретенные в США — основные патогены. Emerg. Заразить. Dis . 2011 г., январь http://www.cdc.gov/EID/content/17/1/7.htm
10. Вернозы-Розанд, С., Mazuy-Cruchaudet, C., Bavai, C. и Richard, Y. (2004), Сравнение трех иммунологических методов обнаружения стафилококковых энтеротоксинов в пищевых продуктах. Lett App Microbiol , 2004 , 39, 490-494. DOI: 10.1111 / j.1472-765X.2004.01602.x

Вклад бактериофагов Podoviridae и Myoviridae в эффективность антистафилококковых лечебных коктейлей

Выделение бактериофагов и их морфология

Мы определили бляшкообразующую активность коммерческого терапевтического коктейля, производимого компанией Microgen (Россия), на панели из 75 охарактеризовано S.aureus (таблица S1). Литическая активность коктейля покрывала 85% испытуемой панели (таблица 1).

Таблица 1 Анализ диапазона хостов.

Бактериофаг vB_SauM-515A1 был выделен из бляшки, образованной на штамме S. aureus SA515, который был чувствителен к действию коктейля. Бактериофаг vB_SauM-515A1 очищали путем многократного выделения отдельной бляшки, и диапазон его хозяев определяли на той же панели штаммов-хозяев. Литическая активность этого фага оказалась идентичной спектру активности оригинального коммерческого коктейля.Однако при 11 штаммах S. aureus оставались устойчивыми как к исходному коктейлю, так и к выделенному из него фагу vB_SauM-515A1.

Чтобы выяснить, присутствуют ли в коктейле некоторые минорные компоненты, которые могут быть активными против этих 11 штаммов, мы создали обогащающие культуры с одним и тем же коммерческим фаговым препаратом для каждого из 11 штаммов S. aureus . Были получены фаги, активные против еще четырех штаммов. Десять бляшек, образованных на каждом из этих четырех штаммов, были протестированы (с использованием переноса зубочисткой) на всех четырех хозяевах, а также на штамме SA515.Все бляшки вызвали рост каждого из 4 штаммов, устойчивых к коктейлю, в то же время чувствительный к коктейлю штамм SA515 не поддерживал рост ни одного из этих фагов. Бактериофаги очищали от каждого из четырех штаммов-хозяев путем выделения тройной одиночной бляшки. Последующий анализ диапазона хозяев этих изолятов фагов не выявил никаких различий между ними, поэтому мы сочли эти изоляты идентичными. Поэтому для последующей работы мы использовали один изолят фага, полученный при прямом посеве коктейля, а именно фаг vB_SauM-515A1, и один изолят фага из того же коктейля с использованием устойчивого к коктейлю штамма SA436; в дальнейшем фаг vB_SauP-436A1.

Морфологию фагов vB_SauM-515A1 и vB_SauP-436A1 определяли с помощью просвечивающей электронной микроскопии. Фаг vB_SauM-515A1 был миовирусом с икосаэдрической головой (82 ± 4,1 нм) и сократительным хвостом (199 ± 9,9 нм) (рис. 1A). Электронная микроскопия фага vB_SauP-436A1 показала, что это подовирус с икосаэдрической головкой (60 ± 3 нм) и коротким неконтрактильным хвостом (35 ± 1,8 нм) (рис. 1B), морфология напоминающая другие стафилококки Podoviridae вирусов ²⁰ .

Рисунок 1

Просвечивающая электронная микроскопия vB_SauM-515A1 ( A ) и vB_SauP-436A1 ( B ).

Анализ генома vB_SauM-515A1 и vB_SauP-436A1

Генетические особенности vB_SauM-515A1

Линейная двухцепочечная ДНК фага vB_SauM-515A1 имела длину 148,511 п.н. (7653 п.н. с двумя длинными концевыми повторами) оба конца. На концах неизбыточной части инкапсидированного вириона генома были обнаружены инвертированные повторы последовательности длиной 12 п.н. (5′-TAAGTACCTGGG-3 ‘и 5′-CCCAGGTACTTA-3’), что является характерной особенностью Twort- как вирусы ²¹ .Анализ предполагаемых сайтов эндонуклеаз рестрикции в геноме показал, что сайты для ферментов стафилококкового происхождения в основном отсутствуют. В геноме фага vB_SauM-515A1 полностью отсутствовали сайты GATC для фермента Sau3AI, и в его геноме был только один сайт Sau96I (GGNCC).

Полный геном фага vB_SauM-515A1 содержал 238 предполагаемых открытых рамок считывания (ORF) и 4 тРНК (тРНК-Met, тРНК-Trp, тРНК-Phe и тРНК-Asp) (MN047438.1). Большинство генов (167 из 238 ORF), по-видимому, транскрибируются с положительной цепи, а остальные (расположены в районе с 7.От 8 до 40,8 т.п.н.) от отрицательной цепи. Сравнение предсказанных ORF с доступными аннотациями в общедоступных базах данных не выявило каких-либо генов новых белков, а также генов интегразы, токсинов и факторов, связанных с вирулентностью. Интроны группы I были идентифицированы в генах, кодирующих лизин, терминазу, экзонуклеазу, связанную с ДНК-полимеразой, и RecA-подобную рекомбиназу, что было продемонстрировано для фагов семейства Myoviridae ранее ^4,21 .

Основанный на геноме филогенетический анализ генома vB_SauM-515A1 и 41 фага выявил кластеризацию с другими Twort-подобными вирусами.На филогенетическом и геномном уровнях наш фаг был наиболее близок к бактериофагам vB_SauM_fRuSau (99,82%), MSA6 (99,78%), B1 (99,91%) и JA1 (99,89%) (рис. 2). Геномное сравнение vB_SauM-515A1 с фагами K и Twort показало уровни идентичности 99,49% и 70,98% соответственно.

Рисунок 2

Филогенетическое дерево 42 стафилококковых фагов, принадлежащих к семейству Myoviridae . Источник изоляции и страна каждого вида помечаются цветным прямоугольником, если такая информация недоступна, прямоугольник остается пустым.

Генетические особенности vB_SauP-436A1

Геном фага vB_SauP-436A1 представлял собой непрерывную последовательность линейной двухцепочечной ДНК из 18 028 п.н. с общим содержанием G + C 29,34%. Двадцать одна открытая рамка считывания была определена как потенциальный фаговый ген, разделенный на четыре функциональные группы: структурные (белок хвостовых волокон, белок воротничка, капсид и белок каркаса), лизис ( N -ацетилмурамоил-1-аланинамидаза, холин, амидаза ), Метаболизм ДНК (одноцепочечный ДНК-связывающий белок, ДНК-полимераза) и упаковка ДНК (MN150710.1). Как и в случае с фагом Myoviridae , все найденные гены имели гомологи в базе данных NCBI. В геноме не было предсказано никаких тРНК.

Сравнение с другими фагами Podoviridae , доступными в базе данных NCBI, показало, что геном vB_SauP-436A1 был тесно связан с геномами SCh2 (99,98%) и SCh211 (99,96%) (рис. 3). Фаги SCh2 и SCh211 также были выделены в России и имели только два SNP по сравнению с геномом фага vB_SauP-436A1. SCh211 дополнительно имел в геноме три делеции, расположенные в гомополимерных областях полиА.Ближайший фаг Portland имел более 1000 SNP и отличия в аннотации 11 ORF относительно vB_SauP-436A1.

Рисунок 3

Филогенетическое дерево стафилококковых фагов принадлежало к семейству Podoviridae . Источник изоляции и страна каждого вида помечаются цветным прямоугольником, если такая информация недоступна, прямоугольник остается пустым.

Определение диапазона хозяев фагов

Коллекция из 134 штаммов Staphylococcus , состоящая из 75 S.aureus и 59 коагулазонегативных штаммов Staphylococcus (CoNS) (45 штаммов S. epidermidis и 14 штаммов S. haemolyticus ), были использованы для оценки диапазона хозяев (Таблица S1). Штаммы S. aureus принадлежали к 26 различным спа-типам, и t008 был наиболее частым типом (n = 21, 27,6%). Тестируемый набор включал 36 штаммов MRSA и 40 штаммов MSSA. Штаммы S. epidermidis и S. haemolyticus были охарактеризованы MLST и принадлежали к 17 и 10 ST соответственно.Преобладающими ST59 были ST59 для S. epidermidis (n = 14, 31,1%) и ST12 для S. haemolyticus (n = 4, 28,6%) .

Диапазон хозяев бактериофагов vB_SauM-515A1 и vB_SauP-436A1 сравнивали с литической активностью коммерческого терапевтического коктейля [коктейль бактериофагов Staphylococcus (партия P332)], из которого они были выделены. Также исследовали диапазон хозяев бактериофага vB_SauM-fRuSau02, ранее выделенного из другого терапевтического коктейля Microgen ⁴ (таблицы 1, S1).Как и ожидалось, отдельные бактериофаги и коктейль фагов показали широкую литическую активность против штаммов S. aureus (от 68 до 85,3%), которая не зависела от лекарственной устойчивости и спа-типа. В свою очередь, большинство штаммов CoNS были устойчивы к бактериофагам (Таблицы 1, S1).

Следует отметить, что коктейль бактериофагов фага vB_SauM-515A1 и Staphylococcus был одинаково эффективен и инфицировал 64 из 75 штаммов S. aureus (). Бактериофаг vB_SauM-fRuSau02 показал аналогичную широту литического спектра; только один дополнительный S.aureus устойчив к фагу vB_SauM-fRuSau02. Podoviridae Бактериофаг vB_SauP-436A1 имел более узкий круг хозяев и был способен лизировать 51 штамм. Между тем фаг vB_SauP-436A1 был способен образовывать бляшки на 4 штаммах S. aureus , устойчивых к фагам Myoviridae и коктейлю бактериофагов (Таблица S1).

Готовили смесь vB_SauM-515A1 и vB_SauP-436A1, содержащую равные количества БОЕ этих бактериофагов. Титры фагов в смеси равнялись 1.4 × 10 ¹⁰ БОЕ / мл. Литический диапазон этой смеси был шире, чем у исходного коммерческого коктейля фагов, из которого были выделены оба бактериофага (таблица 1). Смесь была способна заразить все Staphylococcus spp. штаммы, чувствительные к vB_SauM-515A1 и vB_SauP-436A1 по отдельности [68 штаммов S. aureus (90,6%), 6 штаммов S. epidermidis (13,3%)] (Таблица 1). На штаммах S. haemolyticus образования бляшек не наблюдалось.

Анализ факторов, влияющих на литическую активность коммерческого коктейля

Для оценки причин снижения литической активности коктейля бактериофагов Staphylococcus были проанализированы следующие параметры: (1) титры vB_SauM-515A1 и vB_SauP-436A1 в коктейле; (2) биофизическая стабильность бактериофагов; (3) параметры заражения бактериофагами; (4) эффективность покрытия.

Титры vB_SauM-515A1 и vB_SauP-436A1 в коктейле

Титр vB_SauM-515A1 и vB_SauP-436A1 в коктейле оценивали на штаммах-хозяевах SA515 и SA436 соответственно.В результате титр бактериофага vB_SauM-515A1 был в 10 ⁴ раз выше, чем у vB_SauP-436A1 [8 × 10 ⁶ (БОЕ) / мл против 2 × 10 ² (БОЕ) / мл соответственно. ].

Стабильность бактериофагов

Для оценки биофизической стабильности vB_SauM-515A1 и vB_SauP-436A1 была протестирована выживаемость бактериофагов при различных температурах и значениях pH (Рисунок S1). Оба бактериофага были стабильны при 4 ° C, повышенная температура уменьшала их период полувыведения, причем наибольший эффект наблюдался для фага vB_SauP-436A1.Напротив, хранение при -20 ° C привело к более быстрой инактивации фаговых частиц vB_SauM-515A1 (рисунок S1). Инкубация в течение 24 ч при 4 ° C и значениях pH среды от 5 до 9 не вызывала значительных изменений титра бактериофагов, в то время как ярко выраженные щелочные (pH = 13) условия приводили к полной инактивации фагов. Заметное снижение инфекционной способности vB_SauM-515A1 и vB_SauP-436A1 также наблюдалось после инкубации при pH ниже 5 (Рисунок S1).

