Настоящее изобретение относится к вакцине, содержащей антигены паразитарных организмов, вызывающих стригущий лишай, к способам производства такой вакцины и к способам лечения пациентов такой вакциной.

Люди и другие млекопитающие, включая многие виды домашних животных от молочного скота до семейных кошек, страдают от стригущего лишая (дерматомикоза), который вызывается инфекцией одним или несколькими паразитарными грибами, обычно называемыми «дерматофитами» ( то есть организмы, которые при заражении вызывают стригущий лишай). Дерматофиты включают без ограничения виды, перечисленные в таблице I.

 ТАБЛИЦА I

     ______________________________________

     Дерматофиты и хозяева

     Дерматофиты-хозяева

     ______________________________________

     Эпидермофитон хлопьевидный

                       человек

     Microsporum audouini

                       человек (дети), собаки, обезьяны

     Microsporum canis собаки, кошки, человек, овцы, обезьяны,

                       свинья

     Искаженный микроспорум

                       обезьяны, собаки

     Microsporum equinum

                       лошади

     Microsporum gypseum.(гипс)

                       человек, собаки, кошки, лошади

     Microsporum nanum свиней

     Концентрический трихофитон

                       человек

     Trichophyton equinum

                       мужчина (дети), лошади

     Trichophyton gallinae

                       птица, человек

     Гипс Trichophyton (гипс)

                       овца

     Trichophyton megnini

                       человек, крупный рогатый скот

     Trichophyton mentagrophytes

                       мыши, крысы, ондатры, шиншиллы,

                       крупный рогатый скот, человек, лошади, овцы, собаки,

                       кошки, свиньи, козы, кролики, цесарки

                       свиньи

     Trichophyton quinckeanum

                       человек, лошади, овца

     (квинкеанум)

     Trichophyton rubrum

                       собаки, свиньи, лисы, приматы, мыши,

                       белки, ондатры

     Trichophyton schoenleini

                       человек, кошки, мыши, крысы, кролики

     Trichophyton tonnsurans

                       человек

     Trichophyton verrucosum

                       крупный рогатый скот, человек, лошади, собаки, овцы

     Trichophyton verrucosum var.альбом

                       крупный рогатый скот

     Trichophyton verrucosum var.

                       крупный рогатый скот, свиньи

     дискоиды

     Trichophyton verrucosum var.

                       овца

     охрацеум

     Trichophyton violaceum

                       человек

     ______________________________________

 

Обширную дополнительную информацию, относящуюся к дерматофитам и дерматофитной микологии, можно найти в «Справочнике по медицинской микологии» Кэмпбелла и Стюарта (John Wiley & Sons, 1980) (далее «Справочник Кэмпбелла / Стюарта»), который включен здесь в качестве ссылки как если изложено полностью.

Стригущий лишай обычно проявляется как серия быстро расширяющихся раздражающих поражений, которые могут возникать на любом участке кожи. Дерматофиты поражают в основном ороговевшие ткани, особенно роговой слой и волокна волос, что приводит к автолизу структуры волокон, отламыванию волос и облысению. Экссудация из пораженных эпителиальных слоев, эпителиальных остатков и гиф грибов приводит к образованию сухих корок, характерных для этого заболевания. Поражения прогрессируют, если существуют подходящие условия окружающей среды для роста мицелия, включая теплую влажную атмосферу и слегка щелочной pH кожи.Все дерматофиты — это строгие аэробы, и грибы вымирают под коркой в ​​центре большинства поражений, оставляя активной только периферию. Именно этот способ роста вызывает центробежную прогрессию и характерную кольцевую форму поражений (отсюда «стригущий лишай»). Вторичная бактериальная инвазия в волосяные фолликулы и другие ткани также часто связана с инфекцией стригущего лишая.

Многие распространенные недуги на самом деле являются дерматофитными инфекциями. Tinea pedis (микоз стопы или стригущий лишай стоп) связан с Epidermophyton floccusum, различными видами Trichophyton и, реже, с видами Microsporum и другими грибами.Tinea unguium (стригущий лишай ногтей) вызывается Trichophyton rubrum. Tinea cruris («качок зуд» стригущего лишая в паховой области) возникает в результате заражения Epidermophyton floccusum и разновидностями Trichophyton. Tinea corporis (стригущий лишай тела) вызывается различными видами Trichophyton и Microsporum, поражает гладкую и безволосую кожу и приводит либо к простому шелушению, либо к глубоким гранулемам. Tinea imbricata (чешуйчатый стригущий лишай) — это тропическое заболевание, которое, по-видимому, вызывается одним грибом, Trichophyton contricum.Tinea barbae (зуд парикмахера или стригущий лишай бороды) вызывается различными видами Trichophyton и Microsporum. Опоясывающий лишай на голове (стригущий лишай кожи головы и волос) чаще всего встречается у детей, но может поражать и взрослых. Возбудители различных видов Trichophyton и Microsporum могут передаваться через контакт с инфицированными животными или детьми. Чаще всего поражается Microsporum audouini, но Microsporum canis и Microsporum gypsum (gypseum) вызывают более глубокие и тяжелые поражения. Также известно, что Trichophytontonsurans вызывает широко распространенные инфекции кожи головы.

На сегодняшний день проблема стригущего лишая, по большей части решается постинфекционным лечением, поскольку эффективная вакцина недоступна. Роль pH кожи в развитии стригущего лишая широко известна. Восприимчивость людей к стригущему лишаю намного выше до полового созревания, чем после, когда pH кожи падает с примерно 6,5 до примерно 4,0. Это изменение в значительной степени связано с выведением жирных кислот с кожным салом, и эти жирные кислоты часто обладают сильным фунгистатическим действием. По этой причине для уничтожения инфекционного грибка и облегчения состояния использовались различные виды средств местного применения.Многие методы лечения стригущего лишая основаны на изменении pH кожи путем местного применения различных агентов (например, пропионовой кислоты, ундециленовой кислоты). Другие методы лечения стригущего лишая основаны на других коммерчески доступных продуктах местного применения, таких как Conofite и Captan. Также доступны пероральные агенты (например, гризеофульвин и кетоконазол).

К сожалению, во многих случаях постинфекционное лечение не может полностью предотвратить. После прекращения терапии обычно происходит повторное инфицирование.Следовательно, было бы желательно разработать вакцину от стригущего лишая, чтобы предотвратить инфекцию, прежде чем возникнут эти неблагоприятные эффекты. Одна из целей настоящего изобретения — предоставить такую ​​вакцину.

