Нуклеопептид инструкция по применению для животных: Нуклеопептид, 100 мл, инструкция по применению

Содержание

Нуклеопептид, 100 мл, инструкция по применению

Препарат представляет собой экстракт селезенки крупного рогатого скота. Содержит нуклеотиды, пептиды, органические кислоты и другие биологически активные вещества — регуляторы обменных и гормональных процессов.

Фармакологическое действие

Нуклеопептид увеличивает массу тела животных, повышает резистентность организма.

Способствует активизации антитоксической функции печени.

Показания

Применяется

  • для увеличения прироста у молодняка и мышечной массы у взрослых животных;
  • для улучшения шерстного покрова у здоровых животных, а также при затяжной линьке и кожных заболеваниях различного генеза;
  • при отставании в росте и развитии, гипотрофии;
  • при различных интоксикациях и токсикозе беременности;
  • при кровепаразитарных заболеваниях для стимуляции распада гемоглобина в печени;
  • для повышения резистентности;
  • при хронических и вялотекущих заболеваниях — хронический отит, экземы, дерматиты, фурункулез, свищи и других.

Нуклеопептид эффективен для подготовки бойцовых и выставочных животных, увеличивает мышечную массу и тонус, улучшает качество шерсти.

Применение Нуклеопептида у сельскохозяйственных животных позволяет получить прирост живой массы на 12–25%, сократить сроки откорма на 10–15%, снизить себестоимость мяса на 6- 12% , сократить падеж, а у пушных зверей кроме того повысить качество шкурки.

Способ применения Нуклеопептида для мелких домашних животных (кошки, собаки, птицы).

Для увеличения мышечной массы выставочным животным и собакам бойцовых пород, а так же для улучшения качества шерсти. Вводится подкожно или внутримышечно в дозе 0,1–0,2 мл на кг 3–5 дней подряд за 1 месяц до выставки или 1 раз в 15 дней в той же дозе в течение активного периода, но не более 6 месяцев. Между курсами необходим перерыв в 2–3 месяца.

С целью повышения устойчивости организма к вирусным инфекциям, а так же для улучшения роста и развития животных: новорожденным котятам и щенкам — внутрь, в дозе 2–3 мл для мелких животных, 5–10 мл для крупных, 1 раз в день перед кормлением, 3 дня подряд; подрощенным щенкам и котятам и взрослым животным подкожно или внутримышечно в дозе 0,1–0,2 мл/кг массы тела 1 раз в день в течение трех дней, в периоды повышенного риска заболеваемости в межвакацинальный период (перед выставками, при стрессовых ситуациях, в межсезонье и др.

)

При вялотекущих хронических заболеваниях различной этиологии у всех видов животных (хронический отит, конъюнктивит, экземы, дерматиты, фурункулез и др.) вводится по 0,1–0,2 мл на кг массы тела ежедневно в течение 5–7 дней, в комплексе со специфической терапией. При необходимости курс повторяют через месяц.

При интоксикациях и токсикозе беременности, а так же для ускорения распада гемоглобина в печени при кровепаразитарных заболеваниях всех видов животных, подкожно или внутримышечно по 0,1–0.2 мл на кг массы тела в течение 5–7 дней.

Птицам — при ухудшении внешнего вида и недомогании внутрь — от 0,5 до 2 мл, 1 раз в день 3–5 дней.

Способ применения Нуклеопептида для сельскохозяйственных животных.

Пушным зверям с целью улучшения развития, увеличения массы тела и улучшения качества шерсти, Нуклеопептид применяется подкожно или внутримышечно 0,1 -0.2 мл на 1 кг.

молодняку- 1 раз в день 3 дня подряд, в дальнейшешем 1 раз в 15 дней в период всего роста, или перорально в дозе 2–3 мл на щенка.
взрослым животным — за 1–1.5 месяца до убоя, 1 раз в день в течение 5 дней.

Новорожденным телятам, поросятам, ягнятам для повышения резистентности и ускорения роста подкожно или внутримышечно в дозе 0,1 -0,2 мл на кг живой массы раз в день в течение 3-х дней.

Откормочным животным с целью увеличения привесов Нуклеопептид вводят подкожно в среднюю треть шеи один раз в 15 дней в дозе 0.1–0.2 мл на кг ., но не более 50 мл на одно ведение в течение 2–3 месяцев. За 10 дней до убоя применение препарата прекращают.

Форма выпуска:

Выпускается во флаконах по 5, 10, 100 и 200 мл

Применение препарата Нуклеопептид в животноводстве

Нуклеопептид полностью натуральный препарат. Для его производства используются ингредиенты животного происхождения (селезенка КРС). Содержит низкомолекулярные пептиды и нуклеозиды, благодаря, которым  Нуклеопептид оказывает  стимулирующее действие на гормональный статус и иммунную систему животных, активирует синтез  гормона роста, повышает резистентность организма, улучшает шерстяной покров и стимулирует увеличения массы тела.

Используется для повышения привесов, сокращения сроков откорма, а также для повышения иммунитета молодняка сельхозживотных.

Современный покупатель становится все более требовательным к качеству, а самое главное к безопасности продуктов, которые  он потребляет в пищу. Из этого следует, что потребитель заинтересован в том, чтобы конечный продукт был  натуральным, вкусным и  доступным по цене.

Как показал опыт многих сельхозпроизводителей, замена искусственных стимуляторов на натуральные биопрепараты позволяет сделать продукт наиболее привлекательным, а значит конкурентоспособным на рынке. Так как искусственные стимуляторы могут отрицательно сказываться на качестве продукции.

Результаты исследований проводимых на многих сельхозпредприятиях показали:

  1. Увеличение привесов молодняка на откорме на 13- 20%
  2. Улучшение  биохимических показателей мяса (имеются акты исследований)
  3. Сокращение сроков откорма

В таблице приведены подсчеты экономической эффективности  использования препарата Нуклеопептид в свиноводческом комплексе в республике Башкортостан  Мелеузовского  района.

Количество животных в эксперименте — 100 голов, срок наблюдения — 75 дней. Расход корма на голову — 1,4 К.Е. в сутки. При подсчете выяснилось, что прибыль увеличилась на 43,5%.

Подсчет экономической эффективности применения препарата Нуклеопептид поросятам

Показатели Без препарата С препаратом
Привесы 4,8 тонн 528 тыс.р 5,5 тонн 610,5 тыс.р
Расход корма 30 240 тыс.р 31 248 тыс.р
Количество препарата

50 23,3 тыс.р
Результаты
168 тыс.р
241 тыс.р
Итого


73 тыс.р (+43,5%)

Также проводились исследования на бычках черно-пестрой породы в хозяйстве Илишевского района Республики Башкортостан. Опыт проводился на группе на 100 голов в течении 75 дней. По результатам проведенных опытов нуклеопептид проявил высокую эффективность. Повышение привесов составило 38,6% по отношению к контрольной группе.

При этом биохимические показатели мяса были намного лучше, чем в группе, которой препарат не применялся.

Порядок применения Нуклеопептида

  1. Новорожденным телятам, поросятам, ягнятам для повышения резистентности и ускорения роста подкожно или внутримышечно в дозе 0,1 -0,2 мл на кг живой массы раз в день в течение 3-х дней.
  2. Откормочным животным с целью увеличения привесов Нуклеопептид вводят подкожно в среднюю треть шеи один раз в 15 дней в дозе 0.1-0.2 мл на кг, но не более 30 мл на одно ведение в течение 2-3 месяцев. За 10 дней до убоя применение препарата прекращают.
  3. При вялотекущих хронических заболеваниях различной этиологии у всех видов животных (хронический отит конъюнктивит, экземы, истощение и др.) — вводится по 0,1-0,2 мл на кг массы тела ежедневно в течение 5-7 дней, в комплексе со специфической терапией. При необходимости курс повторяют через месяц.
  4. При интоксикациях и токсикозе беременности, а так же для ускорения распада гемоглобина в печени при кровепаразитарных заболеваниях всех видов животных, подкожно или внутримышечно по 0,1-0.2 мл на кг массы тела в течение 5-7 дней.

Побочные явления возможны в редких случаях у гиперчувствительных животных. Также препарат не рекомендуется назначать животным в период вакцинации и при острых инфекционных заболеваниях и истощении.

Из всего выше сказанного следует, что применение препарата Нуклеопептид позволяет не только получить продукт высокого качества и удовлетворить все требования потребителя, но и значительно сократить затраты на его производство.

Продукция после применения препарата используется без ограничений.

Рекомендуемые препараты

инструкция по применению для животных, состав, дозировка, отзывы

Нуклеопептид — ветеринарный препарат биологической природы. Его свойства позволяют нормализовать выработку гормонов и обменные процессы в организме животных. Давать питомцам Нуклеопептид просто. Противопоказаний у него практически нет. Нужно лишь придерживаться несложной инструкции и норм дозировки.

Описание и свойства препарата

Нуклеопептид — биологический иммуностимулятор, который:

  • помогает сформировать в организме животного работоспособный механизм противодействия вирусам и другим возбудителям заболеваний;
  • укрепляет здоровье печени и усиливает антитоксическую функцию этого органа;
  • улучшает усвояемость кормов;
  • увеличивает рост и вес животного;
  • повышает тонус организма, улучшает состояние кожи и шерсти;
  • усиливает терапевтический эффект при лечении хронических болезней.

Основа Нуклеопептида — экстракт из бычьей селезенки. В ней содержатся натуральные составляющие: пептиды, нуклеиновые и органические кислоты, другие биоактивные компоненты. Нуклеопептид выпускается в форме раствора для инъекций. Он выглядит как почти непрозрачная жидкость желто-коричневого окраса: ярче или бледнее.

Внимание! Состав действующих веществ в 1 мл раствора — не меньше 1 мг.

При встряхивании раствор вспенивается, а затем на несколько минут выпадает в рыхлый осадок. Производитель фасует Нуклеопептид в стеклянные баночки с резиновыми крышками и алюминиевыми фиксаторами герметичности. Объем — 5, 10, 100 или 200 мл. Флаконы с инструкцией по применению пакуют в картонные коробки. Также лекарство выпускают в ампулах по 1 мл.

Показания и противопоказания

Нуклеопептид назначают свиньям, жвачным и пушным животным, домашней птице, кошкам и собакам. Препарат помогает решить такие задачи:

  1. Коррекция и укрепление иммунитета.
  2. Стимулирование роста молодняка.
  3. Наращивание мышечной массы (взрослые животные).
  4. Увеличение живого веса представителей мясных пород.
  5. Лечение отитов, дерматитов, улучшение качества шерсти у декоративных питомцев.
  6. Борьба с интоксикацией, токсикозом.
  7. Корректировка отставания в развитии.
  8. Стимуляция скорости распада гемоглобина в печени (при кровепаразитарных недугах).
  9. Борьба с хроническими вялотекущими хворями.

Противопоказаний у Нуклеопептида минимум:

  • аллергическая реакция;
  • обострение хронического заболевания на первых этапах приема лекарства (позднее симптомы ослабевают).

Инструкция по применению запрещает давать Нуклеопептид во время острой фазы заболевания и сразу после вакцинации. Нежелательно лечить препаратом физически истощенных особей. Биостимулятор не конфликтует при одновременном приеме с другими химиотерапевтическими, антимикробными препаратами, витаминными добавками. Если планируется употребление мяса в пищу, остановите лечение Нуклеопептидом за 10 дней до убоя.

Рекомендации по дозировке

Хранить препарат следует строго в температурных рамках от +2 до +25оС, в темном и сухом месте. Нуклеопептид считается безопасным. Срок годности невскрытого флакона или ампулы — 24 месяца. После открытия лекарство нужно полностью использовать за одни сутки, это указано в инструкции по применению.

Внимание! Рыхлый осадок при встряхивании — норма. Если он уже не разбивается при взбалтывании, то раствор применять запрещено.

Рекомендуемые дозы:

  1. Телятам. Ежедневно по 100-150 мл с питьем. Курс — 3 дня.
  2. Поросятам, ягнятам. Однократный прием с водой — 25-30 мл.
  3. Взрослому КРС, жвачным животным и свиньям ежедневные инъекции в основание шеи. Дозировка — 0,15 мл/кг живого веса. Курс при первом приеме — 3 дня. После 2-недельного перерыва количество уколов увеличивают до 4-6 шт.
  4. Птицам. В этом случае Нуклеопептид применяется исключительно как иммуностимулятор. Доза: 0,5-2 мл на одну особь. Вводится через рот. Курс — не дольше 1 нед.
  5. Пушным животным. Основная цель — улучшение качества шерсти. Для этого зверям проводят серию инъекций в течение 5 дней за 4-6 нед. до убоя. Норма — 0,3 мл/кг. Способ введения — любой.
  6. Собакам и кошкам. Новорожденным котятам и щенкам Нуклеопептид вливают через рот: 3 дня по 2-10 мл (зависит от породы и массы).

Животноводы положительно отзываются о препарате. Опытом установлено: использование Нуклеопептида в соответствии с инструкцией по применению увеличивает ежесуточную прибавку массы на 12-25%. Также уменьшается падеж скота, сроки откорма и себестоимость мяса снижаются, а внешний вид и здоровье питомцев становятся лучше.

А Вы использовали подобные препараты для своих животных?

Нуклеопептид: видео

Нуклеопептид - инструкция, описание, дозировка - Иммуномодуляторы

Нуклеопептид

1. Фармакотерапевтическая группа 

биопрепарат, имуностимулятор.

Нуклеопептид - экстракт селезенки крупного рогатого скота, содержит пептиды, нуклеозиды, основания нуклеотидов и другие биологически активные вещества. Благодаря стимулирующему действию этих соединений на регуляторные ферментативные процессы клеток. Нуклеопептид оказывает регуляторное и стимулирующее действие на гормональный статус и иммунную систему животных, активирует синтез медиаторов действия и роста животных, повышает резистентность организма, улучшает шерстяной покров и стимулирует увеличения массы тела. 


Показания к применению Нуклеопептида 
1. Хронические неспецифические заболевания - хронический отит, экземы, дерматиты, фурункулез и др., отставание в росте и развитии, гипотрофия, различные интоксикации и токсикоз беременности.
2. Для нормализации шерстного покрова при кожных заболеваниях и у выставочных животных. При затяжной линьке, для увеличения прироста у молодняка и мышечной массы у взрослых животных, для повышения резистентности.


Способ применения Нуклеопептида для мелких домашних животных (кошки, собаки, птицы).
1. С целью повышения устойчивости организма к вирусным инфекциям, а так же улучшения роста и развития животных: новорожденным котятам и щенкам – внутрь, в дозе 2-3 мл для мелких животных , 5-10 мл для крупных, 1 раз в день перед кормлением, 3 дня подряд; подрощенным щенкам и котятам и взрослым животным подкожно или внутримышечно в дозе 0,1-0,2 мл/кг массы тела 1 раз в день в течение трех дней, в периоды повышенного риска заболеваемости в межвакцинальный период ( перед выставками, при стрессовых ситуациях, в межсезонье и др.)
2. Для увеличения мышечной массы , при повышенной двигательной активности, выставочным животным и собакам бойцовых пород, а так же для улучшения качества шерсти. 

Вводится подкожно или внутримышечно в дозе 0,1-0,2 мл на кг 3-5 дней подряд за 1 месяц до выставки или 1 раз в 15 дней в той же дозе в течение активного периода, но не более 6 месяцев. Между курсами необходим перерыв в 2-3 месяца.
3. При вялотекущих хронических заболеваниях различной этиологии у всех видов животных (хронический отит конъюнктивит, экземы, истощение и др.) - вводится по 0,1-0,2 мл на кг массы тела ежедневно в течение 5-7 дней, в комплексе со специфической терапией. При необходимости курс повторяют через месяц.
4. При интоксикациях и токсикозе беременности, а так же для ускорения распада гемоглобина в печени при кровепаразитарных заболеваниях всех видов животных, подкожно или внутримышечно по 0,1-0.2 мл на кг массы тела в течение 5-7 дней.
5. Птицам – при ухудшении внешнего вида и недомогании внутрь - от 0,5 до 2 мл, 1 раз в день 3-5 дней.


Способ применения Нуклеопептида у сельскохозяйственных животных.
1. Пушным зверям с целью улучшения развития, увеличения массы тела и улучшения качества шерсти, Нуклеопептид применяется подкожно или внутримышечно 0,1 -0.2 мл на 1 кг.
-молодняку- 1 раз в день 3 дня подряд, в дальнейшем 1 раз в 15 дней в период всего роста, или перорально в дозе 2-3 мл на щенка.
-взрослым животным - за 1-1.5 месяца до убоя , 1 раз в день в течение 5 дней.
2. Новорожденным телятам, поросятам, ягнятам для повышения резистентности и ускорения роста подкожно или внутримышечно в дозе 0,1 -0,2 мл на кг живой массы раз в день в течение 3-х дней.
3. Откормочным животным с целью увеличения привесов Нуклеопептид вводят подкожно в среднюю треть шеи один раз в 15 дней в дозе 0.1-0.2 мл на кг . но не более 50 мл на одно ведение в течение 2-3 месяцев. За 10 дней до убоя применение препарата прекращают.


Нуклеопептид не токсичен, не вызывает аллергии и анафилактических реакций, сочетается с химиотерапевтическими средствами и витаминами не оказывает влияния на санитарно- ветеринарную оценку сельхозпродукции. 

Нуклеопептид не применяется – в острой стадии заболеваний (высокая температура, прекоматозное состояние и коматозное состояние) и в период вакцинации. 

Других противопоказаний и побочных действий при применении Нуклеопептида не имеется.


Выпускается во флаконах по 5, 10, 100 и 200 мл. После вскрытия флакона препарат использовать в тот же день.

Производитель: Общество с ограниченной ответственностью «Экохимтех». Республика Башкортостан, инд. 450029, г. Уфа. ул. Ульяновых , 65 .тел. (3472) 42-49-53; 42-75-13 .
Наставление по применению Нуклеопептида утверждено Главным управлением ветеринарии 05.03.1990 г.
ТУ 10.07.13-90.

инструкция по применению, дозировка и возможные побочные эффекты

Просмотров: 3510

3510

Время чтения: 10 минут

Содержание

Домашние питомцы точно также, как и люди нуждаются в витаминах, позволяющих укрепить иммунитет, повысить эффективность работы защитных сил организма. Как результат, животное, которое в дополнение к сбалансированному полноценному рациону питания получает витаминные комплексы или биологически активные добавки, успешно противостоят различным вирусным заболеваниям. Доказано, что у хозяев, вводящих в рацион питания витамины и биологически активные добавки, четвероногие друзья легче проходят опасные периоды времени, когда простудные вирусы наиболее агрессивны.

Общее описание


Нуклеопептид представляет собой высокоэффективный ветеринарный биологический препарат, сформированный на основе компонентов, имеющих животное происхождение. Продукт является иммуностимулятором нового поколения, содержащий биологически активные компоненты.

Препарат разработан и выпускается отечественным предприятием «Экохимтех» и, при правильном применении обеспечивает иммунитета питомца, а также стимулирование роста, развития, восстановления обмена веществ.

Характерные особенности, состав и свойства


Основное действующее вещество, входящее в состав препарата – аккуратно извлеченный экстракт селезенки крупного рогатого скота. Известно, что селезенка является важнейшим органом иммунной системы организма, а все основные вещества (в том числе, нуклеотиды) принимают активное участие в образовании качественного состава нуклеиновых кислот. Именно эти кислоты составляют основу ДНК организма. Не менее важны и пептиды, являющиеся своеобразным «строительным материалом», стимулирующим рост и развитие организма. Они же принимают участие во многих обменных процессах.

Нуклеопептид, как готовый к применению препарат, представляет собой светлую или темно-коричневую непрозрачную жидкость. Если жидкость долго хранилась в неподвижном положении, на дне емкости может образоваться непрозрачный осадок. При встряхивании упаковки осадок практически моментально исчезает.

Расфасовка предусмотрена во флаконы. Цвет стеклянного флакона может быть темным или прозрачным. Герметичность емкости обеспечивают резиновые пробки. В продаже можно найти флаконы разного объема:

  • 5 мл
  • 10 мл
  • 100 мл
  • 200 мл.

Большие упаковки применяются для крупного рогатого скота, а для собак рекомендуется приобретать флаконы, емкостью 5 или 10 мл.

Внимание: при сильном встряхивании жидкость может пениться. Это абсолютно нормально, препарат качественный.

Как действует препарат в организме

Уникальный и сбалансированный состав препарата (полностью натуральные компоненты) позволяет достичь комплексное воздействие на организм питомца. Но, прежде чем принимать решение на прием данного средства, необходимо проконсультироваться у ветеринара.

Если же Нуклеопептид рекомендован, то по результатам курсового применения можно рассчитывать на следующие положительные изменения:

  • Укрепление иммунитета;
  • Активизация процессов роста и сбалансированного полноценного развития;
  • Очищение печени, выведение токсинов;
  • Нормализация, восстановление гормонального фона после перенесенного заболевания или употребления антибиотиков;
  • Улучшение качества кожи и шерсти, укрепление волосяного покрова, блеск;
  • В качестве вспомогательной функции для набора мышечной массы тела;
  • Улучшение обменных процессов.