Параметры заражения бактериофагами vB_SauM-515A1 и vB_SauP-436A1

Для исследования параметров заражения vB_SauM-515A1 и vB_SauP-436A1 были определены эффективность адсорбции, латентный период, размер пакета и эффективность заражения.Эффективность адсорбции фагов на поверхности штаммов-хозяев оценивали через 0, 1, 5, 10, 15, 20 и 25 мин (фиг. 4A). Согласно результатам, фаг vB_SauM-515A1 адсорбируется на бактериальных клетках быстрее (максимальная адсорбция наблюдалась через 15 мин), чем фаг vB_SauP-436A1 (максимальная адсорбция наблюдалась через 25 мин), но эффективность адсорбции у них фаги были сопоставимы (vB_SauM-515A — 71,7% и vB_SauP-436A1 — 72,8%).

Рисунок 4

Параметры заражения vB_SauM-515A1 и vB_SauP-436A1.( A ) Процент частиц vB_SauM-515A1 (оранжевые полосы) и vB_SauP-436A1 (синие полосы), адсорбированных на поверхностях штаммов хозяина. * Процент частиц vB_SauM-515A1 на штамме SA515 через 35 мин превышал 100%. ( B ) Одностадийный анализ кривой роста vB_SauM-515A1 (оранжевые столбцы) и vB_SauP-436A1 (синие столбцы) на экспоненциальной культуре штаммов хозяев. Соответствующие значения размера пакета ( B ) указаны цифрами. ( C ) Кривые роста штаммов SA515 и SA436, инфицированных vB_SauM-515A1 и vB_SauP-436A1, соответственно.Кривые заражения получали при различных значениях MOI (0,1, 1, 10).

Результаты экспериментов с одним пакетом, показанные на рис. 4B, показали, что vB_SauM-515A1 и vB_SauP-436A1 характеризовались разными периодами задержки. Частицы фага-потомка высвобождались через 40 минут после инокуляции в случае vB_SauM-515A1 и через 50 минут в случае vB_SauP-436A1. Также период высвобождения новых фагов культурой SA436, инфицированной фагом vB_SauP-436A1, намного дольше, чем для инфекции vB_SauM-515A1.Это указывает на то, что латентный период (время от заражения до лизиса клетки) может значительно варьироваться от клетки к клетке, что не относится к культуре SA515, инфицированной vB_SauM-515A1. Нам не удалось идентифицировать молекулярный фон наблюдаемых различий в динамике лизиса клеток в этих двух системах фаг-хозяин.

Бактерицидное действие фагов vB_SauM-515A1 и vB_SauP-436A1 для культур SA515 и SA436 S. aureus оценивали на основании кривых роста штаммов-хозяев, инфицированных соответствующими бактериофагами при различных MOI (рис.4С). Оба бактериофага были способны лизировать бактериальную культуру при MOI 0,1–10. При тех же значениях MOI vB_SauM-515A1 вызывал лизис бактериальной культуры штамма-хозяина быстрее, чем vB_SauP-436A1, что особенно заметно при низких значениях MOI. Таким образом, бактериальная культура SA515 была лизирована vB_SauM-515A1 при MOI 0,1 через 180 мин (OD600 = 0,081), тогда как бактериальная культура SA436, инфицированная vB_SauP-436A1, имела OD600 = 0,2533 в то же время. Оптическая плотность контрольных культур SA515 и SA436 (без бактериофагов) через 180 мин составляла 0.40 и 0,43 соответственно.

Уменьшенный размер вспышки и более длительный латентный период фага vB_SauP-436A1 по сравнению с vB_SauM-515A1 может объяснить более медленное in vitro уничтожение культуры S. aureus первым вирусом (рис. 4C). Тем не менее, vB_SauP-436A1 вызывает остановку роста культуры и снижение оптической плотности даже при низкой MOI, что указывает на то, что этот фаг может быть применим для фаговой терапии.

Эффективность покрытия

Эффективность покрытия (EOP) оценивалась для всех S.aureus , чувствительные к обоим бактериофагам vB_SauM-515A1 и vB_SauP-436A1 согласно данным анализа бляшек (n = 49) (Таблица S2). Значения EOP vB_SauM-515A1 на этих штаммах варьировались от 50 до 1000% (среднее значение EOP 224%) и значительно превышали значения EOP vB_SauP-436A1 (значение EOP 1–433%; среднее значение EOP 133 %). Лизис извне выявлен для 3 и 14 штаммов при взаимодействии с бактериофагами vB_SauM-515A1 и vB_SauP-436A1 соответственно.

Молочный Staphylococcus aureus: эпидемиология, лекарственная чувствительность, лекарственная модуляция и профилактические меры

\ n

2. Распространенность

Staphylococcus aureus из молочного молока \ n \ n

2.1. Молоко крупного рогатого скота и буйволов

\ n

Сообщалось о мастите крупного рогатого скота с более чем 140 видами бактерий в дополнение к незначительной распространенности грибков, водорослей и вирусов, из которых S. aureus в среднем является первым возбудителем этого заболевания. болезнь. Распространенность S. aureus варьируется от менее 10% до 65%. Уровень стафилококковых изолятов субклинического мастита крупного рогатого скота в Пакистане доведен до 85%. Недавние исследования в Канаде сообщили о 46% распространенности S. aureus на уровне стада. Патоген неизменно присутствует как у буйволов, так и у крупного рогатого скота, но в некоторых исследованиях сообщается о более высокой распространенности у буйволов, чем у крупного рогатого скота. Различия в распространенности Staphylococcus aureus внутри и среди разных видов молочных продуктов могут быть связаны с выживанием бактерий в кератиновом слое молочных желез, где различные методы уклонения от иммунитета, такие как производство биопленки, являются причинами меньшего выделения бактерий из окружающей среды молочных желез.К другим факторам относятся географическая изменчивость, порода, вид и управление фермой. В различных исследованиях распространенность мастита у буйволов выше, чем у крупного рогатого скота. Причиной может быть более высокая питательная ценность его молока, что способствует росту бактерий. Более длинные соски с изогнутой формой также способствуют бактериальной инвазии, которая сравнительно выше, чем у крупного рогатого скота [1]. Некоторые из основных факторов распространения этого патогена рассматриваются как руки, мухи и полотенца доярки, которые распространяют эти патогенные бактерии для очистки вымени во время доения.

\ n \ n \ n

2.2. Молоко верблюда

\ n

Исследования верблюжьих болезней показали более низкую распространенность мастита до двадцатого века. Причина того, что верблюжий мастит не уделяется первоочередного внимания, заключалась в том, что более высокое содержание лактоферрина считается антибактериальным. Однако более поздние исследования выявили различные аспекты мастита. Исследования микробного поражения обнаружили, что S. aureus неизменно присутствуют в различных процентных количествах. Отмечено, что его распространенность составляет 1,8% в Саудовской Аравии и 83% в Кении.Пакистан сообщил о 74,04% из распространенности S. aureus в сообществе верблюдов из пустыни. В большинстве исследований сообщается о несопоставимой более высокой распространенности S. aureus . Однако в некоторых исследованиях сообщается, что он является вторым по значимости патогеном после Streptococcus agalactiae, таким образом, , что означает, что распространенность этого патогена в мировом сообществе верблюдов на данный момент составляет 20,35%. Различия в распространенности объясняются неравномерным распределением этих бактерий, различными гигиеническими стандартами на фермах, негигиеничным процессом доения и более низким, чем требуется, посевным материалом (0.1 мл) для нанесения штрихов на питательную среду и производства биопленки. В пустынной среде преобладают антисанитарные условия, в результате чего телки содержат внутримолочные бактерии, которые после родов продолжают выделяться в молоко. Использование устройств для прекращения сосания телят, заражения клещами, деформации вымени колючими кустами и верблюжьей оспы способствует распространению мастита. Все эти факторы вызывают случая заражения S. aureus . Были предприняты попытки некоторых диагностических методов скрининга для раннего выявления этого патогена, для которого в противном случае требуются биохимические протоколы.В исследовании сообщается, что чувствительность калифорнийского теста на мастит составляет 68%. В случае верблюжьего молока калифорнийский маститный тест трудно выполнить, поскольку большое количество клеточных фрагментов, окруженных плазматической мембраной, имеющей грубый эндоплазматический ретикулум и митохондрии, но без ядра, обычно обнаруживаются в молоке. Присутствие этих клеточных фрагментов создает ложноположительные результаты, для которых обычно требуются лимфоциты, нейтрофилы и макрофаги, которые являются маркерами воспаления.

\ n \ n \ n

2.3. Козье и овечье молоко

\ n

Распространенность S. aureus в козьем молоке установлена ​​на 66% [2]. Сыр из сырого молока и непастеризованное молоко употребляют на традиционных основаниях. Помимо ухудшения качества и количества молока, массовое заражение молока S. aureus отражает тяжесть субклинического и клинического мастита на ферме. Это могло быть причиной большого количества наблюдений за S. aureus в сыпучем молоке. Швейцарские молочные фермы сообщили, что 30% стад коз и овец были идентифицированы с S.aureus . Наблюдаемая вирулентность S. aureus была одинаковой как для коз, так и для овец с точки зрения splE и sdrD . Более высокая распространенность spLE наблюдалась в козьем молоке, а lukM — в овечьем молоке. Было обнаружено, что гены, кодирующие суперантиген-подобные белки ( ssl ), обладают иммуноэвазивным действием, поскольку они мешают системе толл-подобных рецепторов. Ген, формирующий биопленку (Q7A4X2), наблюдался в дополнение к sdrD , splE и lukM , которые в основном являются вирулентными факторами S.aureus , выделенный от мелких жвачных животных. Исследования показали, что тест на латексную агглютинацию Staphaurex является более эффективным диагностическим инструментом в случае коз и овец S. aureus . Сообщается, что этот тест дает 51% результатов как ложноотрицательный при использовании в качестве диагностического теста для крупного рогатого скота S. aureus . Информация о загрязнении сырого сыпучего молока вирусом S. aureus ограничена. Имеются ограниченные исследования, в которых сообщается о загрязнении емкостей для молока овец Staphylococcus aureus .Неоднородность в отчетах о S. aureus существует с пиковым процентом во время исследований 2003 г., который составил 33,3% [3, 4]. Однако сообщается, что мясо овец составляет 20–94% из случаев заражения S. aureus [5].

\ n \ n \ n

2.4. Факторы риска

\ n

Животные более старшего возраста более предрасположены к инфицированию молочных желез из-за расширенных сосков, предыдущего повторного контакта с инфекцией и более низкого иммунного ответа [6]. У животных пожилого возраста риск заболевания маститом в два раза выше, чем у животных более молодого возраста.С другой стороны, некоторые исследования не обнаружили, что возраст является фактором риска мастита. Антисанитарные условия на фермах наряду с другими факторами риска могут привести к заражению животных независимо от возраста. Кормящие животные более подвержены стафилококковой инфекции, так как в период лактации распространение инфекционных возбудителей увеличивается, если не соблюдать гигиенические меры. Период после родов наиболее подвержен заболеваниям из-за более низкого иммунного ответа в этот период. В некоторых исследованиях сообщается о более высокой распространенности заболеваний в конце лактации по причинам более низкого иммунного ответа [7].В некоторых исследованиях было обнаружено, что ранняя лактация является восприимчивой к причинам более высокой молочной продуктивности, что положительно коррелирует с распространением мастита. Клещи передают возбудитель от одного животного к другому. Они создают подходящую среду, способствующую патогенезу микробов. Большинство исследований сообщают о более высокой распространенности мастита в случаях заражения клещами.

\ n

Более высокая четность оказалась более восприимчивой к заражению. Это было оправдано переносом инфекции от одного паритета к другому.Некоторые исследователи не обнаружили корреляции мастита с паритетным числом [8]. Заразность S. aureus положительно коррелирует с негигиеничной системой доения. Обнаружена зачистка перед доением с использованием S. aureus , который может передаваться другим животным, если не соблюдаются правила гигиены [9]. При проведении исследований распространенности S. aureus рекомендуется отказаться от первых нескольких отслоений молока. Однако распространение маститогенов в окружающей среде не связано с раздеванием перед доением.Сообщается, что на фермах, где до и после доения практикуют окунание сосков хлоргексидином и йодом, вероятность заболевания снижается [10]. Они открывают измененную устойчивость антибиотиков к бактериям пищевого происхождения [11].