В соответствии с настоящим изобретением раскрыта вакцина против стригущего лишая, содержащая антиген по меньшей мере из одного дерматофита и подходящий носитель. «Антиген» может включать один антиген дерматофита или множество антигенов при условии, что включен по крайней мере один антиген, который будет вызывать достаточный иммунный ответ для придания устойчивости реципиенту вакцины к инфекции стригущего лишая.Антиген также может происходить от более чем одного дерматофита. Если получают препарат из более чем одного дерматофита, антиген может включать антигены, общие для всех используемых видов дерматофитов, и / или антигены, специфичные только для определенных видов. Антиген может быть «от дерматофита» в том смысле, что он имеет по крайней мере один эпитоп, который иммунологически идентичен или перекрестно реагирует с эпитопом, который обнаружен в структуре дерматофита или в структуре веществ, продуцируемых дерматофитом во время инфекции. (е.g .. токсины, которые производятся и / или выделяются организмом во время инфекции).

Подходящие носители для введения вакцин хорошо известны в данной области и могут включать буферы, гели, микрочастицы, имплантируемые твердые вещества, растворители, другие адъюванты или любые другие средства, с помощью которых антиген вакцины может быть введен пациенту и произведен в достаточной степени. доступны для создания иммунного ответа на антиген. В предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения носитель представляет собой содержащий лактозу раствор лактатного раствора Рингера (или другой изотонический раствор), гель гидроксида алюминия и формальдегид.Формальдегид добавляют к предпочтительным вариантам осуществления, чтобы служить средством, которое убивает дерматофиты и предотвращает заражение неспецифическими грибами или бактериями. Другие такие агенты также можно использовать при составлении препаратов антигенов и вакцин по настоящему изобретению. Также раскрыт способ получения такой вакцины против стригущего лишая. Способ включает приготовление препарата антигена, содержащего описанный выше дерматофитный антиген, и объединение препарата антигена с подходящим носителем.Препарат антигена можно получить любыми доступными способами для получения антигена в форме, которая может быть добавлена ​​к носителю. Антиген может быть выделен для использования в таких препаратах любыми доступными способами, включая, помимо прочего, гомогенизацию дерматофитов или частей дерматофитов, фракционирование препаратов дерматофитов, производство дерматофитного антигена с помощью технологии рекомбинантной ДНК, выделение выделений дерматофитов и культивирование материала из очагов стригущего лишая. . В предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения препарат антигена получают из гомогенизированных культур соответствующих дерматофитов.Предпочтительно, чтобы все дерматофиты в культуре были уничтожены до гомогенизации культуры (например, путем добавления формальдегида или другого агента, убивающего дерматофиты). В предпочтительных вариантах осуществления также аспирируют или фильтруют гомогенизированную культуру перед ее добавлением к носителю. Наконец, препарат антигена добавляют к носителю таким образом, чтобы антиген присутствовал в концентрации, достаточной для того, чтобы вызвать иммунный ответ и / или придать устойчивость при введении вакцины пациенту.

Также раскрыты способы лечения пациента с использованием вакцины по настоящему изобретению и вакцин, полученных в соответствии со способом по настоящему изобретению. Лечение может быть с целью выработки иммунитета к инфекции стригущего лишая (например, профилактическое лечение) или с целью облучения существующей инфекции. Такой пациент может быть млекопитающим любого вида, восприимчивым к инфекции дерматофитами. Также раскрыты способы лечения беременной пациентки такими вакцинами, чтобы потомство беременности проявляло устойчивость к инфекции стригущего лишая при рождении.

Образцы различных дерматофитов доступны у коммерческих поставщиков (например, Difco, Gibco Cultures of Microsporum canis, Microsporum gypsum и Trichophyton mentagrophytes также были депонированы заявителями в ATCC в соответствии с Будапештским соглашением под номерами доступа ATCC 20970, ATCC 20971 и ATCC. 20972. Способы выделения различных дерматофитов также хорошо известны в данной области техники и могут быть найдены в Campbell / Stewart Handbook.

Следующие ниже примеры иллюстрируют настоящее изобретение в некоторых предпочтительных вариантах осуществления. Однако объем настоящего изобретения не ограничивается этими примерами и определяется условиями прилагаемой формулы изобретения.

Чашки с декстрозным бульоном Сабуро («SDB») и декстрозой Сабуро («SD») были получены от Difco, Gibco и DiMed (Сент-Пол, Миннесота). SDB — это бульон, содержащий неопептон и бакто-декстрозу в соотношении 1: 4.SD агар содержит неопептон, бакто-декстрозу и агар в соотношении 2: 8: 3. Агар SDB и SD для планшетов также можно приготовить в соответствии с рецептами, приведенными на страницах 384-85 Руководства Кэмпбелла / Стюарта.

Отдельные образцы Microsporum canis, Microsporum gypsum и Altemaria sp. (грибок, не вызывающий стригущий лишай) были изолированы от человека (который был инфицирован инфицированной кошкой), крупного и крупного рогатого скота, соответственно. следующим образом: поражение стригущего лишая, содержащее желаемый грибок, промывали 70% спиртовым раствором и давали ему высохнуть на воздухе.Затем поверхность поражения соскребали скальпелем, чтобы удалить часть инфицированной ткани. Затем соскобы помещали в SDB и культивировали. После того, как наблюдался значительный рост, образец каждой культуры помещали на чашки SD для проверки чистоты культуры. Затем чистые культуры использовали в качестве инокулята, как описано ниже.

Microsporum canis, Microsporum gypsum и Alternaria sp. каждый использовался для инокуляции отдельного флакона объемом 10 мл, содержащего SDB. Затем три флакона инкубировали при комнатной температуре в течение 4 дней.Каждый флакон энергично встряхивали один раз в течение каждого дня культивирования.

Затем содержимое каждого флакона добавляли в отдельную обычную камеру для выращивания на 400 мл (коммерчески доступную от Corning), содержащую 90 мл SDB. Затем камеры выращивали при комнатной температуре до достижения максимального роста (т.е. отсутствия увеличения по сравнению с предыдущим днем, измеренного на глаз). Камеры энергично встряхивали один раз в течение каждого дня культивирования. При максимальном росте был. Достигнув этого, образец из каждой камеры помещали на планшеты SD для проверки чистоты культур.Максимальный рост Microsporum canis, Microsporum gypsum и Alternaria sp. оказалось, что это примерно 4 дня, 7 дней и 4 дня соответственно.