Курсовое применение препарата позволяет животному быстрее восстановиться после перенесенного заболевания, травм или операций.

Важно: в составе биостимулятора содержатся только натуральные компоненты, по степени воздействия на весь организма собаки, препарат относится к категории малоопасных средств:

- не вызывает привыкания;
- не содержит токсичных веществ;
- не приводит к раздражению, аллергическим реакциям.

Фармацевтика выпускает средство только в виде раствора, таблеток, капсул, других вариантов упаковки пока не разработано.

Рекомендации по применению


Характерная особенность Нуклеопептида заключается в профилактических и лечебных функциях одновременно. Средство назначают как профилактика от возможных тяжелых заболеваний, а также, как лекарство (один из компонентов комплексной терапии). Биостимулятор назначают:

  • если нужно укрепить иммунитет;
  • при необходимости набора мышечной массы до нормы;
  • отставание в росте, физическом развитии питомца;
  • длительная, непрекращающаяся линька;
  • для беременных самок при токсикозе;
  • как средство борьбы с интоксикацией организма.

Биологический стимулятор имеет и практическую направленность. Препарат назначают в составе основного курсового лечения от таких заболеваний, как:

  • экзема;
  • свищ;
  • фурункулез;
  • отит;
  • иные виды хронических заболеваний.

Активные компоненты, входящие в состав биодобавки, способствуют ускоренному расщеплению и распаду гемоглобина в печени, выводу токсичных веществ из организма.

Полезный совет: Некоторые владельцы четвероногих домашних питомцев проводят курсовое профилактическое применение Нуклеопептида прямо перед вставками или соревнованиями. Шерсть у животного становится гладкой, прочной, блестящей!

Правила употребления средства

В комплекте к флаконам имеется инструкция по применению. Рекомендации также должен дать ветеринарный врач. Общий порядок употребления биодобавки, следующий:

Назначение

Дозировка
1. Подготовка к
выставке
Подкожные или внутримышечные инъекции. Период: 3-5 дней 1 укол за 30 суток до мероприятия. Дозировка 0,1 – 0,2 мл на 1 кг массы тела собаки.
2. Подготовка к соревнованиям 1 укол в 2 недели, длительность курса – 6 месяцев. Затем перерыв 2-3 мес. Дозировка как указано в предыдущем варианте.
3. Профилактика При повышенном риске заболевания, стрессах и т.п. назначается 3 укола подряд (по 1 в день). Объем препарата 0,1 – 0,2 мл/кг.
4. Отит, дерматит,
иные заболевания

5-7 инъекций в комплексе с основным лечением. 

Дозировка: мелким щенкам 2-3 мл; 

средним и взрослым особям 5-10 мл.

5. Стимуляция роста
и развития щенков
Лекарство можно давать перорально, объем 2-3 мл/кг.
6. Укрепление
иммунитета
От 5 до 7 уколов (по 1 в день). Дозировка 0,1 – 0,2мл/кг

Противопоказания и побочные последствия


Прилагаемая инструкция гласит: препарат не наносит никакого вреда организму, ограничений по употреблению нет. Максимум – индивидуальная непереносимость. Встречается данное явление крайне редко.

Запрещено использовать биодобавку в стадии обострения хронического заболевания. Прежде нужно снять болевой синдром, восстановить нормальное функционирование организма.

Побочных последствий после приема биостимулятора не зафиксировано.

Положительные и отрицательные моменты


При курсовом применении препарата удается существенно улучшить состояние животного. Доказан восстановительный эффект после перенесенного тяжелого недуга. Существенно укрепляется шерсть, кожа становится более упругой.

Условный минус – нет аналога лекарства в виде таблеток или капсул.

Существующие аналоги


  1. Катозал
  2. Ронколейкин
  3. Микровитам

Отзывы


Валентина Агапова, владелица чихуахуа

Порекомендовали нуклеопептид знакомые. Ветеринар подтвердил. Попробовала? Сделали 7 уколов моей собачке, дозировка согласно инструкции. Через месяц Муся пошла на поправку.

Геннадий, владелец померанского шпица

Мой Альберт (Колли) готовился к выставке. За месяц прокололи препарат. Шерсть стала просто волшебной красоты. Надеемся на первое место. 

Ирина Петровна, пенсионерка

После перелома лапки ветеринар посоветовал курс инъекций. Попробовала. Нуклеопептид стоит недорого, эффект – ощутимый. Так что рекомендую!

Объявления на

Девочка

Девочка

Девочка

Поделитесь этой статьёй в социальных сетях

инструкция к препарату, противопоказания, отзывы

Технологии совершенствования живых организмов при помощи синтезированных пептидов и нуклеотидов работают на благо человечества в разных сферах с 1902 года. Они применяются в медицине, косметологии, сельском хозяйстве, включая ветеринарию. Результатом работы над задачей оздоровления и улучшения развития домашних животных, скота стал «Нуклеопептид». Инструкция по применению рекомендует его использовать как для мелких животных, так и для сельскохозяйственных поголовий.

Состав и свойства препарата

Что представляет собой «Нуклеопептид»? Инструкция по применению указывает на то, что он создан на основе вытяжки из внутренних органов (селезенки) быков. Благодаря синтетическим пептидным связям, он активирует иммунную и гормональную системы животного. Препарат выступает в роли адаптогена и биогенного стимулятора.

Предназначение

Сферой применения препарата являются два направления: лечение животных в сельском хозяйстве и использование для домашних питомцев. Если со скотом все понятно, то для каких зверей, живущих у людей, в их домах и сараях, применяется «Нуклеопептид»? Инструкция по применению для собак и кошек содержит указание и в отношении остальных питомцев, например, птиц.

Форма выпуска

Что представляет собой препарат «Нуклеопептид» по внешнему виду? Это жидкость, цвет которой варьируется от светло-желтого до желтовато-коричневого. Если флакон встряхнуть, то она вспенится. На дно может выпасть осадок при отстаивании, однако его структура легко разбивается. Расфасовано средство в стеклянные флаконы различной вместимости. В продаже можно встретить раствор в ампулах по 5 или 10 мл и в бутылках по 100, 200 мл.

Как принимать домашним животным «Нуклеопептид»? Инструкция по применению для кошек, собак, то есть мелких питомцев, не вводит отличия от правил для крупного рогатого скота, в этом случае меняется только схема применения.

Дозировка

Для сельскохозяйственного поголовья актуальна следующая информация.

Объем раствора на килограмм веса

Схема

Порция лекарства за 1 раз 0,1 – 0,2 миллилитра

Для идущих на откорм препарат вводят в первую треть шейного отдела.

Вводят разовую дозу один раз в полмесяца. Курс два – три месяца. За 2 недели до убоя прекращают введение препарата. Более 50 мл за раз не вводят.

Новорожденным ягнятам, телятам и поросятам препарат показан для повышения сопротивляемости организма.

Применяют обычно разовую дозу в течение трех дней.

Пушным зверькам для улучшения покровов, увеличения веса.

Для молодняка:

Один раз в день три первых дня; затем каждые полмесяца по разовой дозе течение периода всего роста.

Для взрослого животного:

Вводят каждые 5 дней по разовой дозе. Курс начинают за 30 – 45 дней до убоя.

Для домашних питомцев данные другие.

Объем раствора на килограмм веса

Схема

Порция лекарства за 1 раз 0,1 – 0,2 миллилитра

Для увеличения мышечной массы перед выставкой.

Вводят разовую дозу на протяжении 3 – 5 дней подряд за месяц до выставки.

Для роста и развития новорождённых щенков и котят, защиты от вирусных инфекций.

Дозировка в сутки для молодняка 2 – 3 мл, для особей постарше 5 – 10 мл.

Вводят коротким курсом в три дня перед кормлением.

Порция лекарства за 1 раз 0,1 – 0,2 миллилитра

В терапии хронических и вялотекущих болезней, при токсикозе беременности, лечении паразитарных заболеваний.

1 раз в сутки в течение недели в сочетании с курсом лечения.

0,5 – 2 миллилитра

Птицам при недомоганиях, выпадении перьев.

Однократно в сутки, внутрь, на протяжении 3–5 дней.

Показания

Биопрепарат применяется:

  • для увеличения прироста массы тела;
  • с целью улучшения состояния шерсти;
  • при токсикозе при беременности;
  • если имеет место отставание в развитии и росте;
  • для повышения сопротивляемости организма;
  • в борьбе с паразитарными инфекциями.

Каких результатов ожидать от препарата «Нуклеопептид»? Инструкция по применению, отзывы подтверждают, что с его применением сроки откорма уменьшаются, увеличиваются почти до 25 % суточные привесы мышечной массы, улучшается качество шкурки у пушных зверей и сокращается падеж скота.

Противопоказания и побочные эффекты

Когда и почему нельзя назначать «Нуклеопептид»? Инструкция по применению указывает на следующие случаи:

  • когда имеется индивидуальная непереносимость лекарства;
  • во время проведения иммунизации;
  • острые инфекционные заболевания являются основанием для отсрочки;
  • периоды критического истощения организма.

Принимая во внимание, что в состав «Нуклеопептида» введены только натуральные природные компоненты, следует заметить, что он переносится животными легко, относится к малоопасным веществам. Однако он может вызвать нежелательную реакцию в виде аллергии и обострения имеющихся хронических заболеваний. Подобные побочные эффекты не являются основанием для отмены лечения препаратом.

Комбинирование в терапии, отзывы

Допустимо ли сочетать с другими лекарствами «Нуклеопептид»? Инструкция по применению для птиц, домашних животных и скота допускает его сочетание с химиотерапевтическими лекарственными средствами, витаминными и минеральными комплексами, а также медикаментами антибактериального спектра действия. По отзывам заводчиков, «Нуклеопептид» эффективно излечивает хронические свищи, раны, визуально улучшает качество шерсти.

Каких особые указания есть относительно приема препарата «Нуклеопептид»? Инструкция по применению напоминает, что его нельзя давать животным при наличии механических примесей или повреждении упаковки.

Инструкция по применению нуклеопептида для собаки и других домашних животных

Нуклеопептид-Экохимтех, это биоактивный ветеринарный препарат нового поколения, который является иммуностимулятором. Вырабатывается он из селезенки крупнорогатого скота, это экстракт, в состав которого входят биологически активные вещества, такие как петиды, нуклеозиды. Соединения этих веществ активно воздействуют на ферментативный процесс клеток. В инструкции по применению подробно описывается его действие.

При помощи этих синтезированных препаратов, человек пытается улучшить живые организмы, применяются они для лучшего развития домашних животных и их оздоровления.Используют синтезированные препараты в медицине, косметологии, а также и в ветеринарии. Лучшим из всех препаратов стал биоактивный препарат Нуклеопептид, инструкция по применению которого рекомендует использовать это лекарственное средство как для мелких домашних животных, собак, кошек, пушных зверей, так и для воспроизводства крупного сельскохозяйственного поголовья скота. Применяя препарат:

  1. У домашних животных укрепляется опорно-двигательная система.
  2. Улучшается шерстяной покров, особенно это касается тех, кто участвует в выставках.
  3. У крупнорогатого скота происходит значительный привес мышечной ткани и увеличиваются удои.

Что это за препарат

Нуклеопептид, это непрозрачная жидкость, цвет которой может быть от светло-желтого до желто-коричневого оттенка, при встряхивании препарат вспенивается, в состоянии покоя выпадает в осадок, который легко растворяется.

Выпускается нуклеопептид в стеклянных флаконах, различной дозировки, по 5, 10 и 100 мл, герметично закрытыми и упакованными в картонные коробки. Этот препарат прекрасно сочетается с другими лекарствами, не вызывает аллергических реакций,а также не токсичен,что определило его широкое применение.

Применение нуклеопептида для собак

Практически у каждого хозяина имеется в доме какое-нибудь животное, кролики, кошки, собаки и другие питомцы. Но среди всех можно выделить собак, ведь это друг человека, и они самые понятливые и любимые, поэтому постоянно нуждаются в заботе и уходе, особенно когда они еще маленькие несмышленыши. Нуклеопептид способен помочь, когда они заболеют, или когда нужно подготовить собаку для участия в выставках или других мероприятиях.

Чтобы собака была здорова и жизнерадостна, для нее необходим правильный рацион питания, но этого часто бывает недостаточно, чтобы обеспечить нормальные метаболические процессы в организме животного, еще обязательно требуются комплексные добавки биологически активных веществ. И одним из этих препаратов, который поможет нормализовать обмен веществ в организме собаки, повысить ее иммунитет, защитить от негативных влияний внешней среды, является Нуклеопептид. В инструкции по применению нуклеопептида довольно подробно расписано о способах и дозировке данного препарата для собак.

Свойства препарата

Имеется большое количество подобных препаратов, но в большинстве своем, от их применения возникают побочные эффекты, однако при использовании нуклеопептида это исключено. Так как он вырабатывается из селезенки животных, которая является органом иммунной системы, то экстракты, полученные из нее, также обладают свойствами, способными:

  1. Запускать в организме животных защитные механизмы.
  2. Повышать резервный потенциал организма, собаки, кошек и других животных.
  3. Помогать при отставании в росте и развитии.
  4. Помогать беременным сучкам при токсикозах и всевозможных интоксикациях.
  5. Помогать при некоторых заболеваниях, таких как хронический отит, экземы, свищи и так далее.
  6. Помогать активизировать антитоксические функции печени.

Показания к применению

Нуклеопептид применяют как для крупнорогатого, так и для мелкорогатого скота, а также дают свиньям с целью увеличения мышечной массы при откорме, для молодняка, для резистентности. Собакам и кошкам, для ускорения роста, улучшения шерстного покрова, при кожных заболеваниях. Применяют его и в комплексном лечении, так как препарат хорошо сочетается с другими лекарствами.

Способ применения

Перед непосредственным применением препарат рекомендуется встряхивать. Животным, которые идут на откорм, нуклеопептид вводится непосредственно под кожу, согласно инструкции. Новорожденным котятам и щенята, вводится непосредственно в ротовую полость, подращенным животным нуклеопепдид вводится подкожно или перорально. Использовать это лекарство можно постоянно не более полугода, после чего необходим перерыв в течение двух-трех месяцев, и только после этого возможно возобновление применения.

Побочные эффекты

В большинстве случаев побочные эффекты отсутствуют, за исключением гиперчувствительности животного, в этом случае может возникнуть аллергическая реакция. Не рекомендуется применять лекарственный препарат при острых инфекционных заболеваниях, в период иммунизации, и при сильном истощении.

Хранение препарата

Хранить это лекарственное средство необходимо в недоступном для детей месте, избегая попадания на него прямых солнечных лучей, также подальше от пищевых продуктов и кормов для животных. Оптимальная температура от 2 до 25 градусов, согласно инструкции, срок годности составляет 2 года, открытое лекарство хранят в холодильнике не более суток. Нельзя использовать данное средство, если на флаконе имеются механические повреждения, посторонние примеси и осадок.

инструкция по применению, противопоказания, отзывы

Технологии оздоровления живых организмов с помощью синтетических пептидов и нуклеотидов работают на благо человечества в различных областях с 1902 года. Они используются в медицине, косметике, сельском хозяйстве, в том числе ветеринарии. Результатом работы над задачей реабилитации и оздоровления домашних животных, крупного рогатого скота стал «Нуклеопептид». Инструкции по применению рекомендуют его использование для мелких животных и сельскохозяйственных популяций.

Структура и свойства препарата

Что такое «нуклеопептид»? В инструкции по применению указано, что он создан на основе экстрактов внутренних органов (селезенки) быков. Благодаря синтетическим пептидным отношениям он активирует иммунную и гормональную систему животного. Препарат действует как адаптоген и стимулятор питательных веществ.

В составе препарата содержится:

  • Пептид;
  • нуклеозиды;
  • Основание нуклеотида;
  • Кислота органическая.

«Нуклеопептид» контролирует обменные процессы в организме животного за счет того, что увеличивает до уровня физиологических пределов концентрацию андрогенных и тиреоидных гормонов. В результате приема препарата, стимулирующего рост и развитие организма животного, тиреоидные гормоны оказывают мощное влияние на обмен веществ, усиливая регенеративные процессы, рост и дифференциацию тканей. Пептиды (короткие цепи альфа-аминокислот) оказывают регулирующее действие на организм, тем самым показывая пользу для здоровья при аутоиммунных и хронических заболеваниях животных.За счет выработки интерферона повышается сопротивляемость иммунной системы, устойчивость к ядовитым и ядовитым веществам. Улучшение состояния кожи и волос.

Рекомендуется

Что делать, если у вас потрескалась кожа на руках?

Каждый из нас хоть раз в жизни сталкивается с небольшой, но очень, когда трещина на коже на руках. В это время появляются раны разного размера, которые болят и доставляют неудобства, особенно при контакте с водой или моющими средствами....

Назначение

Сферой применения препарата являются две области: лечение животных в сельском хозяйстве и использование для домашних животных. Если крупный рогатый скот чист, то для каких животных, живущих в своих домах и сараях, использовали «Нуклеопептид»? Инструкции по применению для собак и кошек содержат ссылку на остальных домашних животных, например птиц.

Форма выпуска

Как выглядит препарат «Нуклеопептид»? Это жидкость, цвет которой варьируется от светло-желтого до желтовато-коричневого.Если бутылку встряхнуть, она пенится. При стоянии на дне может выпадать осадок, однако его структура легко нарушается. Средство расфасовано в стеклянные флаконы разного размера. На рынке можно найти раствор в ампулах по 5 или 10 мл и во флаконах по 100, 200 мл.

Как усыновить питомца «Нуклеопептид»? Инструкция по применению для кошек, собак, то есть мелких домашних животных, не вносит отличий от правил для крупного рогатого скота, в данном случае меняет только схему использования.

Дозировка

Сельскохозяйственное животноводство следующая соответствующая информация.

Объем раствора на килограмм веса

Схема

Подача лекарства на 1-й раз 0,1 - 0,2 на миллилитр

Достигнув откорма, препарат вводят в первая треть шейного.

Вводят разовую дозу один раз в две недели. Курс два-три месяца. За 2 недели до убоя прекратить прием препарата. Более 50 мл за один раз, не вводят инъекционно.

Новорожденные ягнята, телята и свиньи - препарат, улучшающий сопротивляемость организма.

Применение обычной разовой дозы в течение трех дней.

Пушные животные для улучшения кожного покрова, набора веса.

Для молодых

Один раз в день первые три дня; затем каждые две недели для однократного периода просто роста.

Для взрослого животного.

Вводится каждые 5 дней однократно. Курс начинать за 30-45 дней до убоя.

Другие данные для домашних животных.

Объем раствора на килограмм веса

Схема

Первая порция лекарства 0,1 - 0,2 на миллилитр

Для увеличения мышечной массы до выставка.

Разовая доза Принимается за 3-5 дней подряд в месяц до выставки.

Для роста и развития новорожденных щенков и котят, защита от вирусных инфекций.

Дозировка в день для молодняка 2 - 3 мл, для лиц старше 5 - 10 мл.

Введите короткий курс за три дня до кормления.

Подача лекарств 1 раз 0,1 - 0,2 на миллилитр

При лечении хронических и вялотекущих заболеваний, при токсикозе беременных, лечении паразитарных заболеваний.

1 раз в день в течение недели в сочетании с курсом лечения.

A 0,5-2 миллилитра

Птицы с недугами, потерей оперения.

Один раз в день, перорально, в течение 3-5 дней.

Показания

Биопрепарат используется:

  • Для увеличения прироста массы тела;
  • Для улучшения состояния волос;
  • Токсикоз при беременности;
  • Если есть задержка в развитии и росте;
  • Для повышения сопротивляемости организма;
  • В борьбе с паразитарными инфекциями.

Каких результатов ожидать от препарата «Нуклеопептид»? Инструкции по использованию, отзывы подтвердили, что при его применении сроки кормления уменьшаются почти до 25% от суточного прироста безжировой мышечной массы, улучшается качество шкурок пушных зверей и снижается падеж домашнего скота.

Противопоказания и побочные эффекты

Когда и почему не назначать «Нуклеопептид»? Инструкция по применению указывает на следующие случаи:

  • При индивидуальной непереносимости лекарств;
  • Во время иммунизации;
  • Острые инфекционные заболевания являются основанием для отсрочки;
  • Критические периоды истощения.

Учитывая, что в «Нуклеопептид» введены только натуральные компоненты, следует отметить, что он легко переносится животными, относится к малоопасным веществам. Однако может вызвать нежелательную реакцию в виде аллергии и обострения имеющихся хронических заболеваний. Эти побочные эффекты не являются основанием для отмены медикаментозного лечения.