\ n \ n \ n

2,5. Типы

штаммов S. aureus , выделенных из молочного молока \ n

Staphylococcus aureus происходит из семейства Staphylococcaceae и рода Staphylococcus . Сообщается, что род Staphylococcus насчитывает 42 вида, которые далее классифицируются на основе продукции коагулазы.Некоторые виды этого рода являются нормальными обитателями кожи и слизистой оболочки. Другие виды, кроме Staphylococcus aureus , которые продуцируют коагулазу и обнаруживают этиологию мастита, включают Staphylococcus intermediateus и Staphylococcus hyicus . Эти штаммы не могут строго придерживаться выработки коагулазы из-за появления генетической изменчивости. Помимо этой фенотипической идентификации существуют интерпретации результатов [12].Это предлагает методы на основе нуклеиновых кислот-мишеней для идентификации и классификации. Вирулентные гены, а именно spa igG-связывающие, icaA, icaD, agrI-agrIII, cap. fnbA, fnB, hla, hlb, clfA, nuc и spa X-область связаны с маститом крупного рогатого скота. К ним добавлены mecA , ген , blaZ , гены устойчивости к ванкомицину и гипервирулентные гены, которые увеличивают трудоемкость диагностики [13]. Явные факторы вирулентности, которые включают гемолизин (альфа, бета, гамма, дельта), белок теплового шока, ферменты (нуклеаза, липазы, протеаза, стафилокиназа, эстераза), капсульные полисахариды, слизь, адгезивные белки (связывающий фибронектин белок, эластин). -связывающий белок, коллаген-связывающий белок и белок А) часто идентифицируются из молочного молока.Они имеют прямое воздействие на здоровье населения (14, 13). Метициллин-резистентный S. aureus не только распространяется среди животных, но также, как сообщается, вызывает вспышку среди людей [14].

\ n

Штаммы, продуцирующие биопленку, при субклиническом и клиническом мастите также становятся все более популярными. Это сидячие микробные сообщества клеток, которые прикрепляются к субстрату или друг к другу, в результате чего они встраиваются во внеклеточное полимерное вещество собственного производства, состоящее из различных компонентов, таких как ДНК, белок, углеводы и так далее [15].Идентификация этих штаммов из S. aureus настроена на 61%, и это может увеличиваться в среде, где наблюдаются подходящие факторы риска. Внутримолочные инфекции, установившиеся на длительные периоды, требуют агрегации адгезивных колоний, которые окружены самовоспроизводящейся экзополисахаридной матрицей, биопленкой. Биопленки избегают фагоцитоза из-за большего размера. Матрица биопленки варьируется от вида к виду, а также обстоятельства окружающей среды играют роль в определении сложности матрицы биопленки.Биопленки доказали свою устойчивость к ультрафиолетовому свету, антибактериальным препаратам, биоцидам, биоразлагаемости и усиленному геномному разнообразию, разнообразной способности к разложению и более высокому образованию вторичных метаболитов [16]. Устойчивость к антибиотикам объясняется физическим барьером (экзополисахаридом), ограниченным ростом бактерий в биопленке, накоплением ферментов, разлагающих антибиотики, в матриксе и трансформацией белка в клеточной стенке бактерий.

\ n \ n \ n

2.6. Обеспокоенность общественным здравоохранением

\ n

случаев отравления стафилококковыми продуктами питания (SFP), по данным Центров по контролю за заболеваниями (CDC) в США, достигло 240 000 [17], в то время как в Европе в 2014 г. было зарегистрировано 386 вспышек (Anonymous, 2015) .Вспышки характеризуются диареей и сильной рвотой вскоре после приема пищи SFP. Анализ показал участие энтеротоксинов и суперантигенов; некоторые из них были классическими энтеротоксинами, такими как SEA-SEE, а другие были идентифицированы недавно [18]. Необходимость идентификации S. aureus у домашних животных является беспристрастной, поскольку они обитают среди животных, которые действуют как резервуар для дальнейшей инфекции. Эта особенность дополняет их роль в скомпрометированном животноводческом хозяйстве [19].Распространение в общественное здравоохранение привело к появлению новых штаммов под названием LA-MRSA (устойчивый к метициллину Staphylococcus aureus , связанный с животноводством). Частую изоляцию LA-MRSA наблюдали фермеры, ветеринары и члены семей сельскохозяйственных рабочих [20]. S. aureus производит термостойкие энтеротоксины, которые являются одной из основных причин пищевых отравлений. На самом деле они имеют молекулярную массу 26900–29600 Да, что на сегодняшний день составляет около 20 различных видов выделенных, называемых стафилококковыми энтеротоксинами (SE) и стафилококковыми энтеротоксиноподобными белками (SEI).На различных молочных предприятиях распространенность энтеротоксинов растет. Эти энтеротоксины могут быть эффективны в молоке, даже если S. aureus нежизнеспособен [21]. В Турции 46,9% SE одного или нескольких типов были изолированы от субклинического мастита крупного рогатого скота [22]. В провинции Самсун в Турции 75% энтеротоксинов было получено из сырого молока [23], в то время как 68,4% штаммов, выделенных из сырого и пастеризованного молока крупного рогатого скота, были положительными по генам SE. Токсичные белки бактерий используют ткани хозяина для производства питательных веществ для своего роста.Предполагается, что стафилококковые энтеротоксины вызывают рвоту. Они связаны с медиаторами воспаления, такими как простагландин E ₂ , 5-гидроксиэйкозатетраеновая кислота и лейкотриен B4. Наблюдаемые очаги воспаления в желудочно-кишечном тракте появляются с верхней частью, поражающей желудок и кишечник. Наблюдаемый патогенез включает экссудат в двенадцатиперстной кишке.

\ n

Не только сырое, но и переработанное молоко также отражало 10,4% распространенности S. aureus , анализ выделил пять вирулентных генов, кодирующих лейкоцидин Патона-Валентайна, стафилококковый энтеротоксин, токсин-1 синдрома токсического шока, резистентность к метициллину, и эксфолиативный токсин.Более 60% штаммов представляли более одного вирулентного фактора. Штаммы демонстрируют различную реакцию на различные классы антибиотиков и даже на представителей каждого класса. Сыр из козьего молока может содержать этот патоген, поскольку некоторые исследования выявили 9,5% этого патогена, который был характерно энтеротоксигенным, коагулазо-положительным и устойчивым к метициллину. Исследования обнаружили шесть новых аллелей (glpf-500, pta-440, aroe-552, aroe-553, yqil-482 и yqil-496) и пять новых типов последовательностей (ST), то есть ST 3431, ST 3440, ST 3444, ST 3445 и ST 3461 в S.aureus из козьего молока. Выделение новых аллелей в Staph. Areus от коз считается нормальным, чем от крупного рогатого скота и людей, поскольку более целенаправленных исследований в случае коз мало.

\ n \ n \ n

2.7. Экономический ущерб

\ n

Экономический ущерб, являющийся результатом клинического и субклинического мастита, имеет право на снижение удоев, испорченное молоко, более низкое качество молока, нестабильный вкус, сокращение переработки молока, меньший срок хранения и снижение выхода молочных продуктов. Дополнительное экономическое бремя включает затраты на лечение, распространение болезней, выбраковку, плату за ветеринара и затраты на рабочую силу.Отмечено, что потери стафилококков в молочной системе Нидерландов составили 293 евро на одну корову с клиническим маститом. Клинические случаи молочного скота на корову были привязаны к расчетной сумме 277 евро в первые три месяца после отела и 168 евро до конца лактации. В условиях молочного животноводства в США расчетный экономический ущерб в долларах оценивается в 1,8 миллиарда долларов / 9 миллионов дойных коров в год, не считая остаточных антибиотиков в рационе человека, затрат, используемых для контроля питательного качества молока и деградации молока.

\ n \ n \ n

2,8. Чувствительность к лекарствам и модуляция лекарств

\ n \ n

2.8.1. Восприимчивость

\ n

Чувствительность S. aureus от мастита крупного рогатого скота варьируется в зависимости от увеличения или уменьшения устойчивости к антибиотикам. Где-то в исследованиях на козах было отмечено, что S. aureus является пан-чувствительным к антибиотикам, в то время как общая резистентность коровьего молока также регистрируется. В отчете ретроспективного исследования делается вывод о двукратном снижении на S.aureus — к пенициллину, тогда как к эритромицину — в шесть раз в течение 6 лет [24]. Это не соответствовало отчетам, включающим результаты исследований, проведенных в других географических регионах, где устойчивость к антибактериальным препаратам увеличилась вдвое по сравнению с тем, что сообщалось 12 лет назад [1, 25]. Однако исследования, проведенные позднее в 2001 г., отмечают повышение общей устойчивости штаммов S. aureus к антибиотикам. Разница в тенденциях объясняется эволюцией устойчивости к местной микрофлоре, находящейся в процессе выбора терапии, традициями фермеров, лекарственным регулированием страны, местными протоколами антибактериальной терапии и количеством обработанных образцов в исследовании.Бактерии используют горизонтальный перенос генов от устойчивых штаммов к чувствительным [26]. Преобладающие гены устойчивости, отмеченные в S. aureus , кодируют оксациллин (mecA), эритромицин (ermA, ermB, erm C), гентамицин (aac-6 / aph-2) и тетрациклин (tetK и tetM), пенициллин (blaZ). ) и ванкомицин [27].

\ n

Антибиотики группы пенициллина и цефалоспоринов в целом устойчивы к Staphylococcus aureus из коровьего и верблюжьего молока. Однако восприимчивость варьируется от вида к виду, от региона к региону, штаммов Staphylococcus aureus, и частого воздействия антибиотиков.Появляются штаммы, устойчивые к цефокситину и ванкомицину. Однако в настоящее время линезолид эффективен против штаммов Staphylococcus aureus коровьего молока. Испытания антибиотиков показали эффективность ципрофлоксацина, гентамицина, триметоприм-сульфаметоксазола, хлорамфеникола и тетрациклина против золотистого стафилококка , происходящего от различных молочных животных. Более высокая чувствительность S. aureus может быть связана с нечастым использованием антибиотиков в этой области.Чувствительность панциря выше, чем у всех молочных животных, поскольку препараты, которые обычно сталкиваются с резистентностью S. aureus других молочных животных, весьма эффективны в случае овец S. aureus . Устойчивость к пенициллину широко отмечается, в то время как ограниченная устойчивость была обнаружена при тестировании против S. aureus овечьего молока. Текущий статус овечьего штамма S. aureus был 100% восприимчивым на фермах Греции, что, таким образом, отражает отсутствие устойчивых к метициллину штаммов.Эта особенность объясняется очень низким уровнем использования антибиотиков на овцеводческих фермах в Греции. Традиционное сельское хозяйство в основном основано на органическом сельском хозяйстве, поэтому они защищены от инфекции MRSA, которая, в свою очередь, привлекает внимание к овечьему молоку как к безопасной пище.

\ n \ n \ n

2.8.2. Комбинации лекарств

\ n

Отмечена повышенная устойчивость ко всем видам противомикробных препаратов, и введение каких-либо новых лекарств не привело к использованию новых комбинаций лекарств. Некоторые препараты из группы аминогликозидов хотя и эффективны, но, как сообщается, связаны с ототоксическим и нефротоксическим действием из-за их постоянного использования.Комбинация лекарств требует, чтобы антибиотики нацелены на разные участки. Группа пенициллина в сочетании с аминогликозидом была признана сильнодействующей, эффективной и безопасной. Комбинация цефалоспорина (цефароксил) и пенициллина (амоксициллин) показала синергетический эффект против 80% устойчивых изолятов. В рамках класса лекарств, например, бета-лактам с комбинациями бета-лактамов, также были представлены эффективные результаты [28], и испытания in vivo также подтвердили их эффективность. Аминогликозиды являются сильнодействующими лекарствами, которые создают трещины во внешней части стенки бактериальной клетки за счет связывания с 30S субъединицей рибосомы, что приводит к неправильному считыванию мРНК.В некоторых исследованиях сообщалось о синергетическом действии пенициллина в сочетании с хлорамфениколом, а также сообщалось об антагонистических результатах. Антагонизм, о котором сообщалось в некоторых исследованиях, утверждает, что пенициллин активируется, а хлорамфеникол — дезактивирует муреин-гидролазу, которая по своей функции отвечает за лизис бактерий. Общая концепция описывает бактерицидное и бактериостатическое действие как антагонистическое, что теперь верно и в других исследованиях [29]. Эта тенденция может быть связана с диверсификацией генетической изменчивости современных патогенов.