После того, как культуры были определены как чистые, в каждую камеру добавляли формальдегид, разбавленный лактатным раствором Рингера, так, чтобы конечная концентрация формальдегида в каждой камере составляла 0,2% в общем объеме 400 мл. Затем культурам давали отстояться на 4 дня. Культуры высевали на чашки SD, чтобы увидеть, все ли грибы погибли.

После уничтожения всех грибов культуры Microsporum canis, Microsporum gypsum и Alternaria sp. были отдельно гомогенизированы с использованием блендера Oster в течение 2-5 минут при низкой температуре, следя за тем, чтобы блендер не перегревал и не нагревал гомогенизированные культуры. Затем гомогенизированным культурам давали постоять приблизительно 48 часов.

Каждую гомогенизированную культуру затем отсасывали через фильтр Whatman 4. Затем были объединены аспираты от всех трех организмов.72 мл геля гидроксида алюминия / метилцеллюлозы (коммерчески доступного от Barre) или его эквивалента добавляли в качестве стандартного адъюванта, и смесь доводили до конечного объема 3600 мл с помощью раствора Рингера с лактатом для получения конечной вакцины.

5 мл последней вакцины вводили крупному рогатому скоту на нескольких фермах. В зависимости от фермы, 50-100% обработанного крупного рогатого скота были излечены от ранее существовавшей инфекции стригущего лишая и проявляли устойчивость к повторной инфекции после лечения. Те инфекции, которые не поддаются лечению вакциной, вероятно, были вызваны инфекционными организмами, не включенными в вакцину (т.е., кроме Microsporum canis или Microsporum gypsum).

Кошкам также вводили 1 мл последней вакцины. Обработанные кошки проявляли устойчивость к инфекции стригущего лишая в течение 18 месяцев после введения вакцины.

Вакцину получали из Microsporum canis, Microsporum gypsum и Trichophyton mentagrophytes с использованием процедуры, описанной в Примере 1.

5 мл последней вакцины введено крупному рогатому скоту. На дату подачи данной заявки весь обработанный крупный рогатый скот демонстрировал постоянную устойчивость к инфекции стригущего лишая в течение периода до 7 месяцев.

Образец Microsporum canis выделяли, как описано в Примере 1. Затем образец Tbe использовали для инокуляции 10-мл флакона, содержащего SDB. Флакон инкубировали в течение 4 дней при 95 ° С. F., энергично встряхивая флакон один раз в течение каждого дня культивирования.

Затем содержимое флакона добавляли в камеру для выращивания, содержащую 90 мл SDB. Камеру для выращивания инкубировали до достижения максимального роста при 95 ° С. F., энергично встряхивая камеру один раз в течение каждого дня культивирования.Когда был достигнут максимальный рост (приблизительно 4 дня), образец из камеры помещали на планшеты SD для проверки чистоты культуры.

После того, как культура была определена как чистая, в камеру добавляли формальдегид, разбавленный лактатным раствором Рингера, так, чтобы конечная концентрация формальдегида в камере составляла 0,2% в общем объеме 400 мл. Затем культуре давали отстояться на 4 дня. Культуру высевали на чашки SD, чтобы увидеть, все ли грибы погибли.

После того, как все грибы были уничтожены, культуру гомогенизировали с использованием блендера Oster в течение 5 минут при низкой температуре, следя за тем, чтобы блендер не перегревал и не нагревал гомогенизированную культуру. Затем гомогенизированным культурам давали постоять приблизительно 48 часов.

Гомогенизированную культуру затем отсасывали через фильтр Whatman 4. Формальдегид, гель гидроксида алюминия и раствор лактатных рингеров добавляли к гомогенизированной культуре таким образом, чтобы конечная концентрация геля формальдегида и гидроксида алюминия в общем объеме 3000-4000 мл составляла 0.2% и 2%. соответственно. Этот раствор был последней вакциной.

Кошек лечили последней вакциной в различных дозах в зависимости от возраста кошки. Взрослые кошки получали 1 мл, котятам 5-7 недель — 0,25 мл, котятам 9 недель — 0,5 мл. Примерно 95% обработанных кошек проявляли устойчивость к инфекции стригущего лишая в течение (на момент подачи настоящей заявки) до 8 месяцев. Также наблюдали, что введение этой последней вакцины беременной кошке придавало устойчивость к инфекции потомству беременности в течение периода приблизительно 4-5 недель.Никаких побочных эффектов в отношении беременности или потомства не наблюдалось.

Четыре гомогенизированных и аспирированных культуры получали из Microsporum canis, Microsporum gypsum и Trichophyton mentagrophytes в соответствии с процедурой, описанной в Примере 3. Затем аспираты объединяли друг с другом и с формальдегидом, гелем гидроксида алюминия и лактатным раствором Рингера таким образом, чтобы конечная концентрация формальдегида и геля гидроксида алюминия в общем объеме 4000 мл составил 0.2% и 2% соответственно. Этот раствор был последней вакциной.

Крупному рогатому скоту 5 мл. Весь обработанный крупный рогатый скот проявлял устойчивость к инфекции стригущего лишая в течение (на момент подачи настоящей заявки) до 8 месяцев.

Из вышеизложенного для специалистов в данной области техники будет очевидно, что различные модификации в описанных выше способах могут быть выполнены без отклонения от сущности и объема изобретения. Соответственно, изобретение может быть воплощено в других конкретных формах без отступления от его сущности или существенных характеристик.Таким образом, настоящие варианты осуществления следует рассматривать во всех отношениях как иллюстративные, а не ограничивающие, причем объем изобретения указывается прилагаемой формулой изобретения, а не предшествующим описанием. и все изменения, которые подпадают под значение и диапазон эквивалентности формулы изобретения, поэтому предназначены для включения в нее.

Дерматофитозов у ​​собак и кошек

Дерматофитозы имеют множество клинических проявлений, и поэтапный логический подход имеет решающее значение для правильной диагностики.