Отзывы о комбинированной терапии

Можно ли сочетать с другими препаратами «Нуклеопептид»? Инструкция по применению для птиц, домашних животных и скота разрешает его сочетание с химиотерапевтическими препаратами, витаминно-минеральными комплексами, а также с препаратами антибактериального спектра действия.По отзывам заводчиков, «Нуклеопептид» эффективно лечит хронические свищи, раны, визуально улучшает качество шерсти.

Какие особые инструкции существуют относительно препарата «Нуклеопептид»? Инструкция по эксплуатации напоминает, что нельзя давать животным при наличии механических примесей или повреждении упаковки.

инструкция по применению, противопоказания, отзывы

Технологии улучшения живых организмов с помощью синтезированных пептидов и нуклеотидов работают на благо человечества в различных областях с 1902 года.Их используют в медицине, косметологии, сельском хозяйстве, в том числе в ветеринарии. Результатом работы над задачей улучшения и улучшения развития домашних животных, животноводства стал «Нуклеопептид». Инструкция по применению рекомендует применять его как для мелких животных, так и для сельскохозяйственных культур.

Состав и свойства препарата

Что такое нуклеопептид? В инструкции по применению указано, что он был создан на основе рисунка из внутренних органов (селезенки) быков.Благодаря синтетическим пептидным связям он активирует иммунную и гормональную системы животного. Препарат действует как адаптоген и биогенный стимулятор.

В составе лекарственного средства содержится:

  • пептидов;
  • нуклеозидов;
  • оснований нуклеотидов;
  • кислоты органические.

«Нуклеопептид» контролирует процессы метаболизма в организме животного за счет того, что на уровне физиологических пределов увеличивается концентрация андрогенных и тиреоидных гормонов.В результате приема препарата стимулируется рост и развитие организма животного, тироидный гормон оказывает мощное влияние на обмен веществ, усиливая регенеративные процессы, рост и дифференциацию тканей. Пептиды (короткие цепи альфа-аминокислот) обладают регулирующим действием на организм, тем самым проявляя лечебный эффект при аутоиммунных и хронических заболеваниях животного. За счет выработки интерферона повышается устойчивость иммунной системы к токсическим и токсическим веществам.Происходит улучшение состояния кожи и волос.

Назначение

Сфера применения препарата двоякая: лечение животных в сельском хозяйстве и использование для домашних животных. Если с крупным рогатым скотом все понятно, то для каких животных, живущих в людях, в их домах и сараях, применяется «Нуклеопептид»? Инструкции по применению для собак и кошек содержат рекомендации для других домашних животных, например птиц.

Форма выпуска

Что такое нуклеопептид? Внешний вид? Это жидкость, цвет которой варьируется от светло-желтого до желтовато-коричневого.Если флакон встряхнуть, он пенится. Осадок может оседать на дно при отстаивании, но его структура легко нарушается. Продукт расфасован в стеклянные бутылки различной вместимости. В продаже можно найти раствор в ампулах по 5 или 10 мл и во флаконах по 100, 200 мл.

Как принимать «Нуклеопептид» домашним животным? Инструкция по применению для кошек, собак, то есть мелких домашних животных, не вводит отличий от правил для крупного рогатого скота, в этом случае изменяется только схема применения.

Дозировка

Следующая информация актуальна для сельскохозяйственных животных.

Объем раствора на килограмм веса

Схема

Порция лекарства на 1 раз 0,1 - 0,2 миллилитра

Для тех, кто переходят к откорму, препарат вводят в первую треть шейного отдела.

Вводят разовую дозу один раз в полмесяца.Курс составляет два-три месяца. За 2 недели до убоя прекратить введение. Больше 50 мл за один раз не вводят.

Новорожденным ягнятам, телятам и поросятам препарат показан для повышения сопротивляемости организма.

Применяют обычно однократно в течение трех дней.

Пушные звери для улучшения покрова, прибавки в весе.

Для молодняка:

Один раз в день, первые три дня; затем каждые полмесяца по однократной дозе на период всего роста.

Для взрослого животного:

Вводят каждые 5 дней для однократной дозы. Курс начинается за 30-45 дней до убоя.

Для домашних животных данные другие.

Объем раствора на килограмм веса

Схема

Порция лекарства на 1 раз 0,1 - 0,2 миллилитра

К увеличить мышечную массу перед шоу.

Вводят разовую дозу за 3-5 дней подряд в месяц до выставки.

Для роста и развития новорожденных щенков и котят, защиты от вирусных инфекций.

Дозировка в день для молодых 2 - 3 мл, для лиц старше 5 - 10 мл.

Ввести короткий курс за три дня до кормления.

Порция лекарства на 1 раз 0,1 - 0,2 миллилитра

В терапии хронических и вялотекущих заболеваний, при токсикозах беременности, лечении паразитарных заболеваний.

1 раз в сутки в течение недели в сочетании с курсом лечения.

от 0,5 до 2 миллилитров

Птицы с недугами, перья.

1 раз в сутки внутрь в течение 3-5 дней.

Показания

Используется биопрепарат:

  • для увеличения массы тела;
  • для улучшения состояния шерсти;
  • при токсикозе при беременности;
  • Если есть отставание в развитии и росте;
  • для повышения сопротивляемости организма;
  • в борьбе с паразитарными инфекциями.

Каких результатов ожидать от препарата «Нуклеопептид»? Инструкция по применению, отзывы подтверждают, что при его применении сокращаются сроки откорма, достигается до 25% суточного привеса, улучшается качество шкурок пушных зверей, снижается падеж поголовья.

Противопоказания и побочные эффекты

Когда и почему нельзя назначать нуклеопептиды? В инструкции по применению указаны следующие случаи:

  • при индивидуальной непереносимости препарата;
  • во время иммунизации;
  • острые инфекционные заболевания являются основанием для отсрочки;
  • периоды критического истощения организма.

Учитывая, что в «Нуклеопептид» введены только натуральные компоненты, следует отметить, что он легко передается животными, относится к веществам с низким уровнем риска. Однако может вызвать нежелательную реакцию в виде аллергии и обострения имеющихся хронических заболеваний. Такие побочные эффекты не являются основанием для отмены медикаментозного лечения.

Комбинация в терапии, отзывы

Допустимо ли комбинировать с другими препаратами «Нуклеопептид»? Инструкция по применению для птиц, домашних животных и домашнего скота допускает его сочетание с химиотерапевтическими препаратами, витаминно-минеральными комплексами, а также с лекарственными средствами антибактериального спектра действия.По отзывам заводчиков, Нуклеопептид эффективно лечит хронические свищи, раны, визуально улучшает качество шерсти.

Какие конкретные инструкции существуют относительно введения нуклеопептида? Инструкция по применению напоминает, что его нельзя давать животным при наличии механических примесей или повреждений упаковки.

p>

Нейропептиды контролируют переходы между фазами жизни

Рост к взрослой жизни происходит в основном через одну или несколько промежуточных стадий или личиночных форм.Управляемые сигналами окружающей среды и внутреннего состояния, все животные в течение своей жизни претерпевают один или несколько переходов, которые сопровождаются изменениями морфологии, физиологии и поведения. Поселение личинок у кольчатых червей Platynereis dumerilii является ярким примером такого перехода между фазами жизни. В PNAS Conzelmann et al. (1) показывают, что оседание личинок находится под контролем миоингибиторного нейропептида (MIP), продуцируемого нейросекреторными клетками в головном мозге животного.

Platynereis - новый модельный организм для изучения развития и поведения животных.Этот морской кольчатый червь принадлежит к Lophotrochozoa, третьей по значимости ветвью двуногих животных после Ecdysozoa (насекомые и нематодные черви) и Chordata (ланцетники, оболочники и позвоночные). Исследование генома показало, что гены Platynereis более тесно связаны с генами позвоночных, чем с генами насекомых или нематод. Урбилатерийский предок протостомов и дейтеростомов, вероятно, имел сложные, богатые интронами гены, которые все еще присутствуют у Platynereis и человека, но были потеряны в геномах насекомых и нематод (2).ЦНС Platynereis имеет сложную молекулярную архитектуру с таковой у позвоночных, что подразумевает, что предок urbilaterian также обладал хорошо развитой ЦНС (3). Platynereis сохранил древние сенсомоторные цепи с низким уровнем интеграции, а также комбинированные типы сенсорно-нейросекреторных клеток, которые также обнаруживаются в переднем мозге позвоночных (4, 5). Кроме того, сенсорно-ассоциативные центры головного мозга кольчатых червей, известные как грибовидные тела, демонстрируют глубокую гомологию с корой головного мозга позвоночных, что указывает на то, что происхождение высших мозговых центров также восходит к добилатериальным временам (6).

Platynereis личинки плавают в течение нескольких дней как планктон, дважды меняют форму, а затем превращаются в крупных сегментированных червей. Поселение личинок - это процесс, при котором личинка планктона перестает плавать, исследует, прикрепляется к субстрату и начинает свою бентосную жизнь (7). Переход к следующему этапу жизненного цикла - событие динамическое. Личинки могут отклонить одно место и выбрать другое для заселения. Такой выбор активного сайта часто опосредуется сигналами окружающей среды. Хотя различные химические вещества, включая белки, свободные жирные кислоты, полисахариды, неорганические ионы и нейротрансмиттеры, были предложены в качестве индукторов поселения личинок у морских кольчатых червей, до сих пор не было выявлено никаких внутренних регуляторов.

Самым разнообразным классом сигнальных молекул в ЦНС являются нейропептиды, короткие последовательности аминокислот, которые действуют посредством связывания и активации рецепторов, связанных с G-белком (8). Действуя как гормоны, нейротрансмиттеры или нейромодуляторы, нейропептиды участвуют во многих биологических процессах, таких как воспроизводство, метаболизм, питание, циркадные ритмы, сенсомоторная интеграция, адаптивное поведение и познание. Стало ясно, что многие нейропептидергические системы сохранились во всем животном мире (9).

Подобно личинкам большинства морских беспозвоночных, личинок Platynereis плавают с помощью ленты ресничек. Ресничные клетки иннервируются аксонами нейронов, содержащих нейропептиды, в ЦНС. Conzelmann et al. подвергали плавающих личинок воздействию различных синтетических нейропептидов и обнаружили, что они влияют на цилиарное плавание (10). Эволюционно консервативный нейропептид MIP представляет особый интерес, потому что он запускает остановку биения ресничек и индуцирует исследовательское ползание по субстрату - две особенности, типичные для поведения поселенцев личинок.Воздействие MIP не индуцировало личиночное поселение плавающих личинок, у которых рецептор MIP был сбит специфическим морфолиноолигонуклеотидом, который стерически блокирует трансляцию мРНК при связывании с транскриптами рецептора MIP. Conzelmann et al. (1) пришли к выводу, что воздействие MIP обходит химические сигналы окружающей среды, ответственные за время поселения личинок, и что MIP запускает поведенческую программу поселения личинок, функционально активируя свой рецептор, связанный с G-белком, экспрессируемый в клетках, прилегающих к клеткам, содержащим MIP.

Нейропептиды MIP характеризуются мотивом W-X 6–8 -вамид (11). В Platynereis последний, но не первый остаток триптофана (W) является решающим для активации рецептора MIP и, следовательно, индукции оседания личинок. Первый нейропептид MIP был идентифицирован в 1991 г. у саранчи Locusta migratoria и, как было обнаружено, ингибирует мышечные сокращения in vitro (12). MIP (также называемые аллатостатином B и проторацикостатином) принадлежат к суперсемейству нейропептидов Wamide, которое содержит (G) LWamides и многие другие пептиды типа Wamide, имеющие общий амидированный остаток триптофана, которому предшествует небольшой алифатический остаток.Пептиды семейства Wamide встречаются у всех исследованных животных эуметазоана. Интересно, что у книдарий (полипы, медузы, кораллы и морские анемоны) нейропептиды LWamide называются метаморфозинами и, как было показано, вызывают как поселение личинок (13, 14), так и метаморфоз личинок планулы во взрослые полипы (15). Нокаут LWamides у личинок полипа приводит к неспособности к метаморфозам. Хотя на сегодняшний день нейропептиды у аметазо не обнаружены, воздействие нейропептидов книдарий LWamide вызывает поселение личинок в губках, что указывает на то, что хемосенсорная коммуникация также играет роль в способности личинок губок определять подходящую среду обитания (16).У насекомых нейроны, содержащие MIP, ответственны за инициирование и выполнение шелушения, формы перехода жизненной фазы. Здесь нейропептид MIP был предложен для подавления нейронов, которые не требуются во время программы шелушения (17). Также было показано, что MIP насекомых ингибируют синтез ювенильного гормона in vitro (18), что указывает на стимулирующую роль в переходе к взрослой жизни. Все эти исследования показывают, что нейропептидергический контроль MIP / Wamide над изменениями жизненного цикла, по-видимому, эволюционно сохраняется с момента его наследования от последнего общего предка всех животных.

Используя последовательную трансмиссионную электронную микроскопию 664 ультратонких срезов, Conzelmann et al. показывают, что нейроны, экспрессирующие MIP, расположенные в самой передней части мозга Platynereis , являются как сенсорными, так и нейросекреторными (1). Такие типы клеток с двойными сенсорно-нейросекреторными свойствами, вероятно, явились отправной точкой для эволюции и диверсификации нейросекреторных центров мозга у двунаправленных животных (5). MIP-клетки Platynereis также экспрессируют факторы транскрипции dimm и orthopedia , которые, соответственно, управляют дифференцировкой нейроэндокринных пептидергических клеток MIP в Drosophila (19) и гипоталамических нейропептидергических нейронов (20 нейронов у млекопитающих). ).Интересно, что семейство пептидов Wamide связано с семейством нейропептидов билатерального адипокинетического гормона / гонадотропин-рилизинг-гормона (GnRH) (21). Выравнивания аминокислот показывают общую общую архитектуру (сигнальный пептид, активный пептид, связанный пептид) с аналогичной вторичной структурой случайной спирали α-спирали (22). У млекопитающих, включая человека, активация нейронов гипоталамического ГнРГ из состояния относительного покоя является критической

Отчет Conzelmann et al.представляет собой большой шаг вперед в нашем понимании молекулярных механизмов, лежащих в основе переходов жизненного цикла.

для начала полового созревания, перехода жизненного цикла от юноши к взрослой у млекопитающих (23).

Поведенческие реакции генерируются путем интеграции и обработки информации через определенные нейронные цепи. Нейропептиды могут изменять поток информации по этим клеточным цепям, тем самым адаптируя поведенческий выход в соответствии с изменяющимися сигналами окружающей среды и внутреннего состояния (24).Таким образом, можно точно настроить переходы между жизненными фазами, чтобы они происходили в оптимальных условиях. Основная нейронная цепь, которая генерирует поселение личинок в Platynereis , модулируется передачей сигналов MIP. MIP-контролируемая регуляция перехода между стадиями жизни у Platynereis сравнима с контролируемым LWamide поселением у книдарий, MIP-контролируемым поведением шелушения у насекомых и контролируемым GnRH началом полового созревания у млекопитающих (). Таким образом, это нейропептидергическое переключение образа жизни, опосредованное MIP / Wamide, имеет глубокие эволюционные корни и восходит к предкам организмов эвметазоа, которые жили в море несколько сотен миллионов лет назад.На протяжении эволюции разнообразные поведенческие репертуары контролируемых нейропептидами переключений жизненных фаз могли быть приобретены за счет диверсификации сенсорных модальностей и за счет пространственно-временной регуляции экспрессии нейропептидных рецепторов. В отчете Conzelmann et al. (1) представляет собой большой шаг вперед в нашем понимании молекулярных механизмов, лежащих в основе переходов жизненного цикла. Нейропептидергический контроль над сложным поведением на клеточном и молекулярном уровне только начинается, и необходимы исследования различных модельных организмов, чтобы понять механизмы и корни нейронной коммуникации в нашем собственном мозгу.

MIP-контролируемая регуляция перехода между стадиями жизни у Platynereis сравнима с контролируемым LWamide поселением у книдарий, MIP-контролируемым поведением шелушения у насекомых и GnRH-контролируемым началом полового созревания у млекопитающих.

Сеть и поведенческие действия GdFFD, нейропептида, содержащего D-аминокислоты

В настоящем исследовании мы охарактеризовали действие GdFFD на локомоторную сеть Aplysia как в изолированной ЦНС, так и у интактных животных.Вместе с предыдущей работой [27], наши результаты показывают, что GdFFD действует в двух разных нейронных цепях, чтобы влиять на выражение двух видов поведения, то есть кормления и передвижения.

Видеоанализ поведения с помощью компьютерных программ

В ходе исследования мы поняли, что эффекты GdFFD на локомоторные программы в изолированной ЦНС не могут быть однозначно переведены на влияние на локомоторное поведение. Таким образом, физиологический анализ эффектов GdFFD в изолированной ЦНС был недостаточным, и необходимо было непосредственно оценить влияние GdFFD / GFFD на поведение.Для этого мы сначала разработали установку для регистрации поведения, которая позволяет Aplysia свободно перемещаться в камере с регулируемой температурой. Мы записывали на видео поведение Aplysia с помощью камеры в течение 30 минут или дольше. Мы разработали программу видеоанализа для отслеживания локомоторного пути животного и автоматического расчета его маршрута.

В настоящее время достигнут значительный прогресс в области автоматического видеоанализа поведения с использованием компьютерных программ, и некоторые системы доступны на коммерческой основе.Примечательно, что Вулфер и др. [32] разработали общедоступное программное обеспечение Wintrack для выполнения численного и графического анализа локомоторных движений мышей, отслеживаемых с помощью EthoVision. Существуют также системы OpenControl [33] и ETHOWATCHER [34], применяемые к крысам. Эти две системы могут автоматически отслеживать положение крыс, определять их локомоторный путь и выполнять статистический анализ, например скорость движения, направление и время паузы. Системы видеоанализа были также созданы для омаров [44] и Drosophila [45].К сожалению, мы не можем напрямую использовать вышеуказанные системы для нашей работы в Aplysia . Во-первых, Aplysia предпочитают ползать по стенкам резервуара или близко к ним, поэтому их движения не ограничиваются одной плоскостью. Во-вторых, тела Aplysia мягкие, и их форма может значительно меняться во время движения, поэтому их тела трудно распознать только по форме. Наконец, хотя видеоанализ поведения Aplysia также был описан [38, 46, 47], в этих исследованиях не проводился автоматический анализ локомоторного пути Aplysia , что потребовало разработки нашей системы программного обеспечения.

Применение нашей недавно разработанной компьютерной программы для изучения действия нейропептидов на локомоторное поведение ясно продемонстрировало полезность нашей системы. Программа количественно определяет поведение Aplysia , в частности, вычисляет локомоторный путь. В частности, из видеозаписей Aplysia , полученных с помощью нашей специально разработанной системы записи поведения, программа исправляет искаженные изображения, распознает животное, отслеживает его путь и вычисляет скорость движения в течение определенного периода времени.Наш анализ показал, что программа устойчива. Во-первых, обнаружение Aplysia в видеокадрах устойчиво к различным помехам, включая кратковременное прерывание видеозаписи и появление нежелательных объектов в видеосцене; во-вторых, смещение кадра видео из-за незначительного движения камеры также может быть исправлено автоматически. Действительно, наш расчет локомоторного пути оказался достаточно точным, и данные пути были получены с высокой точностью. Таким образом, наша программа не только упрощает / ускоряет получение данных о пути движения Aplysia , но и устраняет человеческую ошибку / предвзятость, которые могут возникнуть при получении данных о пути вручную.

Программа нуждается в улучшении. Например, мы хотели бы ускорить время работы программного обеспечения. В настоящее время на анализ 6-минутного видео при 30 к / с уходит около 10 минут. Кроме того, функции программы несколько ограничены по сравнению с некоторыми другими доступными системами. В частности, мы хотели бы разработать более удобный интерфейс. Несмотря на некоторые ограничения, программа обладает всеми необходимыми функциями для автоматического анализа локомоторного пути Aplysia по видеозаписям в поведенческой камере.

Модулирующие действия GdFFD на питание и движение

Ранее [27] мы впервые охарактеризовали действие пептида, содержащего D-аминокислоту, в четко определенной цепи. В частности, мы показали, что только GdFFD, но не GFFD, активирует двигательные программы эгестивного типа в цепи питания Aplysia . Интересно, что хотя GdFFD / GFFD не присутствуют в клеточных телах нейронов буккального ганглия, который содержит центральный генератор паттернов питания, мы обнаружили, что они присутствуют в отростках в буккальном ганглии, которые, по-видимому, происходят из GdFFD / GFFD-положительных нейронов. в другом месте (e.г., педальный узел). Таким образом, GdFFD действует как внешний модулятор в питающей сети Aplysia .