\ n \ n \ n

2.8.3. Эффекты производных растений / модуляция лекарств

\ n

У растений есть различные антимикробные пептиды, такие как c-тионин и тионин Thi 2.1, протестированные против внутриклеточного S. aureus мастита крупного рогатого скота. Эти пептиды в дополнение к их антибактериальной активности действуют как иммуномодуляторы. Экстракты других растений, такие как этанольный экстракт прополиса (EEP), смолистая смесь, полученная пчелами из растений, как сообщается, обладают высокой биологической активностью против S.aureus мастит. К этому прилагается ограничение с точки зрения более низкой минимальной ингибирующей концентрации (МИК) при тестировании в молочной среде. Однако авторы предположили, что он действует против мастита in vivo. Монолаурин, производное кокосового масла, состоящее из моноэфира глицерина и лауриновой кислоты, также проявил антибактериальную активность против S. aureus . Экстракты Tabernaemontana divaricata (L.) показали значительную эффективность в отношении группы микроорганизмов, вызывающих мастит крупного рогатого скота, которые требуют дальнейших исследований [30].Клинический мастит крупного рогатого скота S. aureus показал чувствительность к неочищенным экстрактам лекарственных растений Combertum molle и Commicarpus pedenculosus [7].

\ n

Развитие резистентности требует некоторых альтернативных способов борьбы с S. aureus . Устойчивость бактерий возникает из-за нарушения связывания в результате генетических мутаций, продукции ферментов, например, гидролиза этой нарушенной амидной связи и экструзии оттока, которая ответственна за снижение концентрации лекарственного средства внутри клетки [31, 32].Компоненты растительных экстрактов модулируют механизмы устойчивости бактерий до такой степени, что они становятся чувствительными. Сообщалось о различных испытаниях in vitro с многообещающими результатами против S. aureus с множественной лекарственной устойчивостью. Некоторые из растений, произрастающих в естественных условиях в зонах разведения животных, обладают антимикробными свойствами. Некоторые из 500 видов растений описаны в документации с доказанным антибактериальным действием. В качестве альтернативного источника бактерицидного действия еще предстоит изучить более широкие возможности. Calotropis procra и Eucalyptus globolus доказали свою активность против S. aureus . Эти растения устойчивы к засолению и засухе, и в больших количествах их выращивают в отдаленных районах, где разводят животных. Экстракты растений в синергии с антибактериальными препаратами нацелены на различные участки S. aureus, , таким образом изменяя фенотипическую устойчивость к чувствительности [33]. Антибактериальная активность приписывается флавоноидам, алкалоидам, сапонинам, гликозидам, фенолам и дубильным веществам.Активный ингредиент вызывает образование пористой клеточной стенки, высвобождая таким образом содержимое цитоплазмы, ингибируя цепь переноса электронов и препятствуя ингибированию сфинголипидов [34]. Активность может варьироваться в зависимости от различных растворителей для экстракции, стадии выращивания растения, географического района, метода экстракции и конкретного способа действия [32].

\ n \ n \ n

2.8.4. Наночастицы

\ n

В последние несколько лет были представлены наночастицы (НЧ), которые стали экономически эффективным потенциальным антибактериальным средством против различных патогенов.Наночастицы (НЧ) — это маленькие частицы размером 1–100 мм, которые действуют за счет разрушения клеточной мембраны, одновременной активации нескольких механизмов и действия в качестве носителей антибиотиков. Они разрушают физические барьеры, сделанные из биопленок, чтобы добраться до бактериальных клеток, встроенных внутри, куда антибиотики не могут добраться в одиночку. Окислительный стресс, неокислительный стресс и механизмы высвобождения ионов металлов используются Ag, Mg, NO, ZnO, CuO, Cu ₂ O, Fe ₂ O _3, FeO и многими другими для уничтожения бактерий. .S. aureus с множественной лекарственной устойчивостью обнаружил зону ингибирования 177 мм при 80 мкл наночастиц серебра. Наночастицы оксида азота не только эффективны против S. aureus , но также играют роль в профилактике мастита у молочных животных. Они сами по себе и в сочетании с антибиотическим препаратом оцениваются in vitro, нацеленные на S. aureus , а также на заживление ран. Наночастицы, которые работают как доставка лекарств, включают липосомные НЧ, неорганические НЧ, НЧ на основе полимеров, НЧ на основе терпеноидов и НЧ полимерных мицелл.Эти наночастицы покрывают антибиотики и эффективно достигают того места, где механизм действия лекарства не работает. Инкапсуляция антибиотиков с помощью наночастиц заставляет лекарства проявлять свой потенциал, который в одиночку не может передать их действие. Тилмикозин-твердый липид и амоксициллин иногда не могут обеспечить свои эффекты в одиночку, но инкапсуляция наночастицами дополняет их активность при полном расцвете. Наночастицы с гидрогелевым покрытием, например, с ленточным гидрогелевым покрытием, оказались лучше по антибактериальной активности, вязкости и высвобождению лекарственного средства.Несколько исследований доказали их эффективность с точки зрения заживления ран, нормального внешнего вида кожи и роста волос. Эти частицы помогают производить перекись водорода и активные формы кислорода в месте раны, что помогает вылечить инфекцию / мастит. Частицы небольшого размера вызывают гибель клеток и снижение устойчивости бактерий.

\ n \ n \ n

2.8.5. Другие альтернативы

\ n

Фаги являются альтернативными источниками, где никакие другие терапевтические действия против патогенов неэффективны. Виды стафилококков можно эффективно лизировать фагом К.Более того, фаг К можно использовать с профилактической целью против инфекций внутри груди, подтвержденных S. aureus . Некоторые исследователи считают, что фаг К является карманной ракетой против мастита. С другой стороны, фаги уязвимы для иммунной системы молочных желез и сывороточного белка молока, что делает фаги неэффективными [35]. Необходимы исследования, чтобы исключить фармакокинетику и фармакодинамику в дополнение к проблемам их введения в ткани. Другой поливалентный вирулентный фаг, MSA6, выделен от мастита коров, который используется в качестве потенциального универсального антистафилококкового агента [36].Этот конкретный фаг применим против более широкого круга хозяев, обладает превосходным литическим действием и, что важно, термостабилен. Пептидаза, полученная из бактериофага, CHAP _K , мастита коров, эффективна как с профилактической, так и с терапевтической точки зрения. Штаммы S. aureus , продуцирующие биопленку, могут быть эффективно предотвращены от образования биопленок и разрушения уже установленных биопленок. Стресс может повлиять на активность бактериофага. Некоторые бактериофаги, включая Sabp-P1, Sabp-P2 и Sabp-P3, устойчивы к стрессу окружающей среды [13].Помимо ограничений, устойчивые к стрессу фаги лучше всего подходят для футуристического лечения стафилококкового мастита.

\ n

Цитокины — это белки, играющие определяющую роль в передаче сигналов в клетке. Некоторые рекомбинантные цитокины бычьего происхождения, такие как IL-2, IFn-c и TNF-alpha, стимулируют оба вида иммунитета (врожденный и приобретенный) в молочных железах. Однако их действие в сочетании с антибактериальной терапией является аддитивным против мастита [37]. Белок бета-лактоглобулин обычно присутствует в сыворотке млекопитающих, в то время как лактоферрин присутствует в молоке, бронхиальной слизи, слюне и слезах.Обе молекулы доказали свою активность против мастита на основе S. aureus-. Эти белки дополняют более высокий спектр антимикробной активности, применяемые отдельно, в сочетании друг с другом или в сочетании с антибиотиками. Существуют и другие источники животного происхождения, такие как морские губки, которые проявляют антибактериальную активность против более широкого спектра видов стафилококков при использовании в экстрактах. Эти губки включают виды Cinachyrella, Haliclona и Petromica, которые были эффективными противомикробными средствами против 61% протестированных микроорганизмов [38].

\ n \ n \ n

2.8.6. Бактерии с пробиотиками

\ n

Механизмы персистенции S. aureus во внутримолочной среде еще предстоит изучить, но уклонение от иммунной системы хозяина и прикрепление к эпителиальным клеткам молочных желез являются одними из известных в этом отношении [39 ]. Некоторые бактерии, такие как Weisella, путают и . Сообщается, что Lactobacillus casei вырабатывает определенные соединения, которые активны против интернализованной персистенции S. aureus .Молочнокислые бактерии обладают способностью прикрепляться к эпителиальным клеткам, таким образом сопротивляясь патогенности S. aureus за счет своей конкурентной адгезионной способности, продукции H ₂ O ₂ , конкуренции в использовании пищи и иммунной модуляции хозяина [40]. Сообщается, что постоянное использование штаммов Weissella и их метаболитов является эффективной альтернативой антибиотикам для контроля и профилактики мастита [41].

\ n \ n \ n \ n

2.9. Стратегии профилактики молочного животноводства

S.aureus \ n

Контроль S. aureus в молочных продуктах необходим коммерческим и прибыльным мелким коровам для улучшения качества молока для потребителей, а также в молочной промышленности. Несмотря на значительный прогресс, достигнутый за последние 30 лет, S. aureus по-прежнему остается серьезным заболеванием для молочных животных во всем мире. Отсутствие эффективности текущих стратегий (в основном основанных на погружении сосков антисептиком после доения и антибактериальной терапии в сухой период) для подавления S.aureus способствовал созданию вакцины против S. aureus , которая является разумным / альтернативным подходом для борьбы с этими микроорганизмами, связанными с маститом. Исследования показали более высокую распространенность в сочетании с повышенной устойчивостью к антибиотикам у изолятов S. aureus изолятов верблюжьего мастита [42, 43]. Появление расхождений в идентификации устойчивости также привело к увеличению устойчивости с точки зрения неоправданного использования антибиотиков для борьбы с S.aureus [44, 45]. Устойчивость к антибиотикам и феномен фагоцитоза приводит к неэффективности лечения против S. aureus, , поэтому разработка вакцины против мастита является неотложной задачей для предотвращения новых инфекций от S. aureus для коммерческих молочных ферм. Вакцины против Staphylococcus aureus дают разные результаты в зависимости от типа вакцины, используемого адъюванта и некоторых других факторов.

\ n \ n

2.9.1. Вакцинальные мишени в

S. aureus \ n

Несколько исследований показали, что задействованы различные растворимые и цитотоксические факторы, которые увеличивают S.aureus за счет использования различных патогенных факторов, например псевдокапсул, токсинов, факторов слипания, протеина А и связывающего фибронектин протеина. Было высказано предположение, что эти патогенные факторы следует учитывать при приготовлении вакцины против мастита, которая будет использоваться в полевых условиях. Кроме того, недавно было высказано предположение, что вакцина S. aureus может быть очень эффективной, если она будет многокомпонентной, интегрированной с поверхностными белками, токсинами и поверхностными полисахаридами.Недавно было высказано предположение, что более 99% бактерий в мире существуют как производители биопленок. По оценкам экспертов центров по контролю и профилактике заболеваний США, 65% бактериальных инфекций человека вовлечены в образование биопленок [46]. Термин «биопленка» для бактерий относится к структурированной популяции бактериальных клеток, заключенных в полимерную матрицу собственного производства и прикрепленных к инертной или живой поверхности, которая образует защищенную структуру роста, позволяющую выживать в суровых условиях окружающей среды.Микроорганизмы, образующие биопленку, создают особый механизм для прикрепления к поверхности, чтобы сформировать микробное сообщество, создавая трехмерную структуру зрелых биопленок [47]. Их скорость роста, состав и устойчивость к антибиоцидам, антибиотикам и антителам различны, потому что они активируют и / или подавляют примерно 40% генов. Это затрудняет устранение инфекций, вызванных такими микроорганизмами, терапевтическими дозами противомикробных препаратов. Лучшее понимание механизмов, с помощью которых они могут развиваться и выживать в неподвижных средах, может помочь в разработке стратегий борьбы с S.aureus [48].