Розанна МарселлаDVM, DACVD

Доктор Марселла — сертифицированный ветеринарный дерматолог и профессор Университета Флориды. Она является автором более 150 рецензируемых статей и написала несколько книг ( Руководство по дерматологии лошадей, и Клинический подход к дерматологическим заболеваниям кошек, ) и участвовала во многих других в качестве автора или автора и редактора (например, BSAVA Manual дерматологии собак и кошек ). Она была президентом Американского колледжа ветеринарной дерматологии и соредактором журнала Veterinary Dermatology .

Stock-Asso / shutterstock.com

Дерматофиты — это патогенные грибы, вызывающие кожные заболевания у мелких животных и людей; они могут представлять серьезную проблему для животных из приютов и домашних животных, подвергшихся обширному воздействию внешней среды. Наиболее частые дерматофитные инфекции, диагностируемые у мелких животных, вызываются Microsporum canis , Microsporum gypseum и Trichophyton mentagrophytes , а наиболее распространенными источниками являются кошки ( M canis ), инфицированная почва ( M gypseum ). , и грызунов ( T mentagrophytes ). ¹

Хотя дерматофиты передаются при контакте с артроспорами, контакт с артроспорами не всегда приводит к возникновению инфекции. Устойчивость к инфекции связана с сильным клеточным ответом. ² Инфекция с большей вероятностью разовьется у очень молодых, престарелых или находящихся в стрессе животных. ³ У кошек из приютов инфекции дерматофитами, отличными от M. canis , редки и, по-видимому, не представляют проблемы для лечения; большинство кошек излечиваются от микоза в течение 3 недель после лечения. ⁴

КЛИНИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ И ДИАГНОСТИКА

Дерматофитозы имеют множество клинических проявлений. Поскольку дерматофиты кератинофилы, их мишенями являются волосы и ногти.

Фолликулит

Когда дерматофиты поражают волосы, они приводят к фолликулиту ( РИСУНОК 1 ). Инфекции проявляются в виде папул и пустул ( РИСУНОК 2 ), которые быстро разрываются, оставляя эпидермальные воротнички, круглые области алопеции ( РИСУНОК 3 ) и корки.Дифференциальный диагноз фолликулита включает стафилококковую инфекцию ( РИСУНОК 4 ) и, особенно у собак, демодекоз ( РИСУНОК 5 ). Таким образом, при обследовании собаки с признаками фолликулита проведите цитологическое исследование для поиска внутриклеточных бактерий и глубоких соскобов кожи, чтобы исключить демодекоз.

По опыту автора, бактериальный фолликулит обычно встречается у собак чаще, чем инфекция дерматофитами; однако не делайте предположений и не пропускайте этапы диагностики.Дерматофития может представлять серьезную проблему для собак определенных пород, например, йоркширских терьеров. Очень важно пройти список дифференциальных диагнозов и проработать каждый случай в последовательной логической манере. Другие причины пустулезного заболевания (например, листовая пузырчатка), которые не ориентированы на фолликулы, также следует учитывать при обследовании пациентов с выпадением волос и образованием корок. Хороший начальный подход — сначала исключить причины фолликулита с помощью цитологического исследования, глубокого соскоба кожи и посева на грибок.

Узелковые поражения

Иногда дерматофиты случайно попадают в дерму (например, во время травмы), что приводит к тяжелой воспалительной реакции и развитию узлового поражения, называемого керионом. ⁵ Это узловое поражение обычно встречается на переносице собак, которые любят копать. Даже после смерти дерматофитов тяжелая воспалительная реакция может сохраняться. Еще одно проявление узловой болезни, вызываемой дерматофитами, — дерматофитная мицетома, также называемая псевдомицетомой.Эта необычная кожная / подкожная инфекция в основном встречается у персидских кошек и проявляется в виде узелков с дренажными путями, обычно на спине. Эти кошки обычно представлены, потому что они не реагируют на терапию антибиотиками.

Для пациентов с узловыми поражениями важно определить, являются ли они результатом инфекционных агентов. Часто требуется биопсия для гистопатологии и посева, но также следует проводить цитологию, поскольку мазки-слепки могут быть диагностическими. ⁵

Поражения ногтей

Дерматофиты могут поражать подушечки стоп ( РИСУНОК 6 ) и ногти ( РИСУНОК 7 и 8 ).Ногти, инфицированные дерматофитами, становятся хрупкими и деформируются, особенно у собак с инфекцией M gypseum . ⁶

Дифференциальный диагноз деформированных и ломких ногтей может включать системную волчаночную ониходистрофию или генетически унаследованные дистрофии, которые не являются иммуноопосредованными. При рассмотрении этих случаев, прежде чем рассматривать биопсию или другие инвазивные диагностические тесты, соберите образцы пораженных ногтей (например, кусочки ногтей) и отправьте их для посева на грибок.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ

В недавно опубликованном клиническом консенсусе по дерматофитии мелких животных после обзора текущей литературы был сделан вывод о том, что ни один диагностический тест не может быть признан золотым стандартом для диагностики дерматофитии. ¹ Авторы заявляют, что диагноз ставится с использованием дополнительных методов, указывающих на активную инфекцию, таких как прямое исследование артроспор на инфицированных волосах и грибковая культура волос, собранных с помощью стерильной зубной щетки.

Лампа Вуда

Использование лампы Вуда по-прежнему рекомендуется в качестве средства скрининга, и сейчас принято считать, что большинство инфекций, вызываемых вирусом M. canis , флуоресцируют зеленым яблоком под лампой Вуда. В зависимости от исследования положительность колеблется от 91% до 100%; более высокий процент был обнаружен в исследованиях экспериментально индуцированной инфекции. ¹ Способность к флуоресценции развивается после первой недели заражения и может сохраняться на кончиках волос после исчезновения инфекции. ¹ Авторы согласованного документа пришли к выводу, что лампа Вуда — лучший инструмент для первоначального скрининга, чем для контроля эффективности лечения. ¹ Врачам необходимо знать, как правильно использовать лампу Вуда. Обследование следует начинать с головы пациента, медленно двигаясь назад, держа лампу близко к коже (2–4 см), отличая яблочно-зеленую флуоресценцию волос при дерматофитии от ложной синей флуоресценции, которую можно увидеть с помощью скейлинга и некоторых продуктов для местного применения. . ¹

Грибковые культуры

На протяжении десятилетий золотым стандартом диагностики дерматофитов были посевы грибов. Однако в действительности такой подход просто указывает на наличие или отсутствие спор на волосках. Успех этого подхода частично зависит от техники отбора проб и района, который был выбран для культивирования. Метод, широко описанный в литературе, — это метод зубной щетки, который может обнаруживать бессимптомных животных-носителей. В 2017 году Ди Маттиа и др.сообщили о важности правильного посева образцов на питательную среду для грибов. Прижимание зубной щетки к пластине — оптимальный способ максимизировать рост M canis и минимизировать рост загрязнений. ⁷

Прямой экзамен

Выщипывание волос по краям существующего поражения считается полезным для конкретного решения вопроса о том, может ли поражение быть вызвано дерматофитом, хотя выщипывание волос все же может привести к отрицательным результатам. ¹ Предметные стекла с 10–20 выщипанными волосками в минеральном масле можно исследовать под микроскопом на предмет артроспор.