В этой статье мы показали, что GdFFD также действует в локомоторной сети Aplysia , хотя, вероятно, как внутренний модулятор, потому что GdFFD-положительные нейроны присутствуют в педальных ганглиях. В изолированной ЦНС GdFFD, но не GFFD, усиливает сетевую активность, представленную активностью PPCN, вызывая всплески, напоминающие локомоторные программы. Однако это также увеличивало активность между всплесками.Есть два возможных способа интерпретации этих эффектов in vitro . Во-первых, усиление взрывной активности в PPCN может указывать на усиление двигательной активности. Во-вторых, значительная активность между импульсами, индуцированная GdFFD, отличается от активности PPCN, индуцированной стимуляцией нерва P9, с гораздо более слабой активностью между вспышками. Таким образом, это наблюдение может свидетельствовать о другом поведенческом эффекте, то есть о потенциальном нарушении передвижения. Единственный способ разрешить эту двусмысленность - непосредственно исследовать, что GdFFD может сделать с локомоторным поведением.Поэтому мы провели поведенческие эксперименты и использовали нашу компьютерную программу для количественной оценки локомоторного пути Aplysia в отсутствие и в присутствии пептидов, то есть GFFD / GdFFD. Мы обнаружили, что только GdFFD является биологически активным, а GFFD - нет, что согласуется с результатами, полученными для изолированных препаратов ЦНС. Насколько нам известно, данные о питании аплизий [27] и локомоторных цепях могут быть одной из первых демонстраций того, что D-аминокислота в пептиде должна быть биоактивной в двух разных цепях (см. Также [48]).Более того, мы обнаружили, что GdFFD фактически снижает, а не увеличивает двигательную активность. В самом деле, в присутствии GdFFD, Aplysia сохраняла изогнутую позу, очевидно, неспособная двигаться, что вполне может быть вызвано, по крайней мере частично, слишком большой общей, а не ритмической мотонейрональной активностью (т.е. PPCN).

Таким образом, одним из наиболее важных выводов настоящей работы является то, что оценка действий нейромодуляторов в нервных цепях должна включать поведенческие эксперименты.Это особенно верно в случаях, когда активность, индуцированная нейромодулятором в изолированной ЦНС, отличается от спонтанной или индуцированной нервом активности, и, таким образом, поведенческое значение активности in vitro неоднозначно. За прошедшие годы было проведено большое количество исследований в нескольких модельных системах [2, 5, 8, 9], изучающих, как нейромодуляторы влияют на различные CPG. Хотя были предприняты некоторые попытки непосредственно наблюдать поведенческие эффекты модуляторов [49–53], по большей части работа была сосредоточена на in vitro препаратах.Для поведенческих исследований, локомоция Aplysia хорошо подходит для автоматического анализа с использованием компьютерных программ. Таким образом, наше исследование предлагает отличный пример, для которого комбинированный физиологический и поведенческий подход может быть плодотворным.

Еще одно важное следствие нашей работы состоит в том, что мы ясно показали, что одни и те же нейропептиды могут оказывать существенное действие во многих нервных цепях, то есть питании и перемещении. И кормление, и передвижение являются мотивированным поведением, поскольку их выражение находится под влиянием множества внутренних факторов, включая нейромодуляторы [2–9].Например, в Aplysia кормление можно регулировать серотонином и рядом пептидов. Аплизия локомоция также модулируется серотонином [41, 54], тогда как нейропептиды, которые действуют на локомоцию, менее изучены [55-57]. В настоящее время среди известных нейромодуляторов, возможно, действие серотонина изучено лучше всего, и серотонинергические нейроны при кормлении, передвижении и отмене действуют согласованно, способствуя установлению состояния возбуждения [5, 16].Что касается GdFFD, еще предстоит определить, в какое состояние GdFFD может вносить вклад. Интересно, что GdFFD вызывает двигательную активность как в пищевой, так и в опорно-двигательной сети. При кормлении GdFFD, по-видимому, способствует эгестии [27], тогда как при передвижении он способствует позу свернувшись калачиком и фактически снижает передвижение. Возможно, эти эффекты будут способствовать установлению абстинентного состояния, при котором Aplysia отказываются от пищи, а затем остаются в замкнутом пространстве, возможно, чтобы избежать хищников. В будущем было бы интересно определить, какие нейроны, содержащие GdFFD, ответственны за эти действия и при каких условиях эти нейроны, содержащие GdFFD, могут быть активными.Ответ на эти вопросы поможет нам лучше понять, в какое поведенческое состояние GdFFD может способствовать. Помимо тонических эффектов экзогенного GdFFD, продемонстрированного в этой статье, также могут иметь место альтернативные способы действий GdFFD. Во-первых, нормальное высвобождение нейропептида может происходить из нейронов, содержащих GdFFD, которые демонстрируют ритмический паттерн активности, что приводит к фазовым действиям GdFFD. Во-вторых, GdFFD может действовать совместно с другими нейромодуляторами. В любом случае GdFFD может потенциально способствовать движению, а не уменьшать его.

В более общем смысле эта работа предоставляет доказательства того, что посттрансляционная изомеризация от L- до D-аминокислоты в нейропептиде, где она существует, обычно требуется для биоактивности пептида, вероятно, потому что изомеризованный пептид может связывать к рецептору с более высоким сродством, чем его полностью состоящий из L-аминокислот эпимер [28, 58–63].

границ | Пять нейропептидных лигандов встречаются с одним рецептором: как это соотносится? Исследование взаимосвязи структура-активность с использованием адипокинетических биоанализов на сфингидном моли, Hippotion eson

Введение

Нейропептидные гормоны - это биологически активные пептиды, которые синтезируются в модифицированных нейронах и высвобождаются в систему кровообращения для осуществления действия через лиганд-специфический рецептор.У насекомых нейроны сердечного тела (CC) синтезируют и выделяют нейропептиды, принадлежащие к семейству адипокинетического гормона (AKH) / красного гормона, концентрирующего пигмент (RPCH), названного так за их классическое действие по мобилизации топливных метаболитов из накоплений в жире. тела насекомых для катаболических целей и для их действия на покровные пигментные клетки ракообразных для маскировки (3). У насекомых AKH могут иметь разную длину цепи (окта-, нона- и / или декапептиды), тогда как RPCH у ракообразных на сегодняшний день встречаются только в виде октапептидов, и в обеих группах животных лиганд действует через G-белок. рецептор на эффекторной клетке (4).

Семейство пептидов AKH насчитывает более 60 членов, и некоторые из этих пептидов могут быть общими для различных отрядов насекомых, например Peram-CAH-I (один из так называемых кардиоускорительных гормонов в Periplaneta americana ) синтезируется в примитивном насекомые (5), тараканы (6, 7) и жуки (8, 9). С другой стороны, определенные AKH являются уникальными для одного отряда насекомых, как в случае с девятью отдельными отрядами AKH-членами (см. Таблицу 1) чешуекрылых, в состав которых входят мотыльки и бабочки.Многие виды чешуекрылых (особенно на личиночной стадии жизненного цикла насекомых) считаются насекомыми-вредителями, которые конкурируют за человеческие ресурсы питания. Можно предусмотреть производство «зеленого пестицида», который вреден для чешуекрылых, но не для других насекомых, особенно для полезных видов-опылителей, таких как некоторые перепончатокрылые или двукрылые (журчалки) насекомые. Смысл использования «зеленых пестицидов» в обеспечении продовольственной безопасности заключается в использовании информации об эндогенных гормонах насекомых-вредителей для создания пептидных миметиков, которые будут действовать только против насекомых-вредителей, изменяя их поведение или физиологию (15).Таким образом, для таких исследований крайне важно знать, как рецептор AKH чешуекрылых активируется его лигандами. В текущем исследовании мы исследуем такие явления для рецептора AKH видов бабочек. Здесь мы рассматриваем данные, опубликованные ранее (1, 2), и дополняем их дальнейшими исследованиями аналогов, проводимыми по 11 аналогам, которые ранее не тестировались. Выбранный вид моли - это обыкновенная полосатая ястребиная моль, Hippotion eson .

Таблица 1 . Пептиды семейства специфических для чешуекрылых адипокинетических гормонов (AKH).

Пять лет назад мы продемонстрировали с помощью масс-спектрометрии с электрораспылением, что H . eson и серебристо-полосатая ястребиная моль, H. celerio , каждая производит рекордное количество из пяти различных AKH в их соответствующих телах cardiaca (1). Пять AKH идентичны у этих видов ястребиной моли, и биологическая активность нейропептидов была исследована с химически синтезированными пептидами только у более распространенных видов, H. eson . Синтетические пептиды также использовали для подтверждения последовательности зрелых AKH ястребиной моли [см. Таблицу 1; (1)].Все пять пептидов были активны в низкой дозе, увеличивая концентрацию циркулирующих липидов у взрослых H. eson в состоянии покоя, в то время как концентрация углеводов существенно не влияла. Хотя это еще не доказано, весьма вероятно, что существует только один рецептор для всех пяти AKH в H. eson . Это имело место у всех других насекомых, у которых рецептор, связанный с G-белком, был идентифицирован как рецептор AKH (AKHR), независимо от количества кодируемых последовательностей AKH - см., Например, Marchal et al.(16) где показана информация AKHR для Aedes aegypti с 1 лигандом и Schistocerca gregaria с 3 лигандами. AKHR H. eson , таким образом, является интересным кандидатом для изучения в отношении взаимодействий лигандов и может дать нам представление о том, каковы структурные ограничения для адекватных взаимодействий рецептор-лиганд, чтобы вызвать биологический ответ. Имея это в виду, функциональное исследование с H. eson было начато, когда декапептид AKH от водяного клопа, Lacsp-AKH [pGlu-Val-Asn-Phe-Ser-Ser-Pro-Ser-Trp-Gly-Gly амид, (17)], с пятью аминокислотными заменами по сравнению с эндогенным декапептидом ястребиной моли, Manse-AKH-II, не показал адипокинетической активности в H.eson (1), тогда как декапептид от другого чешуекрылого насекомого (Lacol-AKH: три аминокислотных замены по сравнению с Manse-AKH-II; таблица 1) был столь же активен, как и эндогенный AKH H. eson (2). Настоящее исследование является продолжением для выяснения лигандных критериев наиболее эффективного функционального ответа, то есть адипокинетического действия. Существует тенденция оценивать активность нейропептидов только на основе их первичной последовательности и заряда конкретных аминокислот, тогда как известно, что нейропептиды претерпевают конформационные изменения, чтобы получить «активную конформацию» после стыковки с рецептором (18). .В настоящем исследовании мы пытаемся принять во внимание такие конформационные изменения с помощью наших аналоговых дизайнов, чтобы определить конечную активность и функциональные свойства модифицированного AKH у сфингидной бабочки. Аналоги AKH основаны на последовательности Lacol-AKH (расширенная Gly версия эндогенного Manse-AKH H. eson , см. Таблицу 1) и исследуют изменения N-конца пептида, включая N -конечно укороченные аналоги, а также ряд аналогов с единственной заменой на Ala во всех положениях пептида, за исключением положений 2 и 3 - замены в этих положениях, как ранее было показано, оказывают сильное отрицательное влияние на мобилизацию липидов в ЧАС.eson , как и аналоги, укороченные на С-конце (2).

Материалы и методы

Насекомые

Яйца и личинки обыкновенной полосатой ястребиной моли, H. eson , на листьях арумовой лилии, Zantedeschia aethiopica , были собраны в течение австральных месяцев мая и июня 2015 и 2016 годов на винограднике Buitenverwachting (Констанция). , Южная Африка), а также в собственности Кейптаунского университета и выращивается в Кейптаунском университете (Рондебош, С.Африка). Материал помещали в комнату с постоянной температурой Отделения биологических наук, и насекомых выращивали в следующих условиях: 30 ° C, относительная влажность 60% и режим фотоцикла: 17 часов света: 7 часов темноты. Личинок выращивали на свежесрезанных листьях арумовой лилии (в банке с водой) в клетке из проволочной сетки с деревянным полом и размерами 45 × 40 × 45 см (Д × В × Ш). Ежедневно заменяли листья и удаляли фекалии из клетки. Куколок помещали в отдельные небольшие контейнеры в одном помещении для выращивания.В описанных контролируемых условиях содержания взрослые бабочки вылупились между 11 и 12 днями после окукливания (H. G. Marco и G. Gäde, неопубликованный результат) и были использованы в биологических анализах на следующий день при комнатной температуре.

Это исследование было проведено в соответствии с соответствующими институциональными и национальными руководящими принципами и правилами, касающимися использования животных в научных исследованиях.

Биологический анализ

Конспецифический биоанализ проводили, как описано ранее (1).Вкратце, взрослые особи H. eson обоих полов, которые вылупились ночью, были использованы для биологических анализов на следующий день. Клетку с вылупившимися моли доставили в лабораторию и оставляли при комнатной температуре на 1 ч перед отбором проб. В это время бабочки не проявляли активности. Отдельных бабочек удаляли из клетки по одной: 0,5 мкл гемолимфы отбирали из брюшного дорсального сосуда и помещали в концентрированную серную кислоту; затем моли вводили вентро-латерально в брюшную полость 3 мкл либо воды, либо исследуемых синтетических пептидов (восстановленных в воде до концентрации 10 пмоль в 3 мкл), и моли помещали под воронку при комнатной температуре и оставили там до тех пор, пока второй образец гемолимфы не будет взят через 90 мин после инъекции.Гемолимфа была тщательно смешана с серной кислотой, и общий ванилин-положительный материал (= липиды) был измерен в смеси, как описано ранее (19). Количество бабочек на инъекцию колебалось от 5 до 8 (см. Подробную информацию о количестве n в таблицах 2–4).

Таблица 2 . Биологический эффект N-конца Lacol-AKH у обыкновенной полосатой ястребиной моли, Hippotion eson .

Разницу в концентрации липидов до и после инъекции рассчитывали для каждого отдельного животного, и для расчета статистической значимости в Excel использовали тест Стьюдента T .

Синтетические пептиды

Пептиды были синтезированы на заказ компанией Pepmic Co. Ltd (Сучжоу, Китай). Основные конструкции см. В таблицах 2–4. Синтетические пептиды основаны на декапептиде под кодовым названием Lacol-AKH, который ранее был обнаружен как эндогенный AKH в Lacanobia oleracea и Mamestra brassicae (11). Lacol-AKH на 100% активен в H. eson , как показали анализы липид-мобилизации in vivo, и ранее использовался в исследованиях структура-активность с H.eson (2). Lacol-AKH отличается по трем параметрам от эндогенного декапептида в H. eson , т.е. Manse-AKH-II, который также присутствует у всех исследованных к настоящему времени сфингидных бабочек, и первых восьми и девяти аминокислотных остатков Lacol- AKH, соответственно, на 100% идентичны эндогенному октапептиду (Hipes-AKH-I) и нонапептиду (Manse-AKH) в H. eson [Таблица 1; (14)].

Обоснование дизайна синтетических пептидов, используемых в этом исследовании, заключается в следующем: ранее (2) мы исследовали эффект конкретных аминокислотных замен, которые кумулятивно происходят в Lacsp-AKH, AKH водяного клопа, который не активен в H .eson (1) и обнаружил, что вторая (Leu) и третья (Thr) аминокислоты относительно важны для биологической активности у сфингидной моли, а также Trp 8 . Здесь мы разработали Ala-замещенные аналоги Lacol-AKH для систематического изучения относительной важности заряда и боковых цепей в положениях 1 и 4-7. Дополнительные аналоги разработаны для тестирования эффекта Lacol-AKH без pGlu в положении 1 и нонапептидов, которые отличаются на N-конце. Ранее мы изучали влияние различной длины пептидной цепи на гиперлипемическую активность in vivo с использованием аналогов, которые были удлинены на С-конце, или усечены, или со свободным С-концом (2).Всего в настоящем исследовании впервые исследуются 11 различных аналогов (последовательности см. В таблицах 2–4).

Выравнивание последовательностей рецепторов адипокинетического гормона

Мы выровняли аминокислотные последовательности AKHR шести родов чешуекрылых (мотыльки и бабочки). Последовательности AKHR были получены в результате поиска BLAST. Множественное выравнивание последовательностей с иерархической кластеризацией выполняли с использованием MultAlin версии 5.4.1 (20).

Результаты

Биологический эффект N-конца Lacol-AKH в

H.eson Пептиды

AKH характеризуются pGlu в положении 1. Считается, что это эффективный блок против экзопептидаз в гемолимфе насекомого, приводящий к более длительному периоду полужизни пептида (21). Аналоги Lacol-AKH были разработаны для конкретного исследования того, как на мобилизацию липидов влияют изменения N-концевой аминокислоты декапептида. Результаты показаны в таблице 2. Когда N-концевой pGlu заменяется свободным остатком Glu, адипокинетическая активность лиганда резко снижается со 100% до всего лишь 23% активности in vivo , тогда как свободный остаток Gln в положении 1 все еще имел сильный биологический эффект более 60% активности AKH по сравнению с максимальным ответом.Напротив, липиды не были мобилизованы в H. eson , когда N-концевой pGlu заменяется другим блокированным остатком Glu (а именно, ацетилированным Glu), или когда свободный остаток Ala заменяет pGlu в положении 1.

Значение укороченных на N-конце аналогов Lacol-AKH

Функциональные AKH состоят из восьми, девяти или 10 аминокислот; H. eson синтезирует AKH со всеми этими длинами цепей, и все эти пептиды, как было обнаружено, являются биологически активными в биотесте с учетом специфики (1).Биологический эффект более коротких цепей (6- и 7-мер) был ранее исследован с усеченными на С-конце амидированными аналогами Lacol (2). Здесь относительная важность первых трех N-концевых остатков конкретно исследуется в H. eson с аналогами Lacol-AKH, которые имеют один отсутствующий остаток (либо pGlu 1 , Leu 2 , либо Thr 3 ). , эффективно продуцирующий амидированный нонапептид.

Ни один из четырех аналогов нонапептида Lacol-AKH не смог достичь высокого увеличения концентраций циркулирующих липидов и активности AKH по сравнению с инъекцией Lacol-AKH в H.eson был значительно ниже 40% (таблица 3). Без pGlu 1 пептидный аналог, который теперь начинается со свободного аминокислотного остатка Leu, был активен на 35%, и эта активность дополнительно снижалась до 12%, когда остаток Leu блокировался N-ацетилированием. Возврат pGlu 1 в сочетании с отсутствием Leu 2 или Thr 3 в качестве аналогов приводил к активности 36 и 25% соответственно (таблица 3).

Таблица 3 . Биологическое действие аналогов Lacol-AKH, укороченных на N-конце, у обыкновенной полосатой ястребиной моли, Hippotion eson .

Биологический эффект замены отдельных аминокислот в Lacol-AKH

Относительную важность средней области (аминокислоты 4–8) Lacol-AKH исследовали с помощью серии аналогов, в которых одна аминокислота была замещена остатком аланина (таблица 4). Таким образом, мы можем сделать выводы об относительной важности боковых цепей исходных С-концевых остатков в активации рецептора AKH ястребиной моли. Замена остатка ароматической аминокислоты на Ala (т.е.e., Phe 4 или Trp 8 ) полностью устраняли активность AKH (таблица 4). Ala 6 вместо Ser 6 приводил к заметному снижению биологической активности (25%), тогда как замена Ala в положении 5 или 7 более переносилась с относительной активностью 95 и 67% соответственно (таблица 4).

Таблица 4 . Биологический эффект одиночных аминокислотных замен в Lacol-AKH у обыкновенной полосатой ястребиной моли, Hippotion eson .

Обсуждение

Предыдущие исследования показали, что все пять идентифицированных AKH обыкновенной полосатой ястребиной моли, H. eson , активны в конспецифических биологических анализах для значительного увеличения концентрации липидов в гемолимфе (1). Это указывает на степень толерантности неизвестного здесь рецептора H. eson AKH к адаптации (i) различий в длине пептидной цепи октапептидов (Hipes-AKH-I и -II), нонапептидов (Hipes-AKH-III и Manse- AKH) и декапептид (Manse-AKH-II; пептидные структуры см. В таблице 1), а также (ii) для конкретных аминокислотных замен в положениях 5 (полярный и нейтральный Ser или Thr) и 7 (Ser, Thr , или Gly) исконных АКХ.Когда декапептид AKH из совочной моли (Lacol-AKH) был на 100% активен в отношении H. eson , но Lacsp-AKH, декапептид AKH из водяного клопа не был (1), это представляет собой интригующий случай для выяснения причин. за потерю биологической активности. Таким образом, было начато исследование с Lacol-AKH в качестве ведущего пептида для изучения влияния на адипокинетическую активность каждой из трех аминокислот Lacsp-AKH, которые отличались от AKH Hippotion , а именно. Val 2 , Asn 3 и Pro 6 (2): Pro 6 вместо консервированного Hippotion Ser 6 практически не повлиял на адипокинетическую активность, в то время как Val 2 или Asn 3 вместо консервированных Leu 2 и Thr 3 резко снизили биологическую активность H.eson . Поскольку Lacol-AKH и Lacsp-AKH оба имеют Gly 10 вместо Gln Hippotion , Gln 10 , и поскольку Lacol-AKH так же активен, как эндогенный декапептид H. eson AKH (Manse-AKH-II ) эта замена не исследовалась. Другая замена в положении 10 в Manse-AKH-II, а именно объемный и основной остаток Lys (K 10 -Manse-AKH-II), по-прежнему обладал 75% гиперлипемической активностью, что позволяет предположить, что основные различия в заряде, размере и боковая цепь (Gly, Gln, Lys) не сильно влияет на активность, и что 10-й остаток не важен для взаимодействия с H.рецептор AKH eson и его активация (2). Эти более ранние исследования, таким образом, также показали, что N-концевые аминокислотные остатки весьма важны для функции лиганда in vivo ; однако они сами по себе не составляют функционального корового пептида, о чем свидетельствует значительно сниженная активность амидированных усеченных на С-конце лигандов Lacol-AKH (6- и 7-мерные пептиды) (2). Настоящее исследование развилось на основе вышеупомянутой работы с H. eson и аналогами Lacol-AKH для более тщательного изучения эффекта структура-активность N-концевых и N-концевых остатков в AKH чешуекрылых и изучения роли боковых цепей и заряда аминокислотных остатков в средней и С-концевой части AKH чешуекрылых в биологической активности.Такая информация важна для рассмотрения вопроса о производстве биостабильных пептидных миметиков, которые могут связывать или блокировать рецепторы AKH, особенно у насекомых-вредителей, таких как чешуекрылые.