\ n \ n \ n

2.9.2. Вакцины в действии

\ n

Появляется все больше свидетельств того, что S. aureus может образовывать биопленки в вымени дойных коров, пораженных маститом. Биопленки не только влияют на иммунную систему хозяина, но и предотвращают действие антибактериальных препаратов, что приводит к хронической инфекции. S. aureus вызывает хронические инфекции, что в большинстве случаев приводит к значительным финансовым потерям [49]. Биопленка является важным фактором вирулентности S.aur e us [50]. Было продемонстрировано, что активная иммунизация экзополисахаридами, экстрагированными прочно прикрепленными изолятами S. aureus , вызывает защитный иммунитет против мастита [51]. Использование антибиотиков для лечения и профилактики мастита Staphylococcus aureus побудило исследователей мастита к профилактике инфекций вымени с помощью вакцины из-за высокой стоимости, низкой эффективности лечения, высокой устойчивости к антибиотикам и опасений потребителей по поводу остатков антибиотиков в молоке и мясе [52].Были изучены различные вакцины против мастита, включая инактивированные цельные клетки, живые вакцины, компоненты клеточной стенки, бактериновый токсоид и экстракты антигенов с адъювантами или без них. Выводы некоторых исследователей обобщены позже. Израильские рабочие [53] контролировали большое количество полевых испытаний коммерчески доступной вакцины (MSTIVAC I; патент № PTC / IL 98/00627) против мастита S. aureus . Авторы наблюдали снижение на 42–54% первой и второй лактации у SCC и увеличение удоя на 0,5 кг / день / животное по сравнению с невакцинированными (контрольными) коровами.В вакцинированной группе было обнаружено только 3 из 228 животных (1,3%), тогда как в контрольной группе было обнаружено 6 из 224 (2,7%). Статистический анализ не проводился, поскольку эти числа были низкими для статистического анализа между вакцинированными животными и невакцинированными (контрольными) животными. Позже результаты Атара [54] на кафедре клинической медицины и хирургии Сельскохозяйственного университета Фейсалабада (UAF), Пакистан, подтвердили, что местная поливалентная вакцина против мастита (включающая убитые S.aureus , S. agalactiae и различные E. coli ) обеспечивали защиту от новых инфекций, а также устраняли существующие инфекции у молочных буйволов. Аналогичным образом, другие авторы также наблюдали такие результаты с местными вакцинами S. aureus (простой бактерин, бактерин с масляным адъювантом, живая аттенуированная вакцина и декстрансульфат-адъювантный бактерин) [47]. Brouillette et al. [55] провели исследование ДНК-иммунизации против фактора агрегации Staphylococcus aureus A (CIF-A).Было обнаружено, что предварительная инкубация S. aureus с сывороткой, полученной от вакцинированных мышей, снижает способность патогенов связывать до 92% фибриногена. Эти предварительно инкубированные бактерии фагоцитировались повышенными макрофагами in vitro, тогда как в испытаниях in vivo они были менее токсичными при экспериментальной оценке на модели мастита на мышах. Однако ДНК-иммунизированные мыши не могли противостоять проблемам, вызванным внутрибрюшинным путем. Результаты показали, что ДНК-иммунизация может быть использована как новый метод предотвращения S.aureus инфекция.

\ n \ n \ n

2.9.3. Текущий сценарий вакцин

\ n

В эту новую эру мастит стал одним из основных заболеваний дойных коров, несмотря на огромные успехи в улучшении общего здоровья вымени. Эпидемиологические исследования показали множество вариаций в показателях биологического излечения (от 0 до 80%) после лечения антибиотиками, но они не показывают значительной потери активности антибиотиков основных классов. Повторные инфекции часто приводят к образованию биопленок у бактерий.В случае микроорганизмов образование биопленок вызывается последующими физиологическими и значительными генетическими изменениями, приводящими к потере чувствительности к антибиотикам, что приводит к развитию устойчивости к антибиотикам различных классов. Ахмад и Мухаммад [56] провели исследование по приготовлению и оценке S. aureus и S. agalactiae адъювантной вакцины против мастита на основе гидроксида алюминия на кроликах. Биологическая характеристика обеих бактерий была проведена на 95 образцах молока, собранных в асептических условиях у маститных буйволов.Проведено тестирование на иммуногенность, патогенность и чувствительность антибиотиков. Двухвалентная адъювантная вакцина с гидроксидом алюминия была разработана в лаборатории исследования мастита при отделении клинической медицины и хирургии Сельскохозяйственного университета Файсалабад, Пакистан. Вакцина оказалась стабильной, стерильной и безопасной для использования. Кроликов использовали для оценки качества вакцины и ответа антител. Для этого кролики были разделены на две группы (GA и GB) по 10 кроликов в каждой.Кроликам в группе GA вводили вакцину против мастита S. aureus и S. agalactiae с гидроксидом алюминия и адъювантом, в то время как кролики во второй группе (GB) оставались невакцинированными. Для проверки титров антител у кроликов группы GA проводили непрямой анализ ингибирования гемагглютинации (IHA). Кролики GA имели самый высокий титр сывороточных антител против S. aureus (GMT), который составлял 78,8 на 45-й день, немного снизившись до 73,3 на 60-й день после вакцинации. Титр ИГА постепенно увеличивался до S.agalactiae на 45 и 60 дни после инокуляции вакцины. Кумулятивный средний титр антител (CMT) для вакцины S. aureus составлял 44,94, а CMT для вакцины S. agalactiae был 46,56 по сравнению с контрольной группой. CMT был значительно выше в вакцинированной группе на 45 и 60 дни после вакцинации, чем в контрольной группе. Исследование показало, что вакцина двухвалентного гидроксида алюминия с адъювантом была иммуногенной для кроликов. Для оценки S.aureus , Миддлтон [57] использовал модель лактирующей коровы для изучения способности этой вакцины предотвращать внутримолочные инфекции (IMI) стафилококков ( S. aureus и коагулазонегативных стафилококков (CNS)). Параметрами оценки были влияние вакцинации на количество соматических клеток (SCC) и влияние вакцины на изотип антител в молоке. Для этого были отобраны 90 лактирующих коров голштино-фризской породы и разделены на две группы. Одна группа (n-44) служила вакцинированной, а вторая группа (n-46) была контрольной группой.Первая группа получила 5 мл бактериновой вакцины, 2 прививки с интервалом 14 дней. Образцы молока собирали из отдельных помещений для бактериальной культуры перед каждой инъекцией, а затем собирали ежемесячно в течение 6 месяцев. Для определения IgG1, IgG2, IgM, IgA и SCC, составные образцы молока были собраны в дни 0, 14, 28, 49 и 70. Авторы не наблюдали никаких новых IMI ни в одной группе, и это существенно не отличалось между группы (p> 0,05) инфекции четверти молочной железы. Сообщалось о вакцине в стадах с распространенностью коагулазонегативных стафилококков (30%) и S.aureus (3%) при внутримолочной инфекции плохо реагировал на новые инфекции Staphylococcal . В другом исследовании оценивалась многокомпонентная вакцина для искоренения стафилококковых инфекций биопленки [58]. В предыдущих исследованиях было обнаружено, что выбранные антигены, включая глюкозаминидазу (гипотетический консервативный белок), липопротеин-транспортер ABC и консервативные липопротеины, поддерживают и повышают экспрессию в биопленках как in vitro, так и in vivo. В отношении этих антигенов антитело впервые было использовано в микроскопическом исследовании для определения его экспрессии в биопленке in vitro.В биопленках каждый из четырех антигенов проявляет гетерологичную продукцию в разных местах внутри сложного сообщества биопленок. Четыре антигена были доставлены одновременно в виде четырехвалентной вакцины. Поскольку антигены вакцины были специфичны для биопленок, лечение антибиотиками также использовалось для удаления остаточных и неприлипающих планктонных клеток. Результаты показали, что клинические и рентгенологические симптомы уменьшились до 67 и 82% соответственно, когда вакцину вводили ванкомицином, обработанным на биопленочных моделях кроликов с хроническим остеомиелитом.Его сравнивали с животными, инфицированными или не получавшими ванкомицин. Напротив, только вакцинация привела к умеренному и незначительному снижению.

\ n

Недавно Раза [47] оценил роль бактеринового анатоксина, полученного из сильного продуцирующего биопленку S. aureus , в эффективной иммунизации кроликов. Прочная биопленка S. aureus , выбранная из 64 изолятов стафилококков, была использована для получения бактеринового токсоида, а гель гидроксида алюминия был добавлен в качестве адъюванта.Вакцину оценивали на кроликах с помощью анализа защиты от заражения и гуморального иммунного ответа. Уровни смертности в контрольной и вакцинированной группах составляли 80% и 10% на 7 день после заражения и 100 и 20% на 15 день после заражения, соответственно. Титр сывороточных антител (GMT) был значительно выше (294,0) в вакцинированной группе по сравнению с кроликами контрольной группы (2,63) на 45-й день. Результаты показали повышенную продукцию антител в вакцинированной группе, которая была способна предотвратить появление нового S .aureus у кроликов по сравнению с контрольной группой. На основе результатов настоящего исследования было проведено краткосрочное клиническое испытание на дойных коровах и буйволах, которое также показало эффективность вакцины, о чем свидетельствует значительная разница в распространенности и заболеваемости маститом, высокий уровень вариативности микробиологического исследования. молока, снижение внутримолочных инфекций и количества соматических клеток между вакцинированными и контрольными группами дойных коров и буйволов.

\ n \ n \ n \ n

3. Выводы

\ n

Золотистый стафилококк молочного животного происхождения привлек более серьезное внимание, чем человеческое происхождение, с точки зрения патогенности, вариабельности штаммов, реакции на антибиотики, обеспокоенности общественным здоровьем. , и экономические потери для молочной промышленности. Помимо крупного рогатого скота, за последние несколько лет резко возросла распространенность верблюдов и коз. Было обнаружено, что S. aureus заразны по своей природе из-за увеличения диапазона факторов риска.Поскольку наблюдается рост устойчивости к антибиотикам против S. aureus , надежда на применение неантибиотиков, таких как наночастицы, производные растений, средства на основе бактерий и фагов, существует. Вакцины как превентивная стратегия были внедрены на местном и коммерческом уровнях. Исследование необходимо для комплексного подхода как на профилактическом, так и на терапевтическом уровнях.

\ n

Конфликт интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов

\ n

1.Введение

\ n

За последние шесть десятилетий инженеры-нефтяники осознали важность использования EOS для моделирования PVT в дополнение к следующему [1]:

1. Прогнозирование физических свойств мазута в лабораториях очень дорого.

2. Трудности с получением репрезентативной пробы из-за характера коллектора или эксплуатационных проблем.

3. Недостаточный объем пробы для проведения полного анализа.

4. Ошибка лабораторных анализов.

5. Образцы нерепрезентативны (не однофазный образец, загрязнение OBM и т. Д.).

6. Проверка качества лабораторного отчета.

7. Оценка запасов углеводородов.

\ n \ n \ n

1.1 Классификация уравнения состояния

\ n

Существуют различные типы EOS, которые делятся на три категории:

\ n \ n

1.1.1 Первый класс EOS

\ n

Эти уравнения в основном кубические уравнения состояния. Кубические уравнения состояния, такие как уравнения Ван-дер-Ваальса [2], Редлиха и Квонга [3], Соаве-Редлиха-Квонга [4] и Пенга-Робинсона [5], дают разумные результаты для термодинамического поведения реальных жидкостей.

\ n \ n \ n

1.1.2 Второй класс EOS

\ n

Эти EOS не имеют кубической формы. Они обеспечивают точные результаты как для паровой, так и для жидкой фаз. Бенедикт и др. Уравнение [6] является хорошим примером уравнения этого класса.

\ n \ n \ n

1.1.3 Третий класс EOS

\ n

Это неаналитические EOS, которые сильно ограничены для некоторых конкретных жидкостей [7]. Несмотря на то, что они ограничены, они способны точно выражать термодинамические свойства реальной жидкости.

\ n

Среди всех этих EOS, EOS первого класса более полезен, потому что он обеспечивает аналитическое решение, чем более сложный и сложный некубический второй тип и неаналитический третий тип, которые требуют длительных итерационных вычислений.В общем, общие характеристики прогнозирования свойств жидкости несколько лучше при использовании уравнения Соаве-Редлиха-Квонга (SRK), чем при использовании уравнения Редлиха-Квонга (РК) и Ван-дер-Ваальса [8].

\ n \ n \ n \ n

2. История разработки уравнения состояния

\ n

В нефтяной промышленности было представлено несколько форм EOS для оценки свойств углеводородных пластовых флюидов и попыток лучшего представления зависимости PVT для жидкостей [9].