Полимеразная цепная реакция

В последние годы использование полимеразной цепной реакции (ПЦР) для диагностики дерматофитоза привлекло внимание, и результаты исследований различаются в зависимости от используемой ПЦР. В 2018 году Moriello et al. обнаружили, что количественная ПЦР (кПЦР) образцов грибковой культуры зубных щеток с очагами поражений у кошек из приюта является надежным тестом для подтверждения заболевания. ⁸ Результаты КПЦР и культуры грибов совпали в 94% случаев. КПЦР также правильно определила 2 кошек как незараженных. Микологическое излечение было правильно идентифицировано для 65,2% кошек с помощью анализа qPCR Microsporum видов и 84,8% с помощью анализа M canis .

Cafarchia et al. сообщили о высокой точности одностадийной ПЦР для собак (площадь под кривой [AUC]> 90), но только средней точности для кошек (AUC = 78,6). ⁹ В том же исследовании вложенная ПЦР оказалась точной (AUC = 93.6) для образцов от кошек и достигла более высокой специфичности (94,1% и 94,4%) и чувствительности (100% и 94,9%) для образцов от собак и кошек, соответственно. Другое исследование, в котором сравнивали эффективность вложенной ПЦР с прямой микроскопией и культивированием, обнаружило, что степень согласия была выше для вложенной ПЦР и прямой микроскопии (94,4%), чем для культуры (83,3%). ¹⁰ Как и в случае с грибковыми культурами, положительный результат ПЦР не подтверждает активную инфекцию, и результаты необходимо интерпретировать в контексте клинических признаков.Недавнее исследование также показало, что ПЦР менее чувствительна, чем сообщалось ранее, но более специфична, что увеличивает риск получения ложноотрицательных результатов. ¹¹

ПРОЦЕДУРЫ

Успешное лечение дерматофитоза у собак и кошек требует сочетания местного лечения, системного лечения и дезинфекции окружающей среды.

Средства для местного применения

Поскольку дерматофития передается при контакте с артроспорами, местная терапия является важным компонентом лечения.Местное лечение помогает ускорить разрешение инфекции и уменьшить распространение артроспор в окружающую среду.

вырезка

На протяжении десятилетий стрижка была необходимой частью лечения дерматофитоза; однако клипирование в настоящее время пересматривается, поскольку клипирование всего тела вызывает стресс, а обычные микротравмы кожи могут усугубить инфекцию. Таким образом, решение о том, нужно ли обрезать, следует решать в каждом конкретном случае; стрижка не требуется для животных с короткой шерстью. ¹

Дикие, шампуни и ополаскиватели

В Соединенных Штатах по-прежнему рекомендуется использовать известково-серные растворы. Несколько исследований документально подтвердили эффективность накипи на основе серы с известью, и нанесение дважды в неделю более эффективно, чем один раз в неделю. ^1,12-14 Падение остаточно действует на шерсть, тогда как шампуни более короткие. ¹³ По опыту автора, общими побочными эффектами известковой серы являются сухость и изменение цвета на желтый. Хотя в более ранних исследованиях сообщалось о потенциальном риске язв во рту у кошек, которые облизывают свою шерсть еще влажными, более новые исследования не подтвердили эти выводы, что повышает вероятность того, что в более ранних исследованиях использовались более концентрированные растворы. ¹ Большинство современных рецептур известковой серы для ветеринарного использования содержат 97,8% насыщенной известковой серы, которая применяется при разбавлении 8 унций / галлон воды.

Если клиенты возражают против запаха серного соуса, в Соединенных Штатах доступны другие варианты, включая шампуни и ополаскиватели. Среди шампуней ни хлоргексидин, ни миконазол по отдельности не считаются эффективным средством лечения. Наиболее эффективным местным лечением является комбинация миконазола и хлоргексидина, применяемая два раза в неделю. ^15,16 Хотя врачи обычно считают, что хлоргексидин обладает противогрибковыми свойствами, эффективность хлоргексидина при дерматофитиях была низкой. ¹⁷

Для местного применения Энилконазол также эффективен для лечения дерматофитоза у мелких животных ¹⁸ , но в настоящее время недоступен в США. В странах, где доступно полоскание с энилконазолом, оно считается очень эффективным средством местного применения против дерматофитии. ¹⁹ Хотя энилконазол обычно хорошо переносится, сообщалось, что он вызывает гиперсаливацию, мышечную слабость и незначительное повышение концентрации аланинаминотрансферазы (АЛТ) в сыворотке крови у персидских кошек. ¹⁶

Эффективность шампуней, содержащих кетоконазол, для животных не оценивалась исследованиями in vivo. Исследования in vitro подтверждают эффективность кетоконазола, но клинических испытаний шампуня с кетоконазолом при дерматофитии у мелких животных опубликовано не было. ^19,20

Аналогичным образом, исследования in vivo не подтверждают использование местного климбазола для лечения дерматофитии у мелких животных. Исследования in vitro показали хорошую остаточную активность климбазола 0,5% с хлоргексидином. ¹⁹

Было опубликовано только одно исследование тербинафина для местного применения , которое показало хорошие результаты. ²⁰

Системное лечение

Идеальным выбором для системной терапии являются кератинофильные и липофильные препараты, накапливающиеся в коже и кератине.В настоящее время наиболее эффективными системными методами лечения собак и кошек являются пероральный итраконазол или пероральный тербинафин. ¹

Итраконазол имеет длительный период полувыведения у кошек ²¹ и большую склонность к накоплению в волосах и коже. Это свойство позволяет использовать пульс-терапию, что снижает стоимость терапии; ежедневное введение в течение 1 недели с последующей 1 неделей приема и 1 неделей перерыва показало клинический успех. ²² Другие начали режим пульса только после ежедневного приема препарата в течение 4 недель. ²³ Наиболее часто используемая доза итраконазола для собак и кошек составляет 5 мг / кг один раз в сутки. Поскольку итраконазол влияет на цитохром P450, важно учитывать лекарственные взаимодействия и уменьшать дозы других лекарств, если это взаимодействие влияет на их метаболизм (например, циклоспорин).