Адипокинетический анализ in vivo , использованный в данном исследовании, очень надежен, и мы использовали его ранее с другими чешуекрылыми, такими как Mamestra brassicae (22) и Pieris brassicae (14). Несмотря на переменный начальный уровень липидов во вновь появившихся взрослых особях H. eson (через 24 часа или меньше после эклозии), явное увеличение уровней циркулирующих липидов может быть измерено у отдельных бабочек с помощью ряда аналогов Lacol-AKH, протестированных в настоящее исследование; статистически значимые адипокинетические ответы в целом попадают в две категории относительно максимального ответа, который вызывается той же дозой ведущего пептида, Lacol-AKH: 20-40% и выше 60%.

Важность N-конца Lacol-AKH для биологической активности

H. eson

Среди характерных особенностей пептидов AKH - их заблокированные концы: пироглутаминовая кислота (pGlu) в положении 1 и амидированный С-конец. Такой блокированный лиганд менее чувствителен к экзопептидазам в гемолимфе насекомого и, следовательно, приводит к более длительному периоду полужизни пептида для достижения его гормонального эффекта. В текущем исследовании аналоги Lacol-AKH были специально разработаны для изучения того, как на мобилизацию липидов влияют изменения N-концевой аминокислоты.Когда N-концевой pGlu был заменен свободным остатком Glu, адипокинетическая активность лиганда упала до 23% активности in vivo ; сам по себе этот результат можно интерпретировать как подтверждение того, что пептид, не блокированный на N-конце, подвергался ферментативной деградации. Против этой интерпретации выступает только тот результат, что свободный остаток Ala в положении 1 не был способен мобилизовать липиды в H. eson в той же степени, что и свободный аналог Glu 1 , что позволяет предположить, что аналог с Слегка гидрофобный остаток Ala 1 имеет совершенно иную активную конформацию, чем аналог с полярным и отрицательно заряженным остатком Glu 1 , и, следовательно, взаимодействие лиганд-рецептор еще больше нарушается.В качестве альтернативы, данные могут быть интерпретированы как то, что аналог Ala 1 разлагается экзопептидазами намного быстрее, чем аналог Glu 1 , и / или что Glu 1 может медленно превращаться в pGlu in vivo , чтобы по-прежнему достигать необходимая конформация для связывания и активации AKHR. Кроме того, аналог с другим блокированным N-концом (ацетилированный Glu 1 ) не смог мобилизовать липиды в H. eson , таким образом, не смог значительно активировать AKHR, несмотря на то, что пептид был заблокирован на N-конце, чтобы замедлить деградацию. [текущее исследование и (2)].Этот результат предполагает, что аналог ацетила не имеет необходимой конформации для доступа к сайту связывания рецептора, и согласуется с более ранним исследованием, в котором Lee et al. (23) обнаружили, что разблокированный аналог Glu 1 -AKH был более активен, чем аналог N- [ацетил] Glu 1 -AKH у саранчовых in vivo . Результаты на других насекомых также показали более низкую биологическую активность при замене pGlu другими блокированными остатками (24, 25). Однако наиболее удивительным было наблюдение, что свободный Gln 1 Lacol-AKH в текущем исследовании достиг почти двух третей максимальной биологической активности.Это сильный индикатор того, что Gln был преобразован в pGlu в гемолимфе либо ферментативно, глутамилциклазами, либо спонтанно (26) и, таким образом, мог задерживать деградацию пептида и активировать AKHR через подходящую конформацию. Поскольку аналоги Glu 1 и Gln 1 AKH вводили в H. eson в той же концентрации 10 пмоль, а Gln 1 продуцировал в три раза более высокую биологическую активность, чем Glu 1 , мы можем сделать вывод, что Gln является предпочтительным аминокислотным остатком для превращения в pGlu.Давно известно, что N-концевые остатки Glu и Gln многих биологически активных пептидов и белков могут образовывать pGlu путем внутримолекулярной циклизации, и экспериментальные данные за несколько лет, рассмотренные Abraham и Podell (27), по-видимому, указывают на то, что либо глутаминовая кислота (Glu) или глутамин (Gln) является прямым предшественником pGlu, в зависимости от экспериментальной системы. Циклизация катализируется ферментом, который называется глутамилциклаза (QC), хотя этот фермент также катализирует превращение глутамата в pGlu, следовательно, он также является эффективной глутамилциклазой (EC) (28).То, что Gln, по-видимому, является предпочтительным субстратом для QC у насекомых и ракообразных, по-видимому, также очевидно из аминокислотной последовательности, кодируемой мРНК для последовательностей предшественников AKH, известных на сегодняшний день [см., Например, (4, 29)].

В заключение, наше исследование окончательно показало, что N-концевой остаток pGlu имеет решающее значение для правильного представления лиганда AKH его рецептору для достижения и поддержания полной биологической активности.

Важность N-концевых аминокислот для биологической активности, обусловленная укороченными аналогами с N-концами

Хотя нонапептиды хорошо связываются с рецептором Hippotion AKH и достигают полной или 75% биологической активности [Manse-AKH и Hipes-AKH-III, соответственно; (1)], искажение N-конца свободным или заблокированным Leu в качестве остатка 1 или даже пептидами с pGlu в качестве N-конца, но без Leu 2 или Thr 3 , не привело к более чем посредственным (> 36%) активность в текущем исследовании.Как утверждалось ранее (24, 30), очень важно иметь чередующуюся амфифильную ориентацию полярной (pGlu 1 , Thr 3 , Thr 5 ) и гидрофобной (Leu 2 , Phe 4). ) аминокислот в 5 положениях на N-конце с образованием бета-цепи (31–33). Еще одна причина плохого адипокинетического ответа (20-40%) при взаимодействии с первыми тремя аминокислотами на N-конце может быть прямым следствием смещения ароматической аминокислоты из положения 4 в положение 3 во всех наших нонапептидных аналогах. протестировано в настоящем исследовании.Phe 4 , по-видимому, важен для всех AKH, поскольку это одна из консервативных характеристик AKH (см. Также раздел «Важность боковых цепей отдельных аминокислот для биологической активности AKH»).

Важность боковых цепей отдельных аминокислот в биологической активности AKH

Ранее с H. eson было показано, что (i) замена Leu 2 на другой алифатический полярный остаток с более короткой боковой цепью, такой как Val, отрицательно влияет на активность аналога AKH, тогда как биологический активность почти восстановилась до полной активности, когда был введен стереоизомер Ile 2 , и (ii) замена нейтрального остатка Thr 3 другой нейтральной аминокислотой, Asn 3 , привела к очень низкой биологической активности (2), таким образом, предполагая важность правильных боковых цепей в положениях 2 и 3 лиганда для взаимодействия с рецептором AKH.Аналогичное жизненное значение этих остатков можно сделать из более ранних исследований активации рецептора in vitro у насекомых, а также в системе AKH / RPCH ракообразных (4, 30). Ароматические аминокислотные остатки в положении 4 (Phe; данное исследование) и положении 8 (Trp; (2)) AKH также важны, как было ранее обнаружено во всех других исследованиях структуры-активности и рецепторов насекомых [например: ( 24, 25, 30, 34)] и рачка (4). Также неудивительно, что все известные природные лиганды AKH имеют ароматическую аминокислоту в положениях 4 (Phe или Tyr) и 8 (Trp) [см. (35) обзор].Замена полярного Thr 5 на слегка гидрофобный Ala 5 в аналоге AKH очень хорошо переносилась в текущем исследовании, как и в случае системы ракообразных (4). В других системах насекомых, однако, изменения в положении 5 AKHs привели к сильной потере активности, вероятно, из-за отсутствия H-связывания отсутствующей гидроксилированной боковой цепи (24, 30). Предполагается, что остаток 5 является краеугольным камнем бета-поворота, начиная с остатков с 5 по 8. Предыдущие исследования структуры и активности с AKH также показали, что остаток 6 (Pro) важен для активности в системах насекомых, тогда как остаток 7 (Asp, Ala) оказались несущественными (24, 30).Ведущий пептид в этом исследовании, Lacol-AKH, как и все другие AKH, специфичные для чешуекрылых, за исключением одного (а именно, Bommo-AKH; Таблица 1), не содержит остатка Pro 6 ; если он введен, снижение биологической активности не измеряется в H. eson (2), что позволяет предположить, что либо бета-поворот не является необходимым для конформации лиганда для связывания с рецептором, либо Ser 6 также может чтобы образовать такой виток, хотя общеизвестно, что Pro является предпочтительным остатком для этого образования [см. (34)].Простой Ala в положении 6 не может обеспечить такую ​​конформацию, и, следовательно, активность в данном исследовании значительно снижена. Остаток 7, как и в других системах (4, 24, 30), по-видимому, не участвует в каком-либо H-связывании или другом взаимодействии с рецептором AKH / RPCH, и, следовательно, аналог Ala 7 обладает полной активностью в H. eson в текущем исследовании.

AKH чешуекрылых и их когнитивные рецепторы

На примере таких модельных видов насекомых, как саранча и табачная роголистная моль, хорошо известно, что AKH выделяются в гемолимфу во время эпизодов полета (36, 37), а от саранчи также известно, что три эндогенных AKH совместно локализованы. в одних и тех же секреторных гранулах кардиального тела (CC) и, следовательно, высвобождается одновременно и в том же соотношении, что и при хранении (38).По аналогии предполагается, что все пять эндогенных AKH H. eson высвобождаются вместе во время полета и в том же соотношении, что и в CC [т.е. Hipes-AKH-I: Hipes-AKH-II: Manse -AKH: Hipes-AKH-III: Manse-AKH-II как 46: 30: 19: 8: 1; см. рисунок 2 в (1)]. Как показано ранее (1), все 5 AKH активны и вызывают гиперлипемию у моли, таким образом, пептиды должны связываться с рецептором, связанным с G-белком (GPCR), чтобы, наконец, активировать липазу, как описано ранее (39). Все ли они связываются с одним и тем же рецептором? Хотя AKHR от ряда различных видов насекомых был идентифицирован или предсказан в рамках проектов секвенирования генома [см., Например, (40, 41)], только один специфический высокоаффинный AKHR был обнаружен для каждого вида, за исключением некоторые Diptera, у которых были идентифицированы различные варианты сплайсинга.Последние варианты сплайсинга AKHR, однако, не обладают сильно различающимися связывающими свойствами при экспериментальном исследовании (29, 42–44). Таким образом, постулируется, что существует только один AKHR для H. eson , с которым связываются все пять эндогенных лигандов. Хотя этот рецептор не был клонирован и данные не получены, существуют другие AKHR чешуекрылых, охарактеризованные или предсказанные по геному. Рисунок 1 иллюстрирует выравнивание семи AKHR бабочка / мотылек. Консенсусная последовательность ясно показывает, насколько похожи эти рецепторы, и это верно не только для трансмембранных областей, но также и для внеклеточных петлевых областей.Область с наибольшими различиями в рецепторах AKH чешуекрылых охватывает примерно 10 аминокислот после седьмого трансмембранного домена (Рисунок 1).

Рисунок 1 . Выравнивание аминокислотных последовательностей последовательностей рецептора адипокинетического гормона чешуекрылых (AKHR). Бабочки: шелковая моль Bombyx mori = Bommo-AKHR (акк. GenBank NP_001037049 ), моль кукурузная ушатка Helicoverpa armigera (акк. GenBank XP_021200838.1 ), табачная совка 906 Spomtera Moth (GenBank в соотв.нет. XP_022815781.1 ) и табачная рогатая моль Manduca sexta = Manse-AKHR (акк. GenBank ACE00761.1 ). Бабочки: маленькая белокочанная бабочка Pieris rapae (акк. GenBank XP_022128572.1 ), бабочка-монарх Danaus plexippus (акк. GenBank OWR46881.1 ) и азиатская бабочка-парусник Papillio xuthus Papillio xuthus (Номер счета GenBank XP_013163165.1 ). Аминокислотное положение указано над остатками.Идентичные остатки между всеми рецепторами показаны красным, а консервативно замещенные остатки - синим. Штрихами обозначены пробелы, которые были введены для максимизации гомологии. Предполагаемые трансмембранные области (TM1-TM7) обозначены серыми столбиками.

На сегодняшний день все AKH, встречающиеся у чешуекрылых, уникальны для этого отряда и не были обнаружены ни в одном другом организме за пределами этого отряда. В M. sexta были идентифицированы два AKH, нонапептид Manse-AKH (10) и декапептид Manse-AKH-II (12).Оба этих AKH также синтезируются в CC H. eson (1), тогда как другие 3 H. eson AKH являются небольшими модификациями Manse-AKH (см. Таблицу 1). Поскольку AKHR M. sexta известен (45), в будущем появится возможность смоделировать взаимодействие 5 эндогенных AKH H. eson с рецептором M. sexta , используя те же методы, что и для Исследования взаимодействия лиганд-рецептор на системе AKH двукрылых насекомых, Anopheles gambiae (18), и ракообразных, Daphnia pulex (46).После создания модели текущие данные о структуре и активности этого исследования могут быть подтверждены, и такая модель, как мы надеемся, может быть использована для сужения поиска агонистов или антагонистов, включая пептидомиметики, с целью использования системы AKH / AKHR в качестве порядка. -специфический «зеленый инсектицид». Первостепенное значение для этой концепции «зеленых» инсектицидов имеет понятие специфичности и различения таких соединений: таким образом, вредное насекомое должно пострадать, но не полезное или умеренно вредное насекомое.Таким образом, одним из следующих шагов могло бы стать проведение биологических анализов (или анализов связывания рецептора in vitro) для проверки AKH чешуекрылых на перекрестную реактивность у насекомых, не являющихся вредителями. Такая информация будет иметь решающее значение для оценки возможности дальнейшего изучения взаимодействия AKH с рецептором, связанным с G-белком, у чешуекрылых с целью поиска эффективного «зеленого» инсектицида. Тот факт, что AKH чешуекрылых уникальны для этого отряда, может указывать на то, что лиганды оптимизированы для AKHR чешуекрылых, но это еще предстоит подтвердить.

Заявление об этике

Это исследование было проведено в соответствии с соответствующими институциональными и национальными руководящими принципами и правилами, касающимися использования животных в научных исследованиях. Кейптаунский университет и национальная политика запрещают использование насекомых в целях соблюдения этики животных. Тем не менее, с насекомыми обращались надлежащим образом ветеринарно.

Авторские взносы

HM и GG разработали исследование, собрали животных (яйца и личинки) и написали рукопись.GG выращивал бабочек от яйца до взрослой стадии. HM провел эксперименты и проанализировал данные. Оба перечисленных автора одобрили рукопись к публикации.

Финансирование

Эта работа финансировалась Стимулирующим грантом Национального исследовательского фонда (Претория, Южная Африка; грант номер 109204 [IFR170221223270] для HM и 85768 [IFR13020116790] для GG) и Кейптаунским университетом (блочные гранты для HM и ГГ). Мы благодарим госпожу Алуханьо Ксонти за помощь в выращивании Hippotion eson .

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Список литературы

1. Геде Г., Шимек П., Кларк К.Д., Марко Х.Г. Пять функциональных адипокинетических пептидов, экспрессируемых в сердечном теле моли рода Hippotion (Lepidoptera, Sphingidae). Regul Pept. (2013) 184: 85–95. DOI: 10.1016 / j.regpep.2013.03.029

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

2. Марко Х.Г., Геде Г. Взаимосвязь между структурой и активностью адипокинетических аналогов гормона у полосатой ястребиной моли. Hippotion eson. Пептиды . (2015) 68: 205–10.

PubMed Аннотация | Google Scholar

3. Gäde G, Marco HG. Глава 28. Беспозвоночные семейства АКХ / РПЧ: обновленная глава. В: Кастин А.Ю., редактор. Справочник по биологически активным пептидам .2-е изд. Амстердам: Elsevier (2013). п. 185–90.

Google Scholar

4. Марко Х.Г., Верлинден Х., Ванден Брок Дж., Гэде Г. Характеристика и фармакологический анализ рецептора, связанного с G-белком ракообразных: рецептора красного пигмент-концентрирующего гормона Daphnia pulex . Научная репутация . (2017) 7: 6851. DOI: 10.1038 / s41598-017-06805-9

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

5. Марко Х.Г., Шимек П., Геде Г. Адипокинетические гормоны двух существующих отрядов аптериготановых насекомых, Archaeognatha и Zygentoma. Дж. Физиология насекомых . (2014) 60: 17–24. DOI: 10.1016 / j.jinsphys.2013.11.002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

6. Скарборо Р.М., Джеймисон Г.К., Калиш Ф., Крамер С.Дж., Макинрой Г.А., Миллер К.А. и др. Выделение и первичные структуры двух пептидов с кардиоацелераторной и гипергликемической активностью из сердечного тела Periplaneta americana . Proc Natl Acad Sci USA. (1984) 81: 5575–9. DOI: 10.1073 / pnas.81.17.5575

CrossRef Полный текст | Google Scholar

7.Виттен Дж. Л., Шаффер М. Х., О'Ши М., Кук Дж. К., Хемлинг М. Е., Райнхарт К. Л. мл. И др. Структуры двух нейропептидов тараканов, определенные масс-спектрометрией с бомбардировкой быстрыми атомами. Биохимия Биофиз Рес Коммуна . (1984) 124: 350–8.