\ n

В 1662 году Роберт Бойль (закон Бойля) обнаружил, что при постоянной температуре существует обратная зависимость между объемом газа и его давлением (P ∝ V ⁻¹ ).В 1780 году Жак Шарль (закон Шарля) показал, что объем газа пропорционален абсолютной температуре при постоянном давлении (V T). В 1834 году Клапейрон объединил эти два результата в закон идеального газа, PV = RT [10], предположив, что молекулы находятся очень далеко и не имеют сил притяжения или отталкивания между собой и упругих столкновений между этими молекулами. Это уравнение известно как закон идеального газа и / или общий газовый закон. Математически это выражается как [11].

\ n

\ n \ nP \ n \ nV \ n = \ nn \ n \ nR \ n \ nT \ n \ nE1

\ n

где P: абсолютное давление, psia; V: объем, фут ³ ; Т: абсолютная температура, ° Р; R: универсальная газовая постоянная (10.73159 футов ³ фунтов на квадратный дюйм ° R ^-1 фунт-моль ^-1 ; n: количество молей газа, фунт-моль.

\ n

Для газов при низком давлении закон идеального газа — удобный удовлетворительный инструмент. Применение закона идеального газа при более высоких давлениях может привести к ошибкам до 500% по сравнению с 2–3% при атмосферном давлении. Реальные газы ведут себя иначе, чем идеальные газы, причина этого отклонения заключается в том, что закон идеального газа был получен в предположении, что объем молекул очень мал и между ними не существует молекулярного притяжения или отталкивания, а это не так.Чтобы написать уравнение состояния для реального газа, в уравнение идеального газа необходимо ввести поправочный коэффициент [12]:

\ n

\ n \ nP \ n \ nV \ n = \ nZn \ n \ nR \ n \ nT \ n \ nE2

\ n

где Z: поправочный коэффициент, известный как коэффициент сжимаемости.

\ n

Уравнение имеет разные названия, например, уравнение сжимаемости и / или уравнение реального газа [13]. Обзор последних достижений в области эмпирического кубического уравнения состояния приведен ниже [11]. Ван-дер-Ваальс [2] — одна из самых ранних попыток представить поведение реальных газов уравнением, в котором были сделаны два предположения для EOS идеального газа:

1. Объем молекулы газа очень мал по сравнению с объемом контейнера.

2. Нет сил притяжения или отталкивания между молекулами газа или стенками контейнера.

\ n \ n

Ван дер Ваальс попытался устранить эти допущения при разработке эмпирического уравнения состояния для реальных газов.

\ n

\ n Устранение первого предположения : молекулы газа занимают значительную часть объема при более высоких давлениях, и объем молекул (b) вычитается из фактического молярного объема (V), чтобы получить следующее выражение :

\ n

\ n \ np \ n \ n = \ n \ nRT \ n \ nv \ n− \ nb \ n \ n \ n \ nE3

\ n

\ n Устранение второго предположения : он добавил корректирующую член (а), обозначаемый (a / V ² ), чтобы учесть силы притяжения между молекулами.

\ n

Ван дер Ваальс ввел следующее уравнение (уравнение (4)):

\ n

\ n \ n \ n \ np \ n + \ n \ na \ n \ n \ nV \ nM \ n \ n2 \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ nV \ nM \ n \ n- \ nb \ n \ n \ n \ n = \ nRT \ n \ nE4

\ n

где: параметр притяжения ; b: параметр отталкивания.

\ n

Символ «а» считается мерой межмолекулярных сил притяжения между молекулами. «B» известен как совместный объем и считается отражающим объем молекул [2]. Значения «a» и «b» могут быть получены из критических свойств жидкости [14], где давление отталкивания p _{отталкивание} представлено термином RT / (V _m — b), и давление притяжения p _{аттракцион} описывается a / V _m \ n ² .Уравнение состояния Ван-дер-Ваальса, несмотря на свою простоту, при этом дает правильное описание и качественное описание поведения PVT-веществ в жидкой и газовой фазах. Тем не менее, он недостаточно точен, чтобы подходить для целей проектирования. Подход с использованием уравнения состояния для расчета физических свойств и фазового равновесия оказался мощным инструментом, и много энергии было потрачено на разработку новых и точных уравнений состояния [11]. Другие исследователи более 100 лет предпринимали попытки улучшить уравнение состояния Ван-дер-Ваальса.Обычно предлагалось изменить член молекулярного притяжения (a / V _m M ² ). Клаузиус в 1880 году [15] предположил, что член молекулярного притяжения обратно пропорционален температуре [16]:

\ n

\ n \ n \ n \ np \ n + \ n \ na \ n \ nT \ n \ n \ n \ n \ nV \ nM \ n \ n + \ nc \ n \ n \ n2 \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ nV \ nM \ n \ n — \ nb \ n \ n \ n = \ nRT \ n \ nE5

\ n

Добавление четвертой константы (c) позволило улучшить согласование с данными. Однако математические манипуляции, необходимые для термодинамических расчетов, были более трудными.Поэтому Бертло в 1899 году [17] удалил константу (c), в результате получилось следующее уравнение:

\ n

\ n \ n \ n \ np \ n + \ n \ na \ n \ n \ nTV \ nM \ n \ n2 \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ nV \ nM \ n \ n− \ nb \ n \ n \ n \ n = \ nRT \ n \ nE6

\ n

Дитеричи в 1899 г. [ 18] по-другому трактовал температурную зависимость члена молекулярного притяжения [6]:

\ n

\ n \ n \ n \ nP \ n \ nEXP \ n \ n \ na \ n \ n \ nV \ nM \ n \ nRT \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ nV \ nM \ n \ n- \ nb \ n \ n \ n \ n = \ nRT \ n \ nE7

\ n

Лоренц в 1881 году [19] обратился к термину молекулярного объема [20]:

\ n

\ n \ n \ n \ np \ n + \ n \ na \ n \ nV \ n \ nM \ n2 \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ nV \ nM \ n \ n− \ n \ n \ nbV \ nM \ n \ n \ n \ nV \ nM \ n \ n + \ nb \ n \ n \ n \ n \ n = \ nRT \ n.\ n \ nE8

\ n

Воль в 1927 году [21] рассмотрел влияние температуры на член молекулярного притяжения:

\ n

\ n \ n \ n \ nP \ n + \ n \ na \ n \ n \ nTV \ nM \ n \ n \ n \ n \ nV \ nM \ n \ n- \ nb \ n \ n \ n \ n \ n- \ n \ nc \ n \ n \ nT \ n2 \ n \ n \ n \ nV \ nM \ n \ n3 \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ nVM \ n− \ nb \ n \ n \ n = \ nRT \ n \ nE9

\ n

Константы a, b , и c в приведенных выше уравнениях имеют разные значения для разных веществ. В нескольких исследованиях предложено УРС вириального типа. Каммерлинг-Оннес в 1901 г. [22] предложил следующее вириальное уравнение состояния [23]:

\ n

\ n \ n \ nPV \ nM \ n \ n = \ nRT \ n \ n \ n1 \ n + \ n \ nB \ n \ nV \ nM \ n \ n \ n + \ n \ nC \ n \ n \ nV \ nM \ n \ n2 \ n \ n \ n + \ n.\ n. \ n… \ n \ n \ n \ nE10

\ n

где B и C не являются константами, которые являются функциями температуры и называются вторым и третьим вириальными коэффициентами. Битти и Бриджмен в 1927 году опубликовали уравнение с пятью константами, которое дает удовлетворительное представление об объемных свойствах, за исключением критической области [24]:

\ n

\ n \ nP \ n = \ n \ nRT \ n \ nV \ n \ nM \ n2 \ n \ n \ n \ n \ n \ n1 \ n — \ n \ nc \ n \ n \ nV \ nM \ n \ n \ nT \ n3 \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ nV \ nM \ n \ n + \ n \ nB \ no \ n \ n \ n \ n1 \ n — \ n \ nb \ n \ nV \ nM \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n- \ n \ n \ nA \ n \ no \ n \ n \ n1 \ n- \ na \ n / \ n \ nV \ nM \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ nV \ nM \ n \ n \ n \ nE11

\ n

Benedict et al.[6] предложил многопараметрическое уравнение состояния, известное как уравнение Бенедикта-Уэбба-Рубина (BWR) [6]:

\ n

\ n \ nP \ n = \ n \ nRT \ n \ nV \ nM \ n \ n \ n + \ n \ n \ n \ nB \ no \ n \ nRT \ n- \ n \ nA \ no \ n \ n- \ n \ nC \ no \ n \ n / \ n \ nT \ n2 \ n \ n \ n \ n \ nV \ nM \ n \ n2 \ n \ n \ n + \ n \ n \ nbRT \ n− \ na \ n \ n \ n \ nV \ nM \ n \ n3 \ n \ n \ n + \ n \ naα \ n \ n \ nV \ nM \ n \ n6 \ n \ n \ n + \ n \ nc \ n \ n \ nT \ n2 \ n \ n \ n \ nV \ nM \ n \ n3 \ n \ n \ n \ n \ n \ n1 \ n + \ n \ nγ \ n \ n \ nV \ nM \ n \ n2 \ n \ n \ n \ n \ nEXP \ n \ n \ n \ n — \ nγ \ n \ n \ n \ nV \ nM \ n \ n2 \ n \ n \ n \ n \ nE12

\ n

Это уравнение можно рассматривать как модификацию уравнения состояния Битти-Бриджмена, где A ₀ , B ₀ , C ₀ , a, b, c, α и γ — восемь настраиваемых параметров.Уравнение BWR могло обрабатывать критические компоненты и было способно работать в критической области. Однако уравнение BWR страдает некоторыми недостатками [25]. Возможно, наиболее важной моделью для модификации уравнения состояния Ван-дер-Ваальса является модель Редлиха-Квонга (RK) (1949), которая демонстрируется корректировкой члена притяжения Ван-дер-Ваальса (a / V _m \ n ² ) и явно включает температуру системы. Они могут улучшить прогноз физических и объемных свойств паровой фазы.В RK EOS член давления притяжения был заменен обобщенным членом, зависящим от температуры (уравнение (13)) [3]:

\ n

\ n \ nρ \ n = \ n \ nRT \ n \ nV \ n− \ nb \ n \ n \ n — \ n \ nα \ n \ nV \ n \ n \ nV \ n + \ nb \ n \ n \ n \ n \ nT \ n \ n \ n \ n \ n \ nE13

\ n

\ n Для чистых веществ параметры уравнения a и b обычно выражаются как.

\ n

\ n \ nb \ n = \ nΩb \ n \ nR \ n \ n \ nT \ nc \ n \ n / \ n \ nP \ nc \ n \ n \ nE14

\ n

\ n \ na \ n = \ nΩ \ n \ nα \ n \ n \ nR \ n2 \ n \ n \ n \ nT \ nc \ n \ n2.5 \ n \ n / \ n \ nP \ nc \ n \ n \ nE15

\ n

, где Ω a = 0.42747 и Ωb = 0,08664.

\ n

Замена молярного объема (V) в уравнении. (13) с (ZRT / P) и перестановкой give.

\ n

\ n \ n \ nZ \ n3 \ n \ n- \ n \ nZ \ n2 \ n \ n + \ n \ n \ nA \ n- \ nB \ n- \ n \ nB \ n2 \ n \ n \ n \ n \ nZ \ n — \ nAB \ n = \ n0 \ n \ nE16

\ n

, где

\ n

\ n \ nB \ n = \ n \ nbp \ nRT \ n \ n \ n \ nE17

\ n

\ n \ nA \ n = \ n \ nap \ n \ n \ nR \ n2 \ n \ n \ nT \ n2.5 \ n \ n \ n \ n \ n \ nE18

\ n

Получены три реальных корня в двухфазной области. Наибольший корень соответствует коэффициенту сжимаемости газовой фазы Z _v , а наименьший положительный корень соответствует коэффициенту сжимаемости жидкости Z _L [11].