Следует избегать составных формулировок итраконазола; несколько исследований показали, что составные составы имели субтерапевтическую ценность для леченных животных. ^24,25 Общий итраконазол, кажется, лучше, хотя терапевтический мониторинг полезен, потому что концентрация может сильно варьироваться. ²³ Если отмечается неэффективность лечения, перейдите на продукт, разработанный для людей, Sporanox (Janssen Pharmaceuticals, janssen.com). Также обратите внимание, что при использовании в более высоких дозах итраконазол, как сообщается, вызывает васкулит у собак. ²⁶ Клиницисты должны учитывать возможность этого побочного эффекта при использовании этого лекарства, хотя высокие дозы обычно применяются при системных микозах и не рекомендуются при дерматофитиях. Жидкий состав (Итрафунгол; Эланко, Эланко.com) доступен для кошек. Сообщенные побочные эффекты итраконазола включают повышение ферментов печени и анорексию у собак, а также снижение потребления пищи, депрессию и повышенные концентрации АЛТ в сыворотке крови у кошек. ¹

Тербинафин очень кератинофилен и накапливается в волосах, ²⁷ позволяет проводить пульс-терапию, что снижает стоимость и снижает побочные эффекты. Тербинафин обладает отличной активностью против дерматофитов, и одно исследование показало, что он эффективен и может представлять собой подходящую и более дешевую альтернативу для кошек из приютов. ¹⁴ Обычно используемый диапазон доз тербинафина составляет 20 мг / кг от ¹⁴ до 40 мг / кг; ²⁸ эффективность увеличивается при более высоких дозах. Хотя тербинафин не оказывает такого же действия на цитохром P450, как азолы, его метаболизм в значительной степени затрагивает печень; при длительном лечении может потребоваться мониторинг показателей печени.

Кетоконазол эффективен против дерматофитов, хотя он не так хорош, как итраконазол или тербинафин.Кетоконазол применялся у кошек; ²⁹ однако, поскольку он обычно плохо переносится и часто вызывает тошноту и анорексию, лучше оставить это лекарство для собак. Кетоконазол обычно назначают собакам в дозе 5 мг / кг перорально каждые 12 часов, и его лучше всего вводить с пищей, чтобы минимизировать побочные эффекты и увеличить абсорбцию.

Флуконазол имеет низкую активность против дерматофитов in vitro ³⁰ и больше не рекомендуется для лечения дерматофитоза.Флуконазол также растворим в воде и не обладает такой же способностью, как итраконазол и кетоконазол, накапливаться в коже и кератине.

Гризеофульвин исторически использовался для лечения дерматофитоза, но теперь доступны более безопасные и эффективные варианты. Таким образом, гризеофульвин редко используется в качестве лечебного средства.

Луфенурон ранее рассматривался как возможное лечение, но исследования не показали его эффективности. ^31,32 Следовательно, луфенурон не следует рассматривать как вариант лечения.

Вакцины не предотвращают развитие дерматофитии ³³ и поэтому не должны использоваться для этой цели.

Обеззараживание окружающей среды

Обеззараживание окружающей среды — основная часть лечения дерматофитоза. Это также сводит к минимуму ложноположительные результаты культивирования грибов. Хотя разделение животных с целью сведения к минимуму заражения ³⁴ пропагандировалось на протяжении десятилетий, заключение необходимо проводить с осторожностью, поскольку это может быть очень стрессовым, особенно для молодых животных. ¹ Таким образом, продолжительность изоляции должна быть сведена к минимуму до уровня, необходимого для обеззараживания окружающей среды. Потребность в длительной изоляции может быть уменьшена за счет еженедельной очистки и использования местной терапии.

Исследования показали, что еженедельная очистка очень эффективна для удаления инфекционных артроспор. ^35,36 Самая важная часть процесса дезактивации — это жесткая чистка, которая включает удаление мусора и волос. Чистку можно производить с помощью бытовых моющих средств, отпускаемых без рецепта. ³⁷ Твердые поверхности можно продезинфицировать бытовым отбеливателем с концентрацией 1: 100 или ускоренной перекисью водорода. ^37,38 Машинная стирка мягких тканей должна выполняться с использованием самого длительного цикла, чтобы максимально удалить споры.

МОНИТОРИНГ УСПЕХА ЛЕЧЕНИЯ

Клиническое излечение не всегда приравнивается к микологическому излечению. Таким образом, повторный рост волос и клинический внешний вид пациента могут быть недостаточными критериями для принятия решения о продолжительности лечения. В настоящее время рекомендуется, чтобы мониторинг терапии и установление того, полностью ли пациент излечился, основывались на сочетании устранения клинических признаков и отрицательного результата посева на грибок. ¹ Степень инфицирования можно контролировать путем еженедельного посева. ¹

Мертвые грибковые организмы все еще могут быть обнаружены с помощью ПЦР. Таким образом, положительный результат ПЦР вместе с исчезновением признаков может указывать на то, что у пациента все еще есть споры на шерсти, а не настоящая инфекция. Например, пациенты могут собирать споры в зараженной среде, хотя у них выработался иммунитет и они больше не инфицированы. Эти животные могут представлять собой источник инфекции для окружающих их людей, и может потребоваться дальнейшая дезактивация окружающей среды.Грибковые культуры легко доступны на практике и могут помочь в мониторинге лечения. В случае сомнений можно повторить посев на грибок, чтобы убедиться, что результаты действительно отрицательные.