PubMed Аннотация | Google Scholar

8. Гэде Г., Келлнер Р. Метаболические нейропептиды сердечного тела картофельного жука и американского таракана идентичны. Пептиды. (1989) 10: 1287–9. DOI: 10.1016 / 0196-9781 (89)

-5

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

9.Gäde G, Marco HG. Семейство адипокинетических гормонов Chrysomeloidea: структурные и функциональные аспекты. ZooKeys. (2011) 157: 81–94. DOI: 10.3897 / zookeys.157.1433

CrossRef Полный текст | Google Scholar

10. Циглер Р., Эккарт К., Шварц Х., Келлер Р. Аминокислотная последовательность адипокинетического гормона Manduca sexta , выявленная с помощью комбинированной бомбардировки быстрыми атомами (FAB) / тандемной масс-спектрометрии. Биохимия Биофиз Рес Коммуна . (1985) 133: 337–42.DOI: 10.1016 / 0006-291X (85)

-7

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

11. Геде Г, Марко Х.Г., Шимек П., Одсли А., Кларк К.Д., Уивер Р.Дж. Прогнозируемые по сравнению с экспрессируемыми адипокинетическими гормонами и другими небольшими пептидами из сердечного тела-тела аллатума: тематическое исследование с жуками и молью. Пептиды. (2008) 29: 1124–39. DOI: 10.1016 / j.peptides.2008.03.002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

12.Weaver RJ, Marco HG, Šimek P, Audsley N, Clark KD, Gäde G. Адипокинетические гормоны (AKH) сфингидных чешуекрылых, включая идентификацию второго M. sexta AKH. Пептиды. (2012) 34: 44–50. DOI: 10.1016 / j.peptides.2012.01.009

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

13. Jaffe H, Raina AK, Riley CT, Fraser BA, Bird TG, Tseng CM, et al. Выделение и первичная структура нейропептидного гормона из Heliothis zea с гипертрехалоземической и адипокинетической активностью. Биохимия Биофиз Рес Коммуна . (1988) 155: 344–50. DOI: 10.1016 / S0006-291X (88) 81091-X

CrossRef Полный текст | Google Scholar

14. Марко Х.Г., Геде Г. Структура и функция адипокинетических гормонов большой белой бабочки Pieris brassicae . Физиол Энтомол . (2017) 42: 103–12. DOI: 10.1111 / phen.12175

CrossRef Полный текст | Google Scholar

15. Геде Г., Шимек П., Марко Х.Г. Африканский лягушонок Ptyelus flavescens (подотряд: Cicadomorpha) содержит два новых и один известный пептид семейства адипокинетических гормонов: структура, функция и сравнение с AKH тли (подотряд: Stenorrhyncha). Аминокислоты. (2017) 49: 1679–90. DOI: 10.1007 / s00726-017-2461-y

CrossRef Полный текст | Google Scholar

16. Маршал Э., Шелленс С., Монжон Э., Брюнинкс Э., Марко Х. Г., Геде Г. и др. Анализ специфичности пептидного лиганда рецепторов различных адипокинетических гормонов насекомых. Int J Mol Sci . (2018) 19: 542. DOI: 10.3390 / ijms1

  • 42

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    17. Марко Х.Г., Шимек П., Геде Г. Первый декапептидный адипокинетический гормон (AKH) у Heteroptera: новый AKH из южноафриканского клопа-блюдца, Laccocoris spurcus (Naucoridae, Laccocorinae). Пептиды. (2011) 32: 454–60. DOI: 10.1016 / j.peptides.2010.10.015

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    18. Mugumbate G, Jackson GE, van der Spoel D, Kövér KE, Szilágyi L. Anopheles gambiae , гормон Anoga-HrTH, свободная и связанная структура - эксперимент ядерного магнитного резонанса. Пептиды. (2013) 41: 94–100. DOI: 10.1016 / j.peptides.2013.01.008

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    19.Холверда Д.А., ван Дорн Дж., Бинаккерс AMT. Характеристика адипокинетических и гипергликемических веществ из сердечного тела саранчи. Биохимия насекомых . (1977) 7: 151–7. DOI: 10.1016 / 0020-1790 (77)

    -7

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    21. Oudejans RCHM, Vroemen SF, Jansen RFR, Van der Horst DJ. Адипокинетические гормоны саранчи: переносчик-независимый транспорт и дифференциальная инактивация при физиологических концентрациях во время покоя и полета. Proc Natl Acad Sci USA. (1996) 93: 8654–9. DOI: 10.1073 / pnas.93.16.8654

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    22. Fónagy A, Marco HG, König S, Gäde G. Биологическая активность и идентификация нейропептидов в нейросекреторных комплексах насекомых-вредителей капусты, Mamestra brassicae (Noctuidae; Lepidoptera). Acta Biol Hung. (2008) 59: 385–402. DOI: 10.1556 / ABiol.59.2008.4.1

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    23.Ли MJ, Cusinato O, Luswata R, Wheeler CH, Goldsworthy GJ. N-концевые модификации AKH-I из Locusta migratoria : оценка биологической активности in vivo и in vitro . Регул Пепт . (1997) 69: 69–76. DOI: 10.1016 / S0167-0115 (97) 02130-7

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    24. Gäde G, Hayes TK. Отношения между структурой и активностью для Periplaneta americana гипертрехалоземический гормон I: важность боковых цепей и концов. Пептиды. (1995) 16: 1173–80. DOI: 10.1016 / 0196-9781 (95) 02008-K

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    25. Зиглер Р., Кушинг А.С., Уолпол П., Ясенски Р.Д., Моримото Х. Аналоги адипокинетического гормона Manduca протестированы в биопробах и в анализе связывания рецепторов. Пептиды. (1998) 19: 481–6. DOI: 10.1016 / S0196-9781 (97) 00421-X

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    26. Schilling S, Wasternack C, Demuth HU.Глутаминилциклазы животных и растений: случай эволюции функционально конвергентных белков. Biol Chem. (2008) 389: 983–91. DOI: 10.1515 / BC.2008.111

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    27. Abraham GN, Podell DN. Пироглутаминовая кислота. Неметаболическое образование, функция белков и пептидов и характеристики ферментов, влияющих на их удаление. Клеточная биохимия . (1981) 38: 181–90. DOI: 10.1007 / BF00235695

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    28.Schilling S, Hoffmann T, Manhart S, Hoffmann M, Demuth HU. Глутамилциклазы проявляют активность глутамилциклазы в мягких кислотных условиях. FEBS Lett. (2004) 563: 191–6. DOI: 10.1016 / S0014-5793 (04) 00300-X

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    29. Кауфманн С., Мерзендорфер Х., Геде Г. Система адипокинетических гормонов у Culicinae (Diptera: Culicidae): молекулярная идентификация и характеристика двух предшественников адипокинетических гормонов (AKH) из Aedes aegypti и двух предполагаемых Culex pipiens и варианты рецепторов из A.Аджипти . Насекомое Biochem Mol Biol . (2009) 39: 770–81. DOI: 10.1016 / j.ibmb.2009.09.002

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    30. Каерс Дж., Пеэтерс Л., Янссен Т., Де Хаес В., Гэде Дж., Скуфс Л. Исследования структуры и активности адипокинетического гормона дрозофилы (AKH) с помощью клеточной системы экспрессии рецепторов AKH двукрылых животных. Gen Comp Эндокринол . (2012) 177: 332–7. DOI: 10.1016 / j.ygcen.2012.04.025

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    32.Зубжицкий И.З., Геде Г. Конформационное исследование нейропептида насекомых семейства AKH / RPCH с помощью комбинированной спектроскопии ЯМР 1H и молекулярной механики. Биохимия Биофиз Рес Коммуна . (1994) 198: 228–35. DOI: 10.1006 / bbrc.1994.1032

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    33. Cusinato OC, Drake AF, Gäde G, Goldsworthy GJ. Молекулярные конформации репрезентативных адипокинетических пептидов членистоногих, определенные с помощью спектроскопии кругового дихроизма. Насекомое Biochem Mol Biol .(1998) 28: 43–50. DOI: 10.1016 / S0965-1748 (97) 00094-5

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    34. Веленца А., Спилиу С., Поулос С.П., Голдсуорси Г.Дж. Синтез и биологическая активность аналогов адипокинетических гормонов с модификациями в районе 4–8. Пептиды. (2000) 21: 631–7. DOI: 10.1016 / S0196-9781 (00) 00200-X

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    35. Гэде Г. Пептиды семейства адипокинетических гормонов / красных пигмент-концентрирующих гормонов - новый взгляд на биоразнообразие. Энн Н. Ю. Акад. Наук . (2009) 1163: 125–36. DOI: 10.1111 / j.1749-6632.2008.03625.x

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    36. Goldsworthy GJ. Эндокринный контроль полетного метаболизма саранчи. Adv Insect Physiol . (1983) 17: 149–204. DOI: 10.1016 / S0065-2806 (08) 60218-0

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    37. Циглер Р., Шульц М. Регулирование липидного обмена во время полета в Manduca sexta . Дж. Физиология насекомых . (1986) 37: 903–8. DOI: 10.1016 / 0022-1910 (86) -X

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    38. Дидерен Дж. Х. Б., Маас Х. А., Пел Х. Дж., Шуневельд Х., Янсен В. Ф., Vullings HGB. Совместная локализация адипокинетических гормонов I и II в одних и тех же железистых клетках и в одних и тех же секреторных гранулах сердечного тела Locusta migratoria и Schistocerca gregaria . Иммуно-электронно-микроскопическое исследование. Клеточная ткань Res .(1987) 249: 379–89. DOI: 10.1007 / BF00215522

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    40. Алвес-Безерра М., Де Паула И.Ф., Медина Дж. М., Сильва-Оливейра Дж., Медейрос Дж. С., Гэде Дж. И др. Идентификация гена рецептора адипокинетического гормона и его роль в метаболизме триацилглицерина у кровососущих насекомых Rhodnius prolixus . Насекомое Biochem Mol Biol . (2016) 69: 51–60. DOI: 10.1016 / j.ibmb.2015.06.013

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    41.Каерс Дж, Верлинден Х., Зелс С., Вандерсмиссен Х.П., Веринкс К., Шуфс Л. Более двух десятилетий исследований нейропептидов GPCR насекомых: обзор. Передний эндокринол . (2012) 3: 151. DOI: 10.3389 / fendo.2012.00151

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    42. Аттардо Г.М., Бенуа Дж. Б., Михалкова В., Ян Дж., Роллер Л., Бохова Дж. И др. Анализ липолиза, лежащего в основе лактации у мухи цеце, Glossina morsitans . Насекомое Biochem Mol Biol .(2012) 42: 360–70. DOI: 10.1016 / j.ibmb.2012.01.007

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    43. Каерс Дж., Янссен Т., Ван Ромпей Л., Броккс В., Ван ден Аббеле Дж., Гэде Дж. И др. Характеристика и фармакологический анализ двух вариантов рецепторов адипокинетических гормонов мухи цеце, Glossina morsitans morsitans . Насекомое Biochem Mol Biol . (2016) 70: 73–84. DOI: 10.1016 / j.ibmb.2015.11.010

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    44.Ориан А., Вахеди А., Палуцци Дж. П.В. Функциональная характеристика и количественный анализ экспрессии двух рецепторов пептидов, родственных GnRH, у комаров, Aedes aegypti . Биохимия Биофиз Рес Коммуна . (2018) 497: 550–7. DOI: 10.1016 / j.bbrc.2018.02.088

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    45. Циглер Р., Изо Дж., Мур В., Риле М.А., Уэллс М.А. Предполагаемый рецептор AKH табачного рогатого червя, Manduca sexta , и его экспрессия. Дж. Наука о насекомых . (2011) 11:40. DOI: 10.1673 / 031.011.0140

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    46. Джексон Г.Е., Павадаи Э., Гэде Дж., Тимол З., Андерсен Н.Х. Взаимодействие красного гормона, концентрирующего пигмент, ракообразных Daphnia pulex , с его родственным рецептором, Dappu-RPCHR: ядерный магнитный резонанс и моделирование. Инт Дж Биол Макромол . (2018) 106: 969–78. DOI: 10.1016 / j.ijbiomac.2017.08.103

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    границ | Эволюция нейропептидной системы орексина: структура и функции

    Введение

    Орексины изначально считались регуляторами пищевого поведения.Впоследствии открытие, что дефицит орексина вызывает нарколепсию у нескольких видов млекопитающих, показало, что орексины играют критическую роль в регуляции состояний сна / бодрствования, особенно в поддержании бодрствования у млекопитающих. Также было показано, что орексины участвуют в регуляции широкого спектра физиологических функций, что позволяет предположить, что орексины являются многозадачными пептидами. Любое целенаправленное поведение требует определенных внутренних состояний организма, включая соответствующую настройку вегетативной нервной системы и эндокринной функции.Поддержание бодрствования и бдительности также важно для достижения определенного поведения, потому что соответствующие уровни возбуждения особенно необходимы для выполнения любого целенаправленного поведения, требующего высокой мотивации. Системы, участвующие в этих функциях, тесно связаны и связаны с системой орексинов (Sakurai, 2014). Нейроны, продуцирующие орексин (нейроны орексина), которые располагаются в LHA, получают входные данные от структур переднего мозга, включая расширенную миндалину и прилежащее ядро ​​(NAc), которые участвуют в обработке эмоций и мотивации, и отправляют выходной сигнал в области ствола мозга, которые участвуют в регуляции бодрствования.Орексиновые нейроны играют важную роль в качестве связующего звена между эмоциональными состояниями и состояниями бодрствования.

    У видов, не относящихся к млекопитающим, состояния сна / бодрствования обычно определяются исключительно поведенческими критериями, а бодрствование определяется как состояние с активным поведением. Орексины, вероятно, играют важную роль в регуляции активного поведения также у видов, не относящихся к млекопитающим, и эти факторы также считаются регуляторами бодрствования. Этот обзор посвящен тому, как структуры орексинов и их рецепторов, нейронные цепи и их функции развивались в животном мире.

    Краткое описание системы орексинов млекопитающих

    Гипоталамус играет центральную роль в комплексном контроле кормления и энергетического гомеостаза. Мы идентифицировали два новых нейропептида, оба получены из одного и того же предшественника путем протеолитического процессинга, которые связывают и активируют два тесно связанных ранее орфанных GPCR. Эти пептиды, названные орексинами A и B, не имели значительного структурного сходства с известными семействами регуляторных пептидов (Sakurai et al., 1998). Препроорексин мРНК и иммунореактивный орексин специфически локализуются в нейронах внутри и вокруг бокового и заднего гипоталамуса в мозге взрослой крысы.При централизованном введении крысам эти пептиды увеличивали потребление пищи. Уровень мРНК препроорексина повышается при голодании, что свидетельствует о физиологической роли этих пептидов как медиаторов в центральном механизме обратной связи, который регулирует пищевое поведение (Sakurai et al., 1998). Исследования молекулярного клонирования показали, что орексины A и B являются производными общего пептида-предшественника, препроорексина. МРНК, кодирующая тот же самый пептид-предшественник, была независимо идентифицирована De Lecea et al.(1998) как гипоталамус-специфический транскрипт. Авторы предсказали, что транскрипт кодирует предшественник полипептида, который расщепляется с образованием двух нейропептидов, названных гипокретин-1 и гипокретин-2 (соответствующие орексинам A и B соответственно).

    Наш структурный анализ очищенных пептидов показал, что орексин А представляет собой пептид из 33 аминокислот с N-концевым пироглутамильным остатком, двумя внутрицепочечными дисульфидными связями и С-концевым амидированием. Поразительно, но эта структура полностью сохраняется среди всех идентифицированных видов млекопитающих (человек, горилла, крыса, мышь, корова, свинья, овца, собака, тюлень и дельфин).Орексин B млекопитающих представляет собой 28-аминокислотный амидированный на С-конце линейный пептид, который также имеет высококонсервативную структуру среди видов млекопитающих. C-концевая половина орексина B очень похожа на таковую у орексина A, тогда как N-концевая половина более вариабельна (Sakurai et al., 1998) (Рисунок 2). Необычно консервативные структуры орексинов предполагают сильное эволюционное давление, которое сохраняет структуру, которая, вероятно, связана с функцией этих пептидов.

    Наиболее изученная роль орексинов у млекопитающих - регуляция состояний сна и бодрствования, особенно в поддержании длительного, консолидированного бодрствования.Это подтверждается данными о том, что дефицит орексина вызывает нарколепсию у нескольких видов млекопитающих, включая мышей, крыс, собак и людей (Chemelli et al., 1999; Lin et al., 1999; Peyron et al., 2000; Thannickal et al., 2000; Сакураи, 2007). Сон и бодрствование должны происходить в подходящее время в соответствии с внутренней и внешней средой. Избегание опасности и поиск пищи, которые являются жизненно важными действиями, регулируемыми эмоциями, вознаграждением и энергетическим балансом, требуют бдительности и, следовательно, по определению бодрствования.Система орексинов участвует в этих функциях (Sakurai et al., 1998; Yamanaka et al., 2003). Помимо этого, орексин участвует во множестве функций, включая регулирование приема пищи, эмоций, систему вознаграждения и вегетативную нервную систему. Эти функции орексинов опосредуются двумя GPCR, OX1R и OX2R. OX1R имеет большее сродство к орексину A, чем к орексину B, тогда как OX2R связывает оба лиганда с аналогичным сродством. Рецепторы орексина имеют заметно иное распределение.Они обильно экспрессируются моноаминергическими нейронами ствола головного мозга (Mieda et al., 2011). Орексиновые нейроны, которых предположительно насчитывается около 3000 в головном мозге крысы и около 70000 в мозге человека, локализованы исключительно в гипоталамусе, включая LHA, перифорниальную область и задний гипоталамус. Эти нейроны посылают широко распространенные проекции в мозг, с особенно плотными проекциями в моноаминергические и холинергические ядра в стволе мозга, где OX1R и OX2R экспрессируются по-разному.

    Функции орексинов и архитектура нейронов орексинов также высоко консервативны среди видов млекопитающих. С другой стороны, орексиноподобные гены не обнаруживаются у беспозвоночных, что позволяет предположить, что система орексина возникла у ранних позвоночных.

    Эволюция генов и пептидов орексинов

    Благодаря исследованиям генома и предыдущим исследованиям молекулярного клонирования аминокислотные последовательности орексинов у нескольких видов млекопитающих (человека, гориллы, золотой обезьяны, павиана, гиббона, мыши, крысы, свиньи, собаки, верблюда, альпаки, тюленя и дельфина) (Сакураи и др., 1998; Дайер и др., 1999; Пейрон и др., 2000; Elbers et al., 2019), а также рептилий (кобра и черепаха) (Vonk et al., 2013), земноводных ( Xenopus laevis ) (Shibahara et al., 1999), птиц (курица, индейка и зяблик ) (Ohkubo et al., 2002) и рыб (золотая рыбка, данио, треска, колюшка, медака, иглобрюх) (Kaslin and Panula, 2001).

    Гены, кодирующие препроорексин , демонстрируют высококонсервативные локусы на протяжении всей эволюции позвоночных, включая двухэкзонную структуру с более крупным экзоном 2, который включает последовательности, кодирующие орексины A и B.Экзон 1 обычно содержит 5’-UTR и часть сигнальной последовательности. В последовательности препроорексина последовательностям орексина А непосредственно предшествуют сигнальные пептиды. За обоими зрелыми пептидами следует предполагаемый консенсусный мотив С-концевого амидирования (G-R / K-R / K) (Фигуры 1, 2). С-концевые области последовательности препроорексина , следующие за последовательностью орексина, являются вариабельными для разных видов, что позволяет предположить, что в этой области не кодируются никакие другие функциональные пептиды. Орексин А крысы был очищен, и его структура проанализирована с помощью секвенирования пептидов и анализа масс-спектрометрии.Он имеет пептидную последовательность из 33 аминокислот с двумя внутрицепочечными дисульфидными мостиками, образованными четырьмя остатками цистеина (C6 – C12 и C7 – C14), N-концевым глутаматным остатком и C-концевым амидированием. Было показано, что первичная последовательность орексина А млекопитающих модифицирована, чтобы иметь N-концевой пироглутамильный остаток и C-концевое амидирование. Структура орексина А полностью сохраняется среди всех идентифицированных к настоящему времени видов млекопитающих. Орексин B млекопитающих представляет собой линейный пептид из 28 аминокислот, не имеющий дисульфидных мостиков и имеющий незначительные аминокислотные различия между видами млекопитающих.В частности, второй аминокислотный остаток - это P или S в зависимости от вида (рис. 2).

    Рисунок 1. Генная структура орексина у позвоночных. Номера хромосом (Chr), в которых расположен ген орексина, показаны у каждого позвоночного. На рисунке показана длина генных структур орексина, включая интрон (черная линия), UTR (серый), кодирующие последовательности (коричневый), экзон 1 (E1; красный) и экзон 2 (E2; синий) у разных видов (человек, мышь, крыса, собака, курица, ящерица и данио).Аминокислотные последовательности орексина A (пурпурный) и орексина B (темно-зеленый) с амидированием GKR (розовый) и / или GRR (светло-зеленый) также показаны под их кодирующими последовательностями.

    Рисунок 2. Обзор аминокислотных последовательностей орексинов позвоночных. На рисунке показаны последовательности аминокислот, кодирующих орексины A и B у разных видов (человек: Homo sapiens ; свинья: Sus scrofa ; мышь: Mus musculus ; крыса: Rattus norvegicus ; собака: Canis lupus. фамильяр ; лягушка: Xenopus laevis ; змея: Notechis scutatus ; курица: Gallus gallus ; ящерица: Anolis carolinensis ; рыба: Danio rerio ; и черепаха: picta Chrysem.Консервативная аминокислотная последовательность (темно-серый), C-концевое амидирование (GKR, розовый) и C-концевое амидирование (GRR, зеленый) выделены. Аминокислотные последовательности выравнивают по алгоритму ClustalW с использованием программного обеспечения MEGA (Stecher et al., 2020).

    Орексины не млекопитающих также очень похожи на орексин А млекопитающих, но имеют больше вариаций, чем у млекопитающих. Обычно в структуре орексина А отсутствует N-концевое пироглутамилирование из-за отсутствия N-концевого остатка глутамата.

    Последовательности орексина A птицы (курицы, индейки и зяблики) содержат 34 аминокислотных остатка и имеют два внутридисульфидных мостика (C7 – C13 и C8 – C15), в то время как последовательности орексина B представляют собой линейные пептиды из 28 аминокислот.

    У рептилий, черепах ( Terrapene carolina triunguis ) орексин A состоит из 34 аминокислот и, как предполагается, имеет структуру, аналогичную структуре орексина A млекопитающих, включая два внутридисульфидных мостика (C7 – C13 и C8 – C15), в то время как орексин B состоит из 28 аминокислот, что является таким же, как и орексин B млекопитающих. С-концевые остатки (L и M для орексинов A и B соответственно), вероятно, амидируются как орексин B млекопитающих, что предсказывается из остатков глицина, предшествующих двухосновные пары аминокислот.Змеиный (кобра) орексин А состоит из 32 аминокислот и имеет два внутридисульфидных мостика (C5 – C11 и C6 – C13).