\ n

\ n Для смесей параметры уравнения a и b обычно выражаются как _m и b _m для углеводородной жидкой смеси с составом x _i :

\ n

\ n \ n \ na \ nm \ n \ n = \ n \ n \ n \ n \ n∑ \ n \ ni \ n = \ n1 \ n \ nn \ n \ nXi \ n \ n \ n \ na \ ni \ n \ n \ n \ n \ n2 \ n \ n \ n \ nE19

\ n

\ n \ n \ nb \ nm \ n \ n = \ n \ n∑ \ n \ ni \ n = \ n1 \ n \ nn \ n \ n \ n \ n \ nX \ ni \ n \ n \ nb \ ni \ n \ n \ n \ n \ n \ nE20

\ n

a _m и b _m для углеводородов газовая смесь состава y _i :

\ n

\ n \ n \ nα \ nm \ n \ n = \ n \ n \ n \ n \ n∑ \ n \ ni \ n = \ n1 \ n \ nn \ n \ n \ ny \ ni \ n \ n \ n \ n \ na \ ni \ n \ n \ n \ n \ n2 \ n \ n \ nE21

\ n

\ n \ n \ nb \ nm \ n \ n = \ n \ n∑ \ n \ ni \ n = \ n1 \ n \ nn \ n \ n \ n \ n \ ny \ ni \ n \ n \ nb \ ni \ n \ n \ n \ n \ n \ nE22

\ n

где n: количество компонентов в смеси; a _i : Redlich-Kwong — параметр для i-го компонента; b _i : b-параметр Редлиха-Квонга для i-го компонента; b _m : параметр b для смеси; x _i : мольная доля компонента i в жидкой фазе; y _i : мольная доля компонента i в газовой фазе.

\ n

Замена молярного объема (V) в уравнении. (13) с (ZRT / P) и перестановкой give.

\ n

\ n \ n \ nZ \ n3 \ n \ n- \ n \ nZ \ n2 \ n \ n + \ n \ n \ nA \ n- \ nB \ n- \ n \ nB \ n2 \ n \ n \ n \ n \ nZ \ n — \ nAB \ n = \ n0 \ n \ nE23

\ n

, где

\ n

\ n \ nB \ n = \ n \ n \ n \ nb \ nm \ n \ np \ n \ nRT \ n \ n \ n \ nE24

\ n

\ n \ nA \ n = \ n \ n \ n \ na \ nm \ n \ nP \ n \ n \ n \ nR \ n2 \ n \ n \ nT \ n2.5 \ n \ n \ n \ n \ n \ nE25

\ n

Затем можно рассчитать коэффициент сжимаемости газовой фазы или жидкости.

\ n

Иоффе и Зудкевич [26] показали, что существенное улучшение представления о летучести газовых смесей можно получить, рассматривая параметры взаимодействия как эмпирические параметры [26].Spear et al. [27] также утверждает, что уравнение состояния РК может быть использовано для расчета парожидкостных критических свойств бинарных смесей [28]. Чуэ и Праусниц [29] показали, что уравнение РК можно адаптировать для предсказания свойств как пара, так и жидкости. Spear et al. [28] привели семь примеров систем, для которых парожидкостные критические свойства углеводородных смесей могут быть рассчитаны с использованием уравнения состояния РК. Карнахан и Старлинг [30] использовали уравнение состояния Редлиха-Квонга для расчета энтальпий газовой фазы для различных веществ [30].Их результаты показали, что уравнение Редлиха-Квонга было значительным улучшением по сравнению с уравнением Ван-дер-Ваальса. Другие исследователи применили уравнение Редлиха-Квонга к критическим свойствам и фазовым равновесиям бинарных смесей при высоком давлении. Результаты показали, что точность расчета уравнения состояния Редлиха-Квонга для тройных систем была лишь немного ниже, чем для составляющих двойных систем [31].

\ n

Успех уравнения Редлиха-Квонга стал толчком для многих дальнейших эмпирических улучшений.Об одной из вех в разработке CEOS сообщил Соаве [4]. Его развитие в оценке параметра в члене давления притяжения для уравнения РК показано в (уравнение (22)). Соаве заменил термин (a / T ^0,5 ) в формуле. (22) с более общим термином, зависящим от температуры, обозначаемым α (T), чтобы получить

\ n

\ n \ nρ \ n = \ n \ nRT \ n \ nV \ n− \ nb \ n \ n \ n− \ n \ n \ na \ n \ nα \ n \ nT \ n \ n \ n \ nV \ n \ n \ nV \ n + \ nb \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ nE26

\ n

где α (T) — безразмерный коэффициент. Соаве использовал давление пара чистых компонентов, чтобы ввести выражение для параметра температурной коррекции α (T).При температурах, отличных от критической, поправочный параметр α (T) определялся следующим уравнением:

\ n

\ n \ nα \ n \ nT \ n \ n = \ n \ n \ n \ n \ n1 \ n + \ nm \ n \ n \ n \ n1 \ n− \ n \ n \ nT \ nr \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n2 \ n \ n \ nE27

\ n

Soave коррелировано параметр «m» с центральным коэффициентом (ω) для получения.

\ n

\ n \ nm \ n = \ n0.480 \ n + \ n1.57 \ n4ϖ \ n, \ n− \ n0.17 \ n \ n6ϖ \ n2 \ n \ n \ nE28

\ n

, где T _r : пониженная температура, ° R; ω: центральный фактор вещества; T: температура системы, ° R.

\ n

Для чистых веществ параметры уравнения a и b обычно выражаются как.

\ n

\ n \ nb \ n = \ nΩb \ n \ nR \ n \ n \ nT \ nc \ n \ n / \ n \ nP \ nc \ n \ n \ nE29

\ n

\ n \ na \ n = \ nΩa \ n \ n \ nR \ n2 \ n \ n \ n \ nT \ nc \ n \ n2 \ n \ n / \ n \ nP \ nc \ n \ n \ nE30

\ n

В целом , большинство входов EOS являются только критическими свойствами, и центральный фактор каждого компонента показан в таблице 1.

\ n \ n\ n\ n\ n\ n\ n\ n\ n\ n\ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n C \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n

\ n

\ n -Бутан \ n

\ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n5292 n 917 -Пентан \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n702 n 61794 C H ₁₄ \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n 0,49 \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n −20 \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n,7 \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n30 \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n

Соединение	Формула	Молекулярная масса	Критическое давление (psla)	Критическая температура (° F)	Критический объем (фут 3 / фунт)	Удельный вес жидкости (вода = 1)	Удельный вес по газу (воздух = 1)	Ацентрический фактор
Метан	CH 4 \ n	16.042	667,0	−116,66	0,0985	(0,3)	0,55400	0,0115
Этан	C \ n 2 H 6 \ n	30,069	706,6	89,92	0,0775	0,35643	1,03830	\ n	0,0994	0,0994
Пропан	C 3 H 8 \ n	44.096	615.5	205,92	0,0728	0,50738	1,52270	0,1529
Изобутан	C 4 H 4 n	58,122	527,9	274,41	0,0715	0,56295	2,00710	0,1865
C 4 H 10 \ n	58.122	550.9	305,55	0,0703	0,58408	2,00710	0,2003
Изопентан	C n	72,149	490,4	369	0,0685	0,62460	2,49140	0,2284
C 5 H 12 \ n	72,149	488.8	385,8	0,0676	0,63113	2,49140	0,2515
\ n n -Гексан	86,175	436,9	453,3	0,0688	0,66404	2,97580	0,2993	0,2993	\ n n -Гептан	C 7 H 16 \ n	100.202	396,8	512,9	0,0682	0,68819	3,46020	0,3483
\ n n 53 -Октан n	C 8 H 18 \ n	114,229	360,7	564,2	0,0673	0,70698	0,394450
\ n n -Нонан	C 9 H 20 \ n	128.255	330,7	610,8	0,693	0,72186	4,42890	0,4421
\ n n 17-Декан n	C 10 H 22 \ n	142,282	304,6	652,2	0,0703	0,73406	4,
Окись углерода	CO	28.01	506.7	−220,63	0,0527	0,79265	0,96720	0,0510
Углекислый газ	CO	44,01	1070,0	87,76	0,0343	0,82203	1,51970	0,2239
сероводород H 2 S	34,082	1306,5	212,81	0.0462	0.80269	1.17690	0.1010
Air	—	28.9586	551.9	\ n	n	0,0458	0,87603	1,00000	—
Водород	H 2 \ n	2,0159	\ n	-399,9	0,5319	0,07087	0,06961	-0.2140
Кислород	O 2 \ n	31,9988	731,4	−181,43	0,0367	1,1 n	1,10500	0,0222
Азот	N 2 \ n	28,0135	492,5	−232,53	11 0,0	0,80687	0,96740	0,0372
Вода	H 2 O	18.0153	3200.1	705.1	0,04975	1,00000	0,62210	0,3443

004 Таблица 1. из 9 каждый компонент.

\ n

, где Ωa и Ωb — безразмерные параметры чистого компонента SRK:

\ n

Ωa = 0,42747.

\ n

Омb = 0,08664.

\ n

Замена молярного объема (V) в уравнении на (ZRT / p) и преобразование дает коэффициент сжимаемости Z:

\ n

\ n \ n \ nZ \ n3 \ n \ n− \ n \ nZ \ n2 \ n \ n + \ n \ n \ nA \ n- \ nB \ n- \ n \ nB \ n2 \ n \ n \ n \ n \ nZ \ n- \ nAB \ n = \ n0 \ n \ nE31

\ n

, где

\ n

\ n \ nB \ n = \ n \ n \ n \ nb \ nm \ n \ np \ n \ nRT \ n \ n \ n \ nE32

\ n

\ n \ nA \ n = \ n \ n \ n \ na \ nm \ n \ nP \ n \ n \ n \ nRT \ n \ n2 \ n \ n \ n \ n \ nE33

\ n

\ n Для смесей параметры уравнения a и b обычно выражаются как _m и b _m для углеводородной жидкой смеси с составом x _i :

\ n

\ n \ n \ na \ nm \ n \ n = \ n \ n∑ \ ni \ n \ n \ n∑ \ nj \ n \ n [\ n \ nx \ ni \ n \ n \ nx \ nj \ n \ n \ n \ n \ na \ ni \ n \ n \ na \ nj \ n \ n \ nα \ ni \ n \ n \ nα \ nj \ n \ n \ n \ n1 \ n− \ n \ nk \ nij \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ nE34

\ n

\ n \ n \ nb \ nm \ n \ n = \ n \ n∑ \ ni \ n \ n \ n \ nXi \ n \ nbi \ n \ n \ n \ n \ n \ nE35

\ n

Ниже приводится расчет для _m и b _m для газовой смеси с составом y _i :

\ n

\ n \ n \ na \ nm \ n \ n = \ n \ n∑ \ ni \ n \ n \ n∑ \ nj \ n \ n [\ n \ ny \ ni \ n \ n \ ny \ nj \ n \ n \ n \ n \ na \ ni \ n \ n \ na \ nj \ n \ n \ nα \ ni \ n \ n \ nα \ nj \ n \ n \ n \ n1 \ n- \ n \ nk \ nij \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ nE36

\ n

\ n \ n \ nb \ nm \ n \ n = \ n \ n∑ \ ni \ n \ n \ n \ nyi \ n \ nbi \ n \ n \ n \ n \ n \ nE37

\ n

Параметр бинарного взаимодействия (BI) , классически обозначаемый как k _ij , обычно участвует в выражении параметра «a» для обеспечения большей гибкости УС и предназначен для характеристики любой бинарной системы, образованной компонентами i и j в углеводородной смеси [32].Видаль и Дауберт [33], Грабоски и Дауберт [34] и Слот-Петерсен [35] предположили, что для углеводородных систем не требуется никаких БИ. Однако в отсутствие углеводородов параметры бинарного взаимодействия могут улучшить предсказания фазового объемного поведения смеси с помощью SRK EOS для расчета коэффициента сжимаемости газовой или жидкой фаз [34, 36, 37]. Равновесное отношение K _i , то есть K _i = yi / xi, можно переопределить в терминах летучести компонента:

\ n

\ n \ n \ nK \ ni \ n \ n = \ n \ n \ n \ n \ nf \ ni \ nL \ n \ n / \ n \ nXiP \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ nf \ ni \ nV \ n \ n / \ n \ n \ n \ ny \ ni \ n \ nP \ n \ n \ n \ n \ n \ n = \ n \ n \ nΦ \ ni \ nL \ n \ n \ nΦ \ ni \ nv \ n \ n \ n \ nE38

\ n

, где f _i \ n ^v = летучесть компонента «i» в газовой фазе; f _i \ n ^L = летучесть компонента «i» в жидкой фазе; \ n \ n \ nΦ \ ni \ nv \ n \ n \ n = коэффициент летучести компонента «i» в паровой фазе; \ n \ n \ nΦ \ ni \ nL \ n \ n \ n = коэффициент летучести компонента «i» в жидкой фазе.