Длинношерстные кошки склонны к субклиническим дерматофитиям ³⁹ и поэтому являются потенциальными носителями. При вспышке дерматофитоза в доме с несколькими кошками необходимо культивировать каждую кошку, чтобы определить, какие из них действительно отрицательны, а какие клинически нормальны, но имеют артроспоры на своей шерсти и потенциально могут стать источником инфекции для других. ⁴⁰

РЕЗЮМЕ

Дерматофитоз — это зоонозное, но излечимое заболевание. При обследовании пациентов с фолликулитом решающее значение имеет пошаговый логический подход для постановки правильного диагноза. Диагноз может быть поставлен на основании сочетания клинических признаков и положительных результатов посева на грибок. При отсутствии клинических признаков положительные результаты ПЦР или посева могут просто указывать на присутствие артроспор на шерсти без активной инфекции. Поскольку дерматофиты не являются частью обычной флоры, источник артроспор должен быть идентифицирован.Для быстрого выявления инфекции M. canis по-прежнему рекомендуется обследование с помощью лампы Вуда. Большинству пораженных пациентов требуется сочетание местного и системного лечения. Наиболее эффективными пероральными препаратами являются итраконазол и тербинафин, которые можно комбинировать с известковыми серными каплями для местного применения дважды в неделю и / или шампунями, содержащими как миконазол, так и хлоргексидин. Установление того, полностью ли вылечен пациент, должно подтверждаться сочетанием разрешения клинических признаков и отрицательного посева.

Ссылки

1. Мориелло К.А., Койнер К., Патерсон С., Миньон Б. Диагностика и лечение дерматофитоза у собак и кошек: Клинические рекомендации Всемирной ассоциации ветеринарной дерматологии. Ветеринарный дерматол . 2017; 28 (3): 266 – e68.

2. DeBoer DJ, Moriello KA. Гуморальные и клеточные иммунные ответы на Microsporum canis при естественном дерматофитозе кошек.
J Med Vet Mycol . 1993. 31 (2): 121–132.

3.ДеТар Л.Г., Дубровский В., Скарлетт Дж. Описательная эпидемиология и тестовые характеристики кошек с диагнозом Microsporum canis dermatophytosis в приюте для животных на северо-западе США. J Feline Med Surg . 2019; 21 (12): 1198–1205.

4. Мориелло К.А., Стунтбек Р., Маллен Л. Trichophyton видов и Microsporum gypseum инфекция и носительство фомита у кошек из трех приютов для животных: серия ретроспективных случаев. J Feline Med Surg .2020; 22 (4): 391–394.

5. Корнелиани Л., Персико П., Коломбо С. Узловой дерматофитоз собак (керион): 23 случая. Ветеринарный дерматол . 2009. 20 (3): 185–190.

6. Моретти А., Агнетти Ф., Манчианти Ф. и др. Дерматофитии животных: эпидемиологические, клинические и зоонозные аспекты. G Ital Dermatol Venereol. 2013; 148: 563–572.

7 Ди Маттиа Д., Фондати А., Монако М. и др. Сравнение двух методов посева на культуру Microsporum canis с использованием метода взятия проб с помощью зубной щетки. Ветеринарный дерматол . 2019; 30 (1): 60 – e17.

8. Moriello KA, Leutenegger CM. Использование коммерческого анализа количественной ПЦР у 52 кошек из приюта с высоким риском для выявления дерматофитии и микологического излечения. Vet Dermatol. 2018; 29 (1): 66 – e26.

9. Cafarchia C, Gasser RB, Figueredo LA, et al. Улучшенный молекулярный диагностический тест на дерматофитию собак и кошек. Med Mycol. 2013; 51 (2): 136–143.

10. Пири Ф., Махмудабади А.З., Рона А. и др.Оценка вложенной ПЦР пан-дерматофитов по сравнению с обычными методами прямого обнаружения и идентификации агентов дерматофитоза у животных. Микозы. 2018; 61 (11): 837–844.

11. Frost K, Schick A, Mount B. Ретроспективный анализ соответствия внутренней культуры дерматофитов и коммерческого КПЦР из 16 направлений дерматологии в США, 2018–2019 гг. Резюме, представленное на виртуальном Североамериканском форуме ветеринарной дерматологии; 2021 г. 21–24 апреля.

12. Мориелло К., Койнер К., Триммер А. и др. Лечение кошек из приютов пероральным тербинафином и одновременным промыванием известковой серой. Ветеринарный дерматол . 2013. 24 (6): 618–620.

13. Ньюбери С., Мориелло К., Вербрюгге М., Томас С. Использование известковой серы и итраконазола для лечения кошек из приюта, естественно инфицированных Microsporum canis , в дополнительном помещении: испытание в открытом поле. Ветеринарный дерматол . 2007. 18 (5): 324–331.

14. Мориелло К., Койнер К., Триммер А. и др.Лечение кошек из приютов пероральным тербинафином и одновременным промыванием известковой серой. Vet Dermatol. 2013; 24 (6): 618–620.

15. Мориелло К.А. Эффективность in vitro шампуней, содержащих миконазол, кетоконазол, климбазол или ускоренную перекись водорода, против видов Microsporum canis и Trichophyton . J Feline Med Surg . 2017; 19 (4): 370–374.

16. Мориелло К.А. Непосредственная и остаточная противогрибковая активность соединений, используемых для всего тела и адъювантной местной терапии против Microsporum canis : исследование in vitro. Vet Dermatol. 2020; 31 (4): 272 – e64.

17. DeBoer DJ, Moriello KA. Неспособность двух местных препаратов повлиять на течение экспериментально вызванного дерматофитоза у кошек. ЯВМА . 1995. 207 (1): 52–57.

18. Hnilica KA, Medleau L. Оценка местного применения энилконазола для лечения дерматофитии в персидском питомнике. Ветеринарный дерматол . 2002. 13 (1): 23–28.

19. Мориелло К.А. Лечение дерматофитоза у собак и кошек: обзор опубликованных исследований. Ветеринарный дерматол . 2004. 15 (2): 99–107.

20. Хё-Сын, Тэ-Ён К., Сук-Хи Х., Чангбайг Х. Оценка терапевтической эффективности медицинского шампуня, содержащего гидрохлорид тербинафина и хлоргексидин, у собак с дерматофитозом, осложненным бактериальной инфекцией. Дж Биомед Рес . 2013. 14 (3): 154–159.

21. Лян Ц., Шань Ц., Чжун Дж. И др. Фармакокинетика и биодоступность перорального раствора итраконазола для кошек.
J Feline Med Surg .2016; 18 (4): 310–314.

22. Пульс С., Джонсон А., Янг К. и др. Эффективность перорального раствора итраконазола с использованием режима чередующейся недельной пульс-терапии для лечения кошек с экспериментальной инфекцией Microsporum canis . J Feline Med Surg . 2018; 20 (10): 869–874.