    У земноводных орексин A Xenopus laevis представляет собой пептид с 31 аминокислотным остатком и имеет шесть аминокислотных замен по сравнению с орексином A человека (Shibahara et al., 1999). Xenopus орексин A также не имеет N-концевого пироглутаматного остатка. Относительные положения четырех остатков цистеина (положения 4, 5, 10 и 12) хорошо сохраняются, и предполагается, что они образуют две внутрицепочечные дисульфидные связи (C4 – C10 и C5 – C12).

    Последовательности орексина A костистого тела обычно намного длиннее, чем орексин A млекопитающих. Например, орексин A Fugu имеет 43 аминокислотных остатка. Орексин А золотой рыбки и рыбок данио содержит 47 аминокислотных остатков, а орексин А трески содержит 50 аминокислотных остатков. Эти более длинные последовательности обусловлены существованием дополнительной последовательности между остатками 24 и 25 (Kaslin and Panula, 2001; Xu and Volkoff, 2007). Вставленные последовательности не нарушают активность орексина (Kaslin and Panula, 2001).Поскольку орексин A костистости не содержит C12, он не имеет дисульфидной связи между C6 и C12, как обнаруживается в орексине A млекопитающих, хотя он, вероятно, образует другой дисульфидный мостик с цистеином, расположенным в положении 21. Орексин B костистости состоит из 28 аминокислот. кислотных остатков, которые аналогичны орексину B млекопитающих и других видов (Kaslin and Panula, 2001), за исключением орексина B трески (29 аминокислот) (Xu and Volkoff, 2007).

    В целом, структуры орексинов исключительно хорошо сохраняются в животном мире от рыб до млекопитающих.Костный орексин А и человеческий орексин А по-прежнему имеют более 52% аминокислотной идентичности. Длина и структура орексина B хорошо сохраняются среди видов по сравнению с орексином A, что позволяет предположить, что орексин B может быть прототипом пептидов орексина.

    Эволюция рецепторов орексина

    У млекопитающих существует два подтипа рецепторов орексина, OX1R и OX2R, оба из которых являются членами GPCR класса B. Орексин A показывает сходное сродство как к OX1R, так и к OX2R, тогда как орексин B показывает более высокое сродство к OX2R по сравнению с OX1R.Гены OX1R и OX2R человека расположены на хромосомах 1 и 6 соответственно. OX1R и OX2R человека имеют 63,5% аминокислотной идентичности. Они также имеют сходство с некоторыми другими пептидными рецепторами. Например, человеческий нейропептидный рецептор FF 1 показывает 25,1 и 31,2% аминокислотной идентичности с OX1R и OX2R, соответственно (Sakurai et al., 1998).

    OX1R встречается исключительно у видов млекопитающих и, как полагают, произошел от предкового OX2R, предположительно в результате событий дупликации генов во время эволюции ранних млекопитающих.OX2R присутствует во всех геномах позвоночных, что позволяет предположить, что OX2R является предковой формой рецепторов орексина. Хромосомная локализация этих рецепторов также предполагает, что OX1R является продуктом относительно недавнего события дупликации гена из OX2R. Фланкирующие гены OX2R (FAM83B и GFRAL) также хорошо консервативны у всех известных видов млекопитающих. Хотя гены TINAGL1 и PEF1 находятся в непосредственной близости от гена OX1R млекопитающих, они не обнаруживаются в паралогических областях в геномах не млекопитающих.

    Поскольку OX1R возник позже филогенетически, чем OX2R, он, по-видимому, играет более сложные физиологические роли.Ранее мы обнаружили, что мыши с дефицитом OX1R проявляют тревожное поведение (Abbas et al., 2015). Мы также показали, что OX1R в норадреналиновых нейронах голубого пятна (LC) играет роль в экспрессии и / или консолидации памяти о страхе, возбуждая эти нейроны, которые посылают иннервацию в боковую миндалину (Soya et al., 2013). Кроме того, этот путь также участвовал в генерализации памяти о страхе (Soya et al., 2017; Soya and Sakurai, 2018). Было также показано, что OX1R участвует в усилении реакции на условные сигналы для активации мотивационных ответов у крыс (Sharf et al., 2010; Bentzley and Aston-jones, 2015) и в кормлении на основе вознаграждения (Kakizaki et al., 2019). Эти наблюдения предполагают, что OX1R играет роль в эмоциональных и мотивационных функциях у млекопитающих.

    Эволюция нейрональной системы орексинов

    Орексиновые нейроны локализуются в LHA и прилегающих регионах, включая дорсомедиальный и задний гипоталамус, у всех видов млекопитающих (Peyron et al., 1998; Date et al., 1999; Nambu et al., 1999). Эти нейроны посылают широко распространенные проекции аксонов по всему мозгу, кроме мозжечка, с особенно многочисленными проекциями на моноаминергические ядра в стволе головного мозга.У млекопитающих нейроны орексина получают и интегрируют внутреннюю и внешнюю информацию и регулируют вегетативную и нейроэндокринную системы, чтобы соответственно стабилизировать возбуждение и поведение. Гипоталамус - это основная область, в которой локализуются орексинергические нейроны у многих видов позвоночных. У цыплят орексиновые нейроны также обнаруживаются исключительно в гипоталамусе, включая паравентрикулярное ядро ​​гипоталамуса (PVN) и LHA (Miranda et al., 2013). У рептилий нейроны орексина также находятся в гипоталамусе.У Pseudemys scripta elegans (черепаха) и Anolis carolinensis (ящерица) эти нейроны локализованы в PVN, в то время как у геккона Gekko (ящерица) эти клетки находятся в дорсомедиальных ядрах (DMH) ( Farrell et al., 2003; Domínguez et al., 2010).

    У земноводных орексины обнаружены в гипоталамусе, но широко распространены в нескольких регионах за пределами гипоталамуса. Эти клетки локализуются особенно в супрахиазматическом ядре (SCN) и в меньшей степени в преоптической области (POA) и туберальной области у бесхвостых, уроделес и гимнофионов (рис. 3).Орексин-иммунореактивные волокна иннервируют всю область головного мозга, особенно POA (Shibahara et al., 1999; Galas et al., 2001; Singletary et al., 2005; Suzuki et al., 2008; López et al., 2009) .

    Рисунок 3. Нейрональная система орексина у позвоночных высококонсервативна. Верхние квадраты показывают коронарный вид мозга с акцентом на нейроны орексина (красные точки) у разных видов (человека (Peyron et al., 2000), крысы (Nambu et al., 1999), птицы (Ohkubo et al., 2002). , амфибия (López et al., 2009) и рыб (Appelbaum et al., 2009)]. Нижние квадраты показывают сагиттальный вид мозга с акцентом на популяции орексиновых нейронов у разных видов. Стрелки показывают анатомическую ориентацию (A - передний; P - задний; D - дорсальный; V - вентральный). DMH, дорсомедиальные ядра гипоталамуса; LHA, латеральная область гипоталамуса; PaF, парафорное ядро; 3V, третий желудочек; PeF, перифорнийный гипоталамус; PHN, перивентрикулярное ядро ​​гипоталамуса; VM - вентромедиальное таламическое ядро; SC - супрахиазматическое ядро; ОК - перекрест зрительных нервов; Hd - дорсальная зона перивентрикулярного гипоталамуса; Hv, вентральная зона перивентрикулярного гипоталамуса.

    У рыб распределение нейронов орексина более изменчиво среди видов. Например, нейроны орексина локализуются в POA и SCN у двоякодышащих рыб и рыбок данио. Эти нейроны обнаруживаются в заднем ядре перивентрикулярного ядра (NPPv) в медаке и в NPPv и латеральном ядре (NLT) у золотой рыбки. У рыбок данио нейроны орексина также локализуются в дорсальной части гипоталамуса (рис. 3). Было показано, что волокна орексина иннервируют моноаминергические ядра, включая дорсальный шов (DR), LC, мезопонтиноподобную область, дофаминергические кластеры и гистаминергические нейроны в туберомаммиллярном ядре (TMN), показывая сходство с системой орексина млекопитающих (Kaslin and Panula , 2001; Huesa et al., 2005; Накамачи и др., 2006; Amiya et al., 2007; Кодзима и др., 2009). Эти данные предполагают, что нейроны орексина в основном находятся в гипоталамусе и посылают богатые проекции на моноаминергические нейроны. Эта базовая структура сохраняется при эволюции позвоночных.

    Эволюция функций орексина

    У млекопитающих нейроны орексина получают и интегрируют внутреннюю и внешнюю информацию и регулируют вегетативную и нейроэндокринную системы во время выполнения различных целенаправленных действий, требующих возбуждения.В этом разделе мы обсуждаем эволюцию системы орексина, уделяя особое внимание двум основным функциям орексина, а именно регулированию пищевого поведения и бодрствования.

    Положение о потреблении пищи и массе тела

    Орексины первоначально были описаны как факторы, регулирующие пищевое поведение, в основном потому, что нейроны орексина распределены в LHA (и прилегающих регионах), что, как известно, участвует в регуляции пищевого поведения (Sakurai et al., 1998). Орексигенный эффект интрацеребровентрикулярного (ICV) введения орексинов A и B у крыс был впервые описан в 1998 году, и этот эффект впоследствии был подтвержден у многих видов, включая млекопитающих и другие виды, включая рыб (Nakamachi et al., 2006). Важно отметить, что передача сигналов орексина увеличивает не только потребление пищи, но также и расход энергии, а повышение общего тонуса орексина обычно приводит к снижению массы тела (Funato et al., 2009). Точно так же мыши с нарколепсией, у которых отсутствует передача сигналов орексина, демонстрируют умеренное ожирение, особенно при питании с высоким содержанием жиров.

    Система орексина может вносить вклад в регуляцию энергетического гомеостаза путем интеграции информации о состоянии метаболизма и регулирования состояний сна / бодрствования для поддержки пищевого поведения (Sakurai et al., 1998; Haynes et al., 2000; Ямада и др., 2000; Яманака и др., 2003; Funato et al., 2009; Сакураи, 2014). В самом деле, мыши, лишенные нейронов орексина, не обнаруживают увеличения бодрствования или двигательной активности в ответ на голодание, в отличие от мышей дикого типа (Yamanaka et al., 2003). Более того, мРНК препроорексина активируется у голодных животных, и в нескольких исследованиях сообщается, что на скорость возбуждения орексиновых нейронов влияют глюкоза, триглицериды и аминокислоты (Chang et al., 2004; Burdakov et al., 2005; Karnani et al., 2011). Более того, нейроны орексина напрямую ингибируются лептином и возбуждаются грелином и иннервируются нейронами дугообразного ядра, которое является основным сенсором уровня лептина в плазме (Elias et al., 1998; Yamanaka et al., 2003). В совокупности эти наблюдения предполагают, что нейроны орексина воспринимают метаболический и пищевой статус животного и интегрируют эту информацию, чтобы вызвать возбуждение, необходимое для стимулирования поведения, связанного с поиском пищи, в ответ на отрицательный энергетический баланс.Точные механизмы, с помощью которых орексины регулируют пищевое поведение, подробно описаны в наших предыдущих обзорных статьях (Sakurai, 2007, 2014).

    За исключением видов млекопитающих, роль орексинов в регуляции приема пищи не очень ясна. У птиц нейроны и волокна орексина присутствуют в PVN и LHA. Это распределение сходно с распределением орексиновых нейронов млекопитающих. Однако орексины млекопитающих не увеличивают потребление пищи птицами (курицы и голуби) (Furuse et al., 1999; da Silva et al., 2008; Катаяма и др., 2010). Однако в этих исследованиях орексины вводили в течение светового периода, который является активным периодом для птиц, когда активность нейронов орексина может быть максимальной в течение дня. Это может объяснить, почему дополнительная активность орексина не увеличивала потребление пищи. Фактически, при введении в темное время суток орексины не увеличивают потребление пищи даже грызунами, которые ведут ночной образ жизни. Кроме того, необходимы исследования с использованием пептидов орексина птиц, которые структурно отличаются от орексинов млекопитающих, чтобы подтвердить, играют ли орексины роль в регуляции пищевого поведения.

    Имеется значительное количество сообщений об участии орексинов в регуляции пищевого поведения рыб. ICV-инъекция человеческих орексинов увеличивала потребление пищи золотой рыбкой (Volkoff et al., 1999; Nakamachi et al., 2006), а голодание увеличивало уровни мРНК препроорексина у рыбок данио, как и у млекопитающих (Novak et al., 2005) . Как и у млекопитающих, у рыб была обнаружена реципрокная связь между орексинами и грелином. Грелин увеличивал экспрессию мРНК препроорексина в промежуточном мозге золотой рыбки при введении ICV и наоборот (Miura et al., 2007). Прием пищи, индуцированной нейропептидом Y (NPY) и грелином, полностью ингибировался применением антагониста рецептора орексина (Miura et al., 2007). Взаимосвязь между орексином и NPY была также продемонстрирована совместной локализацией этих пептидов в NPPv (Miura et al., 2007).

    У других видов роль орексинов в регуляции пищевого поведения до сих пор не ясна.

    Регламент состояния сна / бодрствования

    Участие орексинов в регуляции состояний сна / бодрствования у млекопитающих подробно обсуждалось во многих обзорных статьях (Sakurai, 2007, 2014).Открытие того факта, что дефицит орексина вызывает нарколепсию у людей и других видов млекопитающих, таких как мыши, крысы и собаки, ясно указывает на то, что орексин играет важную роль в поддержании длительного консолидированного бодрствования у млекопитающих.

    За исключением млекопитающих, роль орексинов в регуляции состояний сна / бодрствования не очень ясна, но человеческий орексин А вызывал дозозависимые эффекты возбуждения и повышения бдительности у птиц (курицы и голуби) при введении ICV. наряду с уменьшением продолжительности поз, похожих на сон (da Silva et al., 2008; Катаяма и др., 2010).

    У рыбок данио сон обычно определяется исключительно поведенческими критериями, основанными на периодах покоя, связанных с определенной позой (Hendricks et al., 2000; Tononi, 2000; Zhdanova et al., 2001; Raizen et al., 2008). Генетическая абляция нейронов орексина продемонстрировала увеличение времени сна и переход между засыпанием и бодрствованием в дневное время без влияния на базальную двигательную активность у рыбок данио (Elbaz et al., 2012). Соответственно, глобальная сверхэкспрессия гена орексина индуцируемым промотором теплового шока показывала увеличение бодрствования, определяемое активным поведением (Prober et al., 2006). Недавнее исследование показало, что возбуждение, вызванное орексином, регулируется с помощью передачи сигналов норадреналина у рыбок данио (Singh et al., 2015). Напротив, орексины рыбок данио, как сообщается, участвуют в производстве мелатонина в шишковидной железе в темное время, чтобы регулировать консолидацию сна (Appelbaum et al., 2009). Об эволюционной потере сна сообщалось у мексиканской пещерной рыбы Astyanax mexicanus , в зависимости от их экологических условий. Люди, живущие в пещерах, слепы, и время их сна короче, чем у других людей, живущих в поверхностных реках (Duboué et al., 2011). Недавнее исследование показало, что механизм этого различия может быть связан с генетическими и нейронными изменениями орексинов в гипоталамусе (Jaggard et al., 2018).

    Другие функции

    Реакции возбуждения тесно связаны с физиологическими реакциями, вызываемыми яркими эмоциональными стимулами. Несколько исследований подтвердили участие орексинов в регулировании эмоционального поведения. О возможной роли орексинов в панических расстройствах сообщалось в исследованиях на людях и животных (Johnson et al., 2010). LHA известен как «зона защиты», и орексины выполняют функции по увеличению сердечно-сосудистой деятельности и реакции на стресс (Wilson et al., 2001; Sakamoto et al., 2004; Winsky-Sommerer et al., 2004; Zhang et al. , 2009; Сакураи, 2014). Орексиновые нейроны получают плотную иннервацию от лимбических структур, таких как BNST и миндалевидное тело (González et al., 2016; Saito et al., 2018), предполагая, что орексины регулируют вегетативные / нейроэндокринные функции в ответ на эмоциональные стимулы у млекопитающих.

    За исключением млекопитающих, роль орексинов в регуляции эмоционального поведения, вегетативной функции и нейроэндокринных функций не ясна, но на психомоторную активность золотой рыбки повлияла ICV-инъекция орексина А, что свидетельствует об анксиогенной функции орексинов. и этот эффект был отменен инъекцией антагониста OX1R (SB334867) (Nakamachi et al., 2014).

    Заключение

    Орексины играют очень важную роль в регуляции состояний сна / бодрствования у млекопитающих. Считается, что они особенно важны для укрепления бодрствования. Дефицит орексина приводит к нарколепсии, которая характеризуется неспособностью поддерживать длительное консолидированное бодрствование, что необходимо для поддержки любого целенаправленного поведения. Филогенетически орексины впервые появились у позвоночных. Похоже, они участвуют в поддержании бодрствования, чтобы добиться активного мотивированного поведения как у млекопитающих, так и у других низших видов.Даже у мышей нейроны орексина относительно неподвижны во время спокойного бодрствования, тогда как они активны во время активного бодрствования, которое сопровождает целенаправленное поведение. Это говорит о том, что орексины тесно связаны с функциями, поддерживающими активное поведение, и постоянно играют роль модуляторов поведения среди широкого круга видов.

    Авторские взносы

    SS и TS внесли свой вклад в написание и создание рисунков в этой статье и одобрили ее отправку для публикации.Оба автора внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

    Финансирование

    Это исследование было поддержано грантом JSPS KAKENHI для научных исследований (B) (JP 15H03122 и 18H02595) (TS), грантом KAKENHI для исследовательских исследований (JP 15K12768) (TS) и Грант KAKENHI на научные исследования в инновационных областях, «Willdynamics» (16H06401) (TS).

    Конфликт интересов

    Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

    Сокращения

    А, передний; BNST, ядро ​​ложа терминальной полоски; Chr - номер хромосомы; D, спинной; DMH, дорсомедиальные ядра гипоталамуса; DR - дорсальный шов; GPCR, рецептор, связанный с G-белком; Hd - дорсальная зона перивентрикулярного гипоталамуса; Hv - вентральная зона перивентрикулярного гипоталамуса; ICV, интрацеребровентрикулярный; LC, голубое пятно; LHA, латеральная область гипоталамуса; NAc, прилежащее ядро; NLT, nucleus lateralis tuberis; NPPv, nucleus posterioris periventricularis; NPY, нейропептид Y; ОК - перекрест зрительных нервов; OX1R, рецептор орексина 1; OX2R, рецептор орексина 2; P, задний; PaF, парафорное ядро; PeF, перифорнийный гипоталамус; PHN, перивентрикулярное ядро ​​гипоталамуса; POA, преоптическая зона; ПВЯ, паравентрикулярное ядро; SCN, супрахиазматическое ядро; TMN, туберомаммиллярное ядро; V, вентральный; 3V, третий желудочек; VM, вентромедиальное таламическое ядро.