\ n

Соаве предложил следующее выражение для коэффициента летучести компонента i в жидкой фазе:

\ n

\ n \ nln \ n \ n \ n \ n \ nf \ ni \ nL \ n \ n \ n \ nX \ ni \ n \ nP \ n \ n \ n \ n = \ nln \ n \ n \ n \ nΦ \ ni \ nL \ n \ n \ n = \ n \ n \ n \ nb \ ni \ n \ n \ n \ n \ nZ \ nl \ n \ n− \ n1 \ n \ n \ n \ n \ nb \ nm \ n \ n \ n \ nln \ n \ n \ n \ n \ nZ \ nL \ n \ n- \ nB \ n \ n \ n- \ n \ n \ nA \ nP \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n2 \ n \ nψ \ ni \ n \ n \ n \ na \ nm \ n \ n \ n- \ n \ n \ nb \ ni \ n \ n \ nb \ nm \ n \ n \ n \ n \ n \ nln \ n \ n \ n \ n1 \ n + \ n \ nB \ n \ nZ \ nL \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ nE39

\ n

, где

\ n

\ n \ n \ nψ \ nj \ n \ n = \ n \ n∑ \ nj \ n \ n \ n \ n \ nx \ nj \ n \ n \ n \ n \ na \ ni \ n \ n \ na \ nj \ n \ n \ nα \ ni \ n \ n \ nα \ nj \ n \ n \ n \ n1 \ n — \ n \ nk \ nij \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ nE40

\ n

\ n \ n \ na \ nm \ n \ n = \ n \ n∑ \ ni \ n \ n \ n∑ \ nj \ n \ n [\ n \ nx \ ni \ n \ n \ nx \ nj \ n \ n \ n \ n \ na \ ni \ n \ n \ na \ nj \ n \ n \ nα \ ni \ n \ n \ nα \ nj \ n \ n \ n \ n1 \ n- \ n \ nk \ nij \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ nE41

\ n

Коэффициент летучести компонента i в газовой фазе:

\ n

\ n \ nln \ n \ n \ nϕ \ nj \ n \ n \ n = \ n \ n \ n \ nb \ ni \ n \ n \ n \ n \ nZ \ ni \ n \ n- \ n1 \ n \ n \ n \ n \ nb \ nm \ n \ n \ n- \ nln \ n \ n \ n \ nZ \ ni \ n \ n- \ nB \ n \ n \ n- \ n \ n \ nA \ nB \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n2 \ n \ nψ \ ni \ n \ n \ n \ na \ nm \ n \ n \ n− \ n \ n \ nb \ ni \ n \ n \ nb \ nm \ n \ n \ n \ n \ nln \ n \ n \ n1 \ n + \ n \ nB \ n \ nZ \ ni \ n \ n \ n \ n \ n \ nE42

\ n

где:

\ n

\ n \ n \ nψ \ nj \ n \ n = \ n \ n∑ \ nj \ n \ n \ n \ n \ ny \ nj \ n \ n \ n \ n \ na \ ni \ n \ n \ na \ nj \ n \ n \ nα \ ni \ n \ n \ nα \ nj \ n \ n \ n \ n1 \ n- \ n \ nk \ nij \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ nE43

\ n

\ n \ n \ na \ nm \ n \ n = \ n \ n∑ \ ni \ n \ n \ n∑ \ nj \ n \ n [\ n \ ny \ ni \ n \ n \ ny \ nj \ n \ n \ n \ n \ na \ ni \ n \ n \ na \ nj \ n \ n \ nα \ ni \ n \ n \ nα \ nj \ n \ n \ n \ n1 \ n− \ n \ nk \ nij \ n \ n \ n \ n \ n \ n \ nE44

\ n

книги IntechOpen доступны в Интернете, имея доступ ко всему опубликованному контенту на уровне главы.

Доступны все опубликованные IntechOpen главы. ОТКРЫТЫЙ ДОСТУП можно читать без каких-либо требований регистрации, сразу после публикации, без каких-либо препятствий.

Версия в формате HTML, а также версия в формате PDF для публикаций, датированных до 2012 г., которые доступны через программу для чтения, доступны для читателей без ограничений.

Полное содержание глав можно прочитать, скопировать и распечатать по ссылке в главе, и эти действия никоим образом не ограничены или ограничены.

Регистрация требуется только для загрузки главы в формате PDF. Плата за подписку и группы пользователей не взимаются.

Главы IntechOpen распространяются по лицензиям CC BY 3.0, что позволяет пользователям «копировать, использовать, распространять, передавать и отображать работу публично, а также создавать и распространять производные работы на любом цифровом носителе для любых ответственных целей при условии надлежащего указания авторства. … »и нет некоммерческих ограничений.

Авторы могут публиковать опубликованные работы в любом репозитории или на веб-сайтах без промедления, а авторы и редакторы книг IntechOpen имеют прямой доступ к полной версии книги в формате PDF.

Весь опубликованный контент можно сканировать для индексации. Доступ к полному тексту и метаданным можно получить с помощью публично опубликованных инструкций.

Все книги IntechOpen проиндексированы в CLOCKSS, и сохранение доступа к опубликованному контенту четко обозначено.

Доступны все опубликованные IntechOpen главы. ОТКРЫТЫЙ ДОСТУП можно читать без каких-либо требований регистрации, сразу после публикации, без каких-либо препятствий.

Версия в формате HTML, а также версия в формате PDF для публикаций, датированных до 2012 г., которые доступны через программу для чтения, доступны для читателей без ограничений.

Полное содержание глав можно прочитать, скопировать и распечатать по ссылке в главе, и эти действия никоим образом не ограничены или ограничены.

Регистрация требуется только для загрузки главы в формате PDF. Плата за подписку и группы пользователей не взимаются.

Главы IntechOpen распространяются по лицензиям CC BY 3.0, что позволяет пользователям «копировать, использовать, распространять, передавать и отображать работу публично, а также создавать и распространять производные работы на любом цифровом носителе для любых ответственных целей при условии надлежащего указания авторства. … »и нет некоммерческих ограничений.

Авторы могут публиковать опубликованные работы в любом репозитории или на веб-сайтах без промедления, а авторы и редакторы книг IntechOpen имеют прямой доступ к полной версии книги в формате PDF.

Весь опубликованный контент можно сканировать для индексации. Доступ к полному тексту и метаданным можно получить с помощью публично опубликованных инструкций.

Все книги IntechOpen проиндексированы в CLOCKSS, и сохранение доступа к опубликованному контенту четко обозначено.

Повышение безопасности поливалентных фагов Staphylococcus aureus путем их продуцирования на штамме Staphylococcus xylosus

Ссылки

1 декабря 1993 г. · Вирусология · JK BamfordD H Bamford

Dec 25, 1995 · Исследования нуклеиновых кислот JK

1 января 1996 г. · Исследования нуклеиновых кислот · BL MaidakC R Woese

1 марта 1997 г. · Исследования нуклеиновых кислот · TM Lowe, SR Eddy

28 февраля 1998 г. · Исследования нуклеиновых кислот · JD ThompsonD G Higgins

24 декабря , 1997 · Биология, биотехнология и биохимия · J KanekoY Kamio

11 июля 1998 г. · Вирусология · R PantůcekS Rosypal

26 августа 1998 г. · Медицинский журнал Новой Англии · FD Lowy

9 января 1999 г. · The New Английский медицинский журнал · S BlotF Colardyn

4 марта 2000 г. · Журнал клинической микробиологии · MC EnrightB G Spratt

27 июня 2000 г. · BioTechniques · P Stothard

19 июня 2001 г. · Исследование нуклеиновых кислот · J BesemerM Borodovsky 900 05

27 июля 2001 г. · Письма микробиологов FEMS · C BarrièreR Talon

30 января 2002 г. · Джин · Ирен Т. РомбельСтивен Альберт Джонстон

18 июля 2002 г. · Международный журнал дерматологии · Калистрат Маркоишвили Александр Сулаквелидзе

30 августа 2002 г. Прикладная микробиология и микробиология окружающей среды · Элен ДевоСильвен Муано

1 октября 2003 г. · Ветеринарная микробиология · Йоко Эндошотаро Такеучи

6 января 2004 г. · Исследования нуклеиновых кислот · Дин Ласлетт, Бьорн Канбэк

20 февраля 2004 г. · Журнал Эдвардса Бакварда FeilBrian G Spratt

3 апреля 2004 г. · Клиническая микробиология и инфекция: официальная публикация Европейского общества клинической микробиологии и инфекционных заболеваний · B AygenM Doanay

25 января 2005 г. · Клиническая и экспериментальная дерматология · D JikiaAlexander Sulakvelidze

марта

25, 2005 · Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки · Тони Кван, Джерри Пеллетье

7 апреля 2005 г. · Приложение изд. и микробиология окружающей среды · S O’FlahertyA Coffey

8 июля 2005 г. · Журнал клинической микробиологии · Наталья Малахова Валерия Гриневич

6 августа 2005 г. · Биоинформатика · Ана Конеса Монтсеррат Роблес

29 сентября 2005 г. · Нормативная токсикология: · RM CarltonM J Loessner

1 января 1993 г. · Прикладная и экологическая микробиология · S MoineauT R Klaenhammer

16 мая 2006 г. · Микробы и инфекции · Колин R TinsleyXavier Nassif

23 мая 2007 г. · Противомикробные препараты и химиотерапия · Rosanna Cappareico Ианнелли

25 мая 2007 г. · Журнал клинической микробиологии · Пол Д. Стампер, Карен К. Кэрролл

25 сентября 2007 г. · Прикладная микробиология и микробиология окружающей среды · Эмили Дорде-ФрисониСабин Лерой

30 октября 2007 г. · Журнал медицинской микробиологии · Рената Фа Рабелло CD Castro

11 июня 2008 г. · Пищевая микробиология · Мария Х. Бенито-Мария Г. Кордова

5 июля 2008 г. · The Journal of Infectious Diseases · Christo pher P MontgomeryRobert S Daum

14 мая 2009 г. · Канадский журнал инфекционных заболеваний и медицинской микробиологии = Journal Canadien Des Maladies Infectieuses Et De La Microbiologie Médicale · Джордж Р. Голдинг НЕИЗВЕСТНО Канадская программа эпиднадзора за внутрибольничными инфекциями 230005,

июня · Мартин КшивинскиМарко Марра

19 сентября 2009 г. · Журнал молочной науки · HW BarkemaR N Zadoks

20 октября 2009 г. · Прикладная и экологическая микробиология · Пилар ГарсияАна Родригес

16 апреля 2010 г. · Журнал клинической микробиологии · Мас Эйдзи Eguchi

8 сентября 2010 г. · Прикладная и экологическая микробиология · SB SantosJ Azeredo

15 декабря 2010 г. · Прикладная и экологическая микробиология · Sue-Er HsiehYi-Hsiung Tseng

25 января 2011 г. · Journal of Dairy Science · M Hovinen, S Pyörälä

13 апреля 2011 г. · Микробная биотехнология · Лейла КвачадзеМзия Кутателадзе

20 мая 2011 г. · Протеомика · Кармен ВольфСюзанна Энгельманн

12 июля 2011 г. · Прикладная и экологическая микробиология · Ольга Саквинска, Филиппа Морейллон

21 сентября 2011 г. · PloS One · Катриен ВандерштегенРоб Лавин

1 июля 2010 г. Исследование вирусов · Малгожата ЛобоцкаАлександра Гловацка

31 июля 2012 г. · Журнал вирусологии · Jingmin GuWenyu Han

9 октября 2012 г. · Прикладная микробиология и микробиология окружающей среды Журнал пищевой микробиологии · Линн Эль Хаддад, Сильвен Муано,

,

, 28 сентября 2016 г. · PeerJ, Луис Амариллас, Джозефина Леон-Феликс,

,

, 17 января 2017 г.

28 марта, 2018 · Вирусы · Eva González-MenéndezAna Rodríguez

26 апреля 2018 · Антибиотики · Jude AjueborAidan Coffey

18 июля 2018 · Envir onmental Microbiology · Крис М. Рэндс · Евгений М. Здобавов

28 июля, 2018 · Экологическая микробиология · Шона МакКаллин, Харальд Брюссов

12 июля 2014 г.

12 октября 2018 · PloS One · Ева Гонсалес-Менендес Пилар Гарсия

23 февраля 2018 г. · Журнал исследований молочных продуктов · Мариела Э. СредникЭлида Р Джентилини

26 января 2020 г. · Вирусы · Joseph M Ochieng ‘Oduor

16 апреля 2020 г. · Вирусы · Франсиско Малагон Бисваджит Бисвас

31 мая 2018 г.