23. Colombo S, Cornegliani L, Vercelli A. Эффективность итраконазола в качестве комбинированной непрерывной / импульсной терапии при дерматофитии кошек: предварительные результаты в девяти случаях. Vet Dermatol. 2001; 12 (6): 347–350.

24. Моуби Д.И., Виттемор Дж. С., Фаулер Л. Е., Папич М.Г. Сравнение характеристик абсорбции этраконазола для перорального приема и составных композиций итраконазола у здоровых кошек. JAVMA. 2018; 252 (2): 195–200.

25. Реншлер Дж., Альберс А., Синклер-Маклинг Х., Пшеница Л. Дж.. Сравнение комбинированного, генерического и инновационного итраконазола для собак и кошек. JAAHA. 2018; 54 (4): 195–200.

26. Николс П.Р., Моррис Д.О., Бил К.М. Ретроспективное исследование кожного васкулита собак и кошек. Ветеринарный дерматол . 2001. 12 (5): 255–264.

27. Фуст А.Л., Марселла Р., Акучевич Л.Х. и др. Оценка стойкости тербинафина в шерсти нормальных кошек после 14 дней ежедневной терапии. Ветеринарный дерматол . 2007. 18 (4): 246–251.

28. Котник Т., Козух Эрзен Н., Кузнер Дж., Дробник-Косорок М. Обработка тербинафина гидрохлоридом Microsporum canis , экспериментально вызванного стригущим лишаем у кошек. Vet Microbiol. 2001; 83 (2): 161–168.

29.Медло Л., Чалмерс С.А. Кетоконазол для лечения дерматофитии у кошек. ЯВМА . 1992. 200 (1): 77–8.

30. Бегум Дж., Кумар Р. Распространенность дерматофитоза у животных и тестирование противогрибковой чувствительности изолированных видов Trichophyton и Microsporum . Троп Аним Здоровье Продукт . 2020; 53 (1): 3.

31. ДеБоер Д. Д., Мориелло К. А., Блюм Дж. Л., Фольк Л. М.. Влияние лечения кошек люфенуроном на возникновение и течение инфекции Microsporum canis после контакта с инфицированными кошками. JAVMA. 2003; 222 (9): 1216–1220.

32. Moriello KA, Deboer DJ, Schenker R, et al. Эффективность предварительного лечения луфенуроном для профилактики инфекции Microsporum canis на модели прямого местного заражения кошек. Vet Dermatol. 2004; 15 (6): 357–362.

33. ДеБур Д. Д., Мориелло К. А., Блюм Дж. Л. и др. Безопасность и иммунологические эффекты после инокуляции кошек инактивированной и комбинированной живо-инактивированной дерматофитической вакциной. Am J Vet Res. 2002; 63 (11): 1532–1537.

34. Ньюбери С., Мориелло К., Койнер К. и др. Ведение эндемичного дерматофитоза Microsporum canis в приюте открытого типа: полевое исследование. J Feline Med Surg. 2015; 17 (4): 342–347.

35. Мориелло К.А., Кундер Д., Хондзо Х. Эффективность восьми коммерческих дезинфицирующих средств против Microsporum canis и Trichophyton spp. инфекционные споры на экспериментально загрязненной текстильной поверхности .Ветеринарный дерматол . 2013; 24 (6): 621–623, e151–152.

36. Мориелло К.А. Механическое мытье мисок для кормов для домашних животных эффективно при обеззараживании Microsporum canis . Ветеринарный дерматол . 2019; 30 (5): 428 – e130.

37. Мориелло К.А. Обеззараживание 70 домов приемных семей, подвергшихся воздействию зараженных Microsporum canis кошек: ретроспективное исследование. Vet Dermatol. 2019; 30 (2): 178 – e55.

38. Мориелло К.А. Дезинфицирующие средства для питомников Microsporum canis и Trichophyton sp. Ветеринарная клиника, Международная .
2015; 2015: 853–937.

39. Sattasathuchana P, Bumrungpun C, Thengchaisri N. Сравнение субклинической дерматофитной инфекции у коротко- и длинношерстных кошек. Ветеринарный мир . 2020; 13 (12): 2798–2805.

40. Мориелло К. Дерматофитоз кошек: аспекты, относящиеся к ведению болезней у одной или нескольких кошек. J Feline Med Surg . 2014. 16 (5): 419–431.

Дерматофитоз у собак — симптомы, причины, диагностика, лечение, выздоровление, управление, стоимость

После диагностики дерматофитоза целью лечения будет устранение грибков с кожи собаки, восстановление волос и кожи до нормального состояния и предотвращение распространения заражения других членов семьи.Следовательно, лечение дерматофитоза будет включать сочетание местной, системной терапии и дезинфекции загрязнения окружающей среды.

Местное лечение

Местные средства лучше всего наносить на все тело собаки в виде шампуней, ополаскивателей или окунаний. Ваш ветеринар может посоветовать подстричь или сбрить шерсть вашего питомца, чтобы облегчить лечение. Местное лечение обычно необходимо продолжать не менее 4-6 недель. Некоторые растворы для местного применения, которые оказались эффективными против дерматофитоза, включают сульфид серы, энилконазол, хлоргексидин + миконазол и хлоргексидин + кетоконазол.

Отдельные поражения можно лечить точечно с помощью предписанной противогрибковой мази. После купания или нанесения мази на питомца обязательно вымойте руки и продезинфицируйте все поверхности, с которыми собака контактировала.

Системное лечение

Пероральные противогрибковые препараты, которые может назначить ваш ветеринар, включают гризеофульвин, тербинафин, луфенурон и итраконазол. Каждое из этих лекарств может иметь побочные эффекты, поэтому они должны находиться под строгим прямым ветеринарным наблюдением.Беременным животным никогда не следует давать противогрибковые препараты, поскольку они могут вызвать дефекты подстилки.

Пероральное лечение обычно необходимо продолжать не менее шести недель. Ваша ветеринарная бригада возьмет посевы дерматофитоза через одну-две недели после начала лечения, чтобы определить, инфицирован ли ваш питомец. Обычно два последовательных отрицательных посева указывают на то, что ваш питомец больше не инфицирован.

Санитарная обработка окружающей среды

Споры грибов могут попадать в окружающую среду и заразить других животных или людей в доме.Жилую среду вашего питомца необходимо часто дезинфицировать, пылесосить и мыть шваброй. Кровать и игрушки вашего питомца необходимо мыть.