    Список литературы

    Аббас, М. Г., Сёдзи, Х., Соя, С., Хондо, М., Миякава, Т., и Сакураи, Т. (2015). Комплексный поведенческий анализ мышей Ox1r - / - показал влияние рецептора орексина-1 на настроение, тревожность и социальное поведение. Фронт. Behav. Neurosci. 9: 324. DOI: 10.3389 / fnbeh.2015.00324

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Амия, Н., Амано, М., Ока, Ю., Ииго, М., Такахаши, А., и Ямамори, К. (2007). Иммуногистохимическая локализация орексин / гипокретин-подобных иммунореактивных пептидов и меланин-концентрирующего гормона в головном мозге и гипофизе медака. Neurosci. Lett. 427, 16–21. DOI: 10.1016 / j.neulet.2007.07.043

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Аппельбаум, Л., Ван, Г. X., Маро, Г. С., Мори, Р., Товин, А., Марин, В. и др. (2009). Регуляция сна и бодрствования и взаимодействие гипокретина и мелатонина у рыбок данио. Proc. Natl. Акад. Sci. США 10, 1–6. DOI: 10.1073 / pnas.7106

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Бурдаков Д., Герасименко О., Верхратский А. (2005). Физиологические изменения глюкозы по-разному модулируют возбудимость гипоталамического гормона, концентрирующего меланин, и нейронов орексина in situ. J. Neurosci. 25, 2429–2433. DOI: 10.1523 / JNEUROSCI.4925-04.2005

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Чанг, Г.К., Каратаев, О., Давыдова, З., и Лейбовиц, С.Ф. (2004). Циркулирующие триглицериды влияют на орексигенные пептиды и нейрональную активность в гипоталамусе. Эндокринология 145, 3904–3912. DOI: 10.1210 / en.2003-1582

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Чемелли Р. М., Вилли Дж. Т., Синтон К. М., Элмквист Дж. К., Скаммелл Т., Ли К. и др. (1999). Нарколепсия у мышей с нокаутом орексина: молекулярная генетика регуляции сна. Cell 98, 437–451. DOI: 10.1016 / S0092-8674 (00) 81973-X

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    да Силва, Э. С., душ Сантуш, Т. В., Хеллер, А.А., душ Сантуш, Т. С., Перейра, Г. В., Менегелли, К. и др. (2008). Поведенческие и метаболические эффекты центральных инъекций орексинов / гипокретинов у голубей ( Columba livia ). Регул. Pept. 147, 9–18. DOI: 10.1016 / j.regpep.2007.12.003

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Дате Ю., Уэта Ю., Ямасита Х., Ямагути Х., Мацукура С., Кангава К. и др. (1999). Орексины, орексигенные пептиды гипоталамуса, взаимодействуют с вегетативной, нейроэндокринной и нейрорегуляторной системами. Proc. Natl. Акад. Sci. США 96, 748–753. DOI: 10.1073 / pnas.96.2.748

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    De Lecea, L., Kilduff, T. S., Peyron, C., Gao, X. B., Foye, P. E., Danielson, P. E., et al. (1998). Гипокретины: гипоталамус-специфические пептиды с нейровозбуждающей активностью. Proc. Natl. Акад. Sci. США 95, 322–327. DOI: 10.1073 / pnas.95.1.322

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Домингес, Л., Морона, Р., Ховен, А., Гонсалес, А., и Лопес, Дж. М. (2010). Иммуногистохимическая локализация орексинов (гипокретинов) в головном мозге рептилий и ее связь с моноаминергическими системами. J. Chem. Нейроанат. 39, 20–34. DOI: 10.1016 / j.jchemneu.2009.07.007

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Дайер, К. Дж., Тушетт, К. Дж., Кэрролл, Дж. А., Алли, Г. Л., и Маттери, Р. Л. (1999). Клонирование кДНК свиного препроорексина и влияние внутримышечной инъекции синтетического свиного орексина-B на потребление корма молодыми свиньями. Внутренний. Anim. Эндокринол. 16, 145–148. DOI: 10.1016 / S0739-7240 (99) 00011-19

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Эльбаз И., Елин-Бекерман Л., Никенбойм Дж., Ватин Г. и Аппельбаум Л. (2012). Генетическая абляция гипокретиновых нейронов изменяет переходы в поведенческие состояния у рыбок данио. J. Neurosci. 32, 12961–12972. DOI: 10.1523 / JNEUROSCI.1284-12.2012

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Эльберс, Дж.П., Роджерс М. Ф., Перельман П. Л., Проскурякова А. А., Сердюкова Н. А., Джонсон В. Э. и др. (2019). Улучшение сборок Illumina с помощью Hi-C и лонгридов: пример с североафриканским дромадером. Мол. Ecol. Ресурс. 19, 1015–1026. DOI: 10.1111 / 1755-0998.13020

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Элиас, К. Ф., Сапер, К. Б., Маратос-Флиер, Э., Тритос, Н. А., Ли, К., Келли, Дж. И др. (1998). Химически определенные проекции, соединяющие медиобазальный гипоталамус и боковую область гипоталамуса. J. Comp. Neurol. 402, 442–459. DOI: 10.1002 / (sici) 1096-9861 (19981228) 402: 4 <442 :: aid-cne2> 3.0.co; 2-r

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Фаррелл В. Дж., Делвилл Ю. и Вильчински В. (2003). Иммуноцитохимическая локализация орексина в мозге зеленой ящерицы аноловой (Anolis carolinensis). Soc. Neur. Abstr. 33: 4.

    Google Scholar

    Фунато, Х., Цай, А. Л., Вилли, Дж. Т., Кисануки, Ю., Уильямс, С. К., Сакураи, Т., и другие. (2009). Усиленная передача сигналов рецептора-2 орексина предотвращает ожирение, вызванное диетой, и улучшает чувствительность к лептину. Cell Metab. 9, 64–76. DOI: 10.1016 / j.cmet.2008.10.010

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Фурус, М., Андо, Р., Банго, Т., Ао, Р., Шимодзё, М., и Масуда, Ю. (1999). Внутрицеребровентрикулярная инъекция орексинов не стимулирует прием пищи у новорожденных цыплят. Br. Пульт. Sci. 40, 698–700. DOI: 10.1080 / 00071669987115

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Галас, Л., Vaudry, H., Braun, B., Van Den Pol, A. N., De Lecea, L., Sutcliffe, J. G., et al. (2001). Иммуногистохимическая локализация и биохимическая характеристика гипокретин / орексин-родственных пептидов в центральной нервной системе лягушки Rana ridibunda. J. Comp. Neurol. 429, 242–252. DOI: 10.1002 / 1096-9861 (20000108) 429: 2 <242 :: aid-cne5 <3.0.co; 2-z

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Гонсалес, Дж. А., Иорданиду, П., Стром, М., Адамантидис, А., и Бурдаков, Д.(2016). Динамика бодрствования и прямое воздействие на мозг гипоталамических MCH и сетей орексина. Нат. Commun. 7: 11395. DOI: 10.1038 / ncomms11395

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Haynes, A.C, Jackson, B., Chapman, H., Tadayyon, M., Johns, A., Porter, R.A., et al. (2000). Селективный антагонист рецептора орексина-1 снижает потребление пищи самцами и самками крыс. Регул. Pept. 96, 45–51. DOI: 10.1016 / s0167-0115 (00) 00199-3

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Хендрикс, Дж.К., Сегал А. и Пак А. И. (2000). Необходимость простой животной модели для понимания сна. Прог. Neurobiol. 61, 339–351. DOI: 10.1016 / S0301-0082 (99) 00048-49

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Уэса, Г., ван ден Поль, А. Н., и Фингер, Т. Э. (2005). Дифференциальное распределение гипокретина (орексина) и меланин-концентрирующего гормона в головном мозге золотой рыбки. J. Comp. Neurol. 488, 476–491. DOI: 10.1002 / cne.20610

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Джаггард, Дж.Б., Шталь, Б. А., Ллойд, Э., Пробер, Д. А., Дюбу, Э. Р., и Кин, А. С. (2018). Гипокретин лежит в основе эволюции нарушения сна у мексиканских пещерных рыб. eLife 7, 1–22. DOI: 10.7554 / eLife.32637

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Джонсон, П. Л., Труит, В., Фитц, С. Д., Миник, П. Е., Дитрих, А., Сангани, С. и др. (2010). Ключевая роль орексина при панической тревоге. Nat Med 16, 111–115. DOI: 10,1038 / нм.2075

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Какидзаки, М., Kakizaki, M., Tsuneoka, Y., Takase, K., Kim, S.J., Choi, J., et al. (2019). Различная роль каждого сигнального рецептора орексина при ожирении. Различная роль каждого сигнального рецептора орексина при ожирении. Iscience 20, 1–13. DOI: 10.1016 / j.isci.2019.09.003

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Карнани, М. М., Апергис-Схаут, Дж., Адамантидис, А., Йенсен, Л. Т., де Лесеа, Л., Фуггер, Л. и др. (2011). Активация центральных нейронов орексина / гипокретина диетическими аминокислотами. Нейрон 72, 616–629. DOI: 10.1016 / j.neuron.2011.08.027

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Каслин Дж. И Панула П. (2001). Сравнительная анатомия гистаминергической и других аминергических систем у рыбок данио ( Danio rerio ). J. Comp. Neurol. 440, 342–377. DOI: 10.1002 / cne.1390 ​​

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Катаяма, С., Хамасу, К., Шигеми, К., Клайн, М.А., и Фурузе, М. (2010). Внутрицеребровентрикулярная инъекция орексина-A, но не орексина-B, вызывает возбуждение у новорожденных цыплят несушенного типа. Комп. Biochem. Physiol. Мол. Интегр. Physiol. 157, 132–135. DOI: 10.1016 / j.cbpa.2010.05.018

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Кодзима К., Камидзё М., Кагеяма Х., Учияма М., Сиода С. и Мацуда К. (2009). Нейрональная взаимосвязь между орексин-A- и нейропептидом Y-индуцированным орексигенным действием у золотой рыбки. Нейропептиды 43, 63–71. DOI: 10.1016 / j.npep.2009.01.004

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Lin, L., Faraco, J., Li, R., Kadotani, H., Rogers, W., Lin, X., et al. (1999). Нарколепсия собак, вызванная нарушением сна, вызвана мутацией гена рецептора гипокретина (орексина) 2. Мобильный 98, 365–376. DOI: 10.1016 / S0092-8674 (00) 81965-81960

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Лопес, Х.М., Домингес, Л., Морено, Н., Гонсалес, А. (2009). Сравнительный иммуногистохимический анализ распределения орексинов (гипокретинов) в головном мозге земноводных. Пептиды 30, 873–887. DOI: 10.1016 / j.peptides.2009.01.013

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Миеда, М., Хасегава, Э., Кисануки, Ю. Ю., Синтон, К. М., Янагисава, М., и Сакураи, Т. (2011). Различная роль рецепторов орексина-1 и -2 в регуляции не-REM- и REM-сна. Дж.Neurosci. 31, 6518–6526. DOI: 10.1523 / jneurosci.6506-10.2011

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Миранда Б., Эспозито В., Де Джироламо П., Шарп П. Дж., Уилсон П. У. и Данн И. С. (2013). Орексин в гипоталамусе курицы: иммуноцитохимическая локализация и сравнение концентраций мРНК в течение дня и ночи, а также после хронического ограничения пищи. Brain Res. 1513, 34–40. DOI: 10.1016 / j.brainres.2013.03.036

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Миура, Т., Маруяма, К., Шимакура, С. И., Кайя, Х., Учияма, М., Кангава, К. и др. (2007). Регулирование приема пищи золотыми рыбками за счет взаимодействия грелина и орексина. Пептиды 28, 1207–1213. DOI: 10.1016 / j.peptides.2007.03.023

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Накамати, Т., Мацуда, К., Маруяма, К., Миура, Т., Учияма, М., Фунахаши, Х. и др. (2006). Регуляция орексином пищевого поведения и двигательной активности у золотой рыбки. J. Neuroendocrinol. 18, 290–297. DOI: 10.1111 / j.1365-2826.2006.01415.x

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Накамачи Т., Шибата Х., Сакашита А., Иинума Н., Вада К., Конно Н. и др. (2014). Орексин А усиливает двигательную активность и вызывает анксиогенное действие у золотой рыбки Carassius auratus. Horm. Behav. 66, 317–323. DOI: 10.1016 / j.yhbeh.2014.06.004

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Намбу, Т., Сакураи, Т., Мизуками, К., Хосоя, Ю., Янагисава, М., и Гото, К. (1999). Распределение нейронов орексина в мозге взрослой крысы. Brain Res. 827, 243–260. DOI: 10.1016 / s0006-8993 (99) 01336-1330

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Новак, К. М., Цзян, X., Ван, К., Теске, Дж. А., Коц, К. М., и Левин, Дж. А. (2005). Ограничение калорийности и физической активности у рыбок данио ( Danio rerio ). Neurosci. Lett. 383, 99–104. DOI: 10.1016 / j.neulet.2005.03.048

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Окубо Т., Босуэлл Т. и Люмино С. (2002). Молекулярное клонирование кДНК куриного препроорексина и преимущественная экспрессия в гипоталамусе курицы. Biochim. Биофиз. Acta Gene Struct. Expr. 1577, 476–480. DOI: 10.1016 / S0167-4781 (02) 00483-489

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Пейрон, К., Фарако, Дж., Роджерс, В., Рипли, Б., Оверим, С., Чарней, Ю., и другие. (2000). Мутация в случае раннего начала нарколепсии и общего отсутствия пептидов гипокретина в нарколептическом мозге человека. Нат. Med. 6, 991–997. DOI: 10.1038 / 79690

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Пейрон, К., Тайге, Д. К., ван ден Поль, А. Н., де Лесеа, Л., Хеллер, Х. К., Сатклифф, Дж. Г. и др. (1998). Нейроны, содержащие гипокретин (орексин), проецируются на несколько нейронных систем. J. Neurosci. 18, 9996–10015.DOI: 10.1523 / JNEUROSCI.18-23-09996

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Пробер Д. А., Рихель Дж., Онах А. А., Сунг Р. Дж. И Шиер А. Ф. (2006). Сверхэкспрессия гипокретина / орексина вызывает у рыбок данио фенотип, похожий на бессонницу. J. Neurosci. 26, 13400–13410. DOI: 10.1523 / JNEUROSCI.4332-06.2006

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Райзен, Д. М., Циммерман, Дж. Э., Мэйкок, М. Х., Та, У. Д., Ю, Ю. Дж., Сундарам, М.V., et al. (2008). Летаргус - это состояние, подобное сну у Caenorhabditis elegans. Природа 451, 569–572. DOI: 10.1038 / nature06535

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Сайто Ю., Маэдзима Т., Нишитани М., Хасегава Э., Янагава Ю., Миеда М. и др. (2018). Моноамины ингибируют ГАМКергические нейроны вентролатеральной преоптической области, которые создают прямые синаптические связи с нейронами возбуждения гипоталамуса. J. Neurosci. 38, 6366–6378. DOI: 10.1523 / JNEUROSCI.2835-17.2018

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Сакамото, Ф., Ямада, С., Уэта, Ю. (2004). Централизованно вводимый орексин-A активирует нейроны, содержащие кортикотропин-рилизинг-фактор, в паравентрикулярном ядре гипоталамуса и центральном амигдалоидном ядре крыс1: возможное участие центральных орексинов на активированных стрессом центральных нейронах CRF. Регул. Pept. 118, 183–191. DOI: 10.1016 / j.regpep.2003.12.014

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Сакураи, Т., Амемия, А., Исии, М., Мацузаки, И., Чемелли, Р. М., Танака, Х. и др. (1998). Орексины и рецепторы орексина: семейство гипоталамических нейропептидов и рецепторов, связанных с G-белком, которые регулируют пищевое поведение. Cell 92, 573–585. DOI: 10.1016 / s0092-8674 (00) 80949-80946

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Шарф Р., Сархан М., Брайтон К. Э., Гуарнери Д. Дж., Тейлор Дж. Р. и Дилеоне Р. Дж. (2010). Передача сигналов орексина через рецептор орексина 1 опосредует оперантную реакцию на пищевое подкрепление. Biol. Психиатрия 67, 753–760. DOI: 10.1016 / j.biopsych.2009.12.035

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Шибахара, М., Сакураи, Т., Намбу, Т., Такенучи, Т., Иваса, Х., Эгашира, С. И., и др. (1999). Структура, распределение в тканях и фармакологическая характеристика орексинов Xenopus. Пептиды 20, 1169–1176. DOI: 10.1016 / S0196-9781 (99) 00120-125

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Сингх, К., Oikonomou, G., Prober, D. A., Adamantidis, A., Zhang, F., Aravanis, A., et al. (2015). Норэпинефрин необходим для пробуждения и гипокретин-индуцированного возбуждения у рыбок данио. eLife 4: e07000. DOI: 10.7554 / eLife.07000

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Singletary, K. G., Delville, Y., Farrell, W. J., and Wilczynski, W. (2005). Распределение иммунореактивности орексин / гипокретин в нервной системе зеленой древесной лягушки. Hyla cinerea . Brain Res. 1041, 231–236. DOI: 10.1016 / j.brainres.2005.01.095

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Соя, С., Сакураи, Т. (2018). Орексин как модулятор поведения, связанного со страхом: гипоталамический контроль норадреналинового контура. Brain Res. 1731: 146037. DOI: 10.1016 / j.brainres.2018.11.032

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Соя, С., Сёдзи, Х., Хасэгава, Э., Хондо, М., Миякава, Т., Янагисава М. и др. (2013). Рецептор орексина-1 в голубом пятне играет важную роль в зависимой от реплики консолидации памяти о страхе. J. Neurosci. 33, 14549–14557. DOI: 10.1523 / jneurosci.1130-13.2013

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Соя, С., Такахаши, Т. М., Мчуг, Т. Дж., Маэдзима, Т., Херлитце, С., Абэ, М., и др. (2017). Орексин модулирует выражение поведенческого страха через голубое пятно. Нат. Commun. 8, 1–14.DOI: 10.1038 / s41467-017-01782-z

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Судзуки Х., Кубо Ю. и Ямамото Т. (2008). Орексин-А иммунореактивные клетки и волокна в центральной нервной системе мозга аксолотлей и их связь с тирозингидроксилазой и иммунореактивными организмами к серотонину. J. Chem. Нейроанат. 35, 295–305. DOI: 10.1016 / j.jchemneu.2008.02.002

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Танникал, Т.К., Мур, Р. Ю., Ниенхуис, Р., Раманатан, Л., Гуляни, С., Олдрич, М. и др. (2000). Уменьшение количества гипокретиновых нейронов при нарколепсии человека. Нейрон 27, 469–474. DOI: 10.1016 / s0896-6273 (00) 00058-1

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Волков, Х., Бьорклунд, Дж. М., и Питер, Р. Э. (1999). Стимуляция пищевого поведения и потребления пищи у золотой рыбки Carassius auratus орексином-A и орексином-B. Brain Res. 846, 204–209.DOI: 10.1016 / s0006-8993 (99) 02052-2051

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Вонк, Ф. Дж., Кейсуэлл, Н. Р., Хенкель, К. В., Хеймберг, А. М., Янсен, Х. Дж., Вудс, А. Е. и др. (2013). Геном королевской кобры показывает динамическую эволюцию генов и адаптацию в системе яда змеи. Proc. Natl. Акад. Sci. США 110, 20651–20656. DOI: 10.1073 / pnas.1314702110

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Уилсон, С., Бейкер, Дж., Джессоп, Д. С., и Харбуз, М. С. (2001). Центральный орексин-A активирует гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковую систему и стимулирует гипоталамический рилизинг-фактор кортикотропина и нейроны аргинин-вазопрессина у крыс, находящихся в сознании. J. Neuroendocrinol. 13, 421–424. DOI: 10.1046 / j.1365-2826.2001.00655.x

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Вински-Соммерер, Р., Яманака, А., Диано, С., Борок, Э., Робертс, А. Дж., Сакураи, Т. и др. (2004). Взаимодействие между системой рилизинг-фактора кортикотропина и гипокретинами (орексинами): новая схема, опосредующая стрессовую реакцию. J. Neurosci. 24, 11439–11448. DOI: 10.1523 / JNEUROSCI.3459-04.2004

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Сюй М., Волков Х. (2007). Молекулярная характеристика препроорексина атлантической трески ( Gadus morhua ): клонирование, локализация, профиль развития и роль в регуляции приема пищи. Мол. Клетка. Эндокринол. 271, 28–37. DOI: 10.1016 / j.mce.2007.03.003

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Ямада, Х., Окумура, Т., Мотомура, В., Кобаяси, Ю., и Кохго, Ю. (2000). Ингибирование приема пищи голодными крысами путем центральной инъекции антител против орексина. Biochem. Биофиз. Res. Commun. 531, 527–531. DOI: 10.1006 / bbrc.1999.1998

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Яманака А., Бекманн К. Т., Вилли Дж. Т., Хара Дж., Цуджино Н., Миеда М. и др. (2003). Орексиновые нейроны гипоталамуса регулируют возбуждение в соответствии с энергетическим балансом мышей. Нейрон 38, 701–713. DOI: 10.1016 / S0896-6273 (03) 00331-333

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Чжан В., Чжан Н., Сакураи Т. и Куваки Т. (2009). Орексиновые нейроны в гипоталамусе опосредуют кардиореспираторные реакции, вызванные растормаживанием миндалины и ядра ложа концевой полоски. Brain Res. 1262, 25–37. DOI: 10.1016 / j.brainres.2009.01.022

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    Жданова, И.В., Ван, С. Ю., Леклер, О. У., Данилова, Н. П. (2001). Мелатонин способствует состоянию сна у рыбок данио. Brain Res. 903, 263–268. DOI: 10.1016 / S0006-8993 (01) 02444-2441

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    % PDF-1.3 % 260 0 объект > эндобдж xref 260 84 0000000016 00000 н. 0000002031 00000 н. 0000002134 00000 п. 0000002573 00000 н. 0000002847 00000 н. 0000003343 00000 п. 0000003366 00000 н. 0000003635 00000 н. 0000004739 00000 н. 0000006713 00000 н. 0000006736 00000 н. 0000008509 00000 н. 0000008532 00000 н. 0000010306 00000 п. 0000010329 00000 п. 0000012104 00000 п. 0000012127 00000 п. 0000013928 00000 п. 0000013951 00000 п. 0000015578 00000 п. 0000015601 00000 п. 0000015885 00000 п. 0000016154 00000 п. 0000017737 00000 п. 0000017760 00000 п. 0000017781 00000 п. 0000017802 00000 п. 0000019481 00000 п. 0000019503 00000 п. 0000020582 00000 п. 0000020605 00000 п. 0000022514 00000 п. 0000022537 00000 п. 0000025043 00000 п. 0000025066 00000 п. 0000026507 00000 п. 0000026530 00000 п. 0000030974 00000 п. 0000030997 00000 п. 0000033458 00000 п. 0000033481 00000 п. 0000037833 00000 п. 0000037856 00000 п. 0000043192 00000 п. 0000043215 00000 п. 0000048493 00000 п. 0000048516 00000 н. 0000052810 00000 п. 0000052833 00000 п.

  • Